Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri – UFVJM

Faculdade de Ciências Biológicas e da Saúde – FCBS

Departamento de Farmácia

Análise de Aula Prática 2 - Dosagem de Glicose

Discentes: Bianca de Oliveira Andrade, Jordania Thaís da Conceição, Lucas Ramos

dos Santos e Paulo César de Almeida Júnior.

Docente: Valéria Almeida.

1- Explique o princípio do funcionamento de um espectrofotômetro, indicando

suas principais partes.

Um espectrofotômetro é um instrumento utilizado para medir a absorvância ou

transmitância de uma substância em diferentes comprimentos de onda da luz. O
princípio básico de operação do espectrofotômetro é que a luz da fonte passe através
da amostra e seja absorvida em diferentes graus, dependendo das propriedades da
substância em diferentes comprimentos de onda. A absorbância ou transmissão da luz
é medida pelo detector e está relacionada à concentração da substância na amostra,
utilizando a Lei de Beer-Lambert.

As principais partes do espectrofotômetro são:

1. Fonte de Luz: fornece a radiação eletromagnética necessária;

2. Monocromador ou Filtro: seleciona o comprimento de onda desejado;
3. Cubeta: contém uma amostra a ser comprovada;
4. Detector : converte a luz transmitida pela amostra em um sinal elétrico;
5. Eletrônicos : amplificam, processam e exibem os dados;
6. Visor Digital : exibe os valores de absorção ou transmitância;
7. Porta USB ou Conexão para Computador: para transferência de dados ou
controle remoto do espectrofotômetro.

2- Defina absorbância, transmitância e comprimento de onda.

Absorbância: é uma medida da quantidade de luz absorvida por uma substância em

uma determinada faixa de comprimento de onda. Ela é expressa como o logaritmo
negativo da razão entre a intensidade da luz incidente (I₀) e a intensidade da luz
emergente (I). Quanto maior a absorção, maior a quantidade de luz absorvida pela
substância. A absorbância é frequentemente usada em espectrofotometria para
quantificar a concentração de uma substância em uma solução, sendo diretamente
proporcional à concentração da substância.

Transmitância: é uma medida da fração de luz que passa através de uma substância
sem ser absorvida. Ela é expressa como a razão entre a intensidade da luz emergente
(I) e a intensidade da luz incidente (I₀), geralmente multiplicada por 100 para ser
expressa em porcentagem. Quanto maior a transmissão, mais luz passa através da
substância sem ser absorvida. A transmitância é frequentemente usada em
espectrofotometria como uma medida complementar à absorção.

Comprimento de onda: é uma medida da distância entre dois picos consecutivos de

uma onda eletromagnética, como a luz. É geralmente representado pela letra grega
lambda (λ) e é medido em unidades como nanômetros (nm) ou angstroms (Å). O
comprimento de onda determina a cor da luz visível e também está relacionado à
energia e à interação da luz com a matéria. Em espectrofotometria, diferentes
comprimentos de onda são selecionados para analisar como uma substância interage
com a luz em diferentes regiões do espectro eletromagnético.

3- Quais são as limitações para o emprego da Lei de Lambert-Beer?

A Lei de Lambert-Beer é uma relação fundamental na espectroscopia de observação

que descreve a relação entre a absorbância de uma amostra e a concentração da
espécie absorvente, bem como o caminho óptico através da amostra. Embora seja uma
ferramenta poderosa e amplamente utilizada, ela apresenta algumas limitações:

Linearidade: a Lei de Lambert-Beer é válida apenas para soluções diluídas, onde a

concentração da espécie absorvente é baixa e a interação entre as moléculas é mínima.
Em concentrações mais altas, pode ocorrer desvios da linearidade devido a
especificidades de interação entre as moléculas, como agregação ou autoabsorção.

Faixa de Comprimento de Onda: é aplicável apenas a uma faixa limitada de

comprimentos de onda, onde a absorção é proporcional à concentração da substância.
Fora dessa faixa, outras interações e processos podem ocorrer, levando a desvios da
linearidade.

Espectros Complexos: em sistemas que contêm mais de uma espécie absorvente,

com sobreposição de espectros de absorção, a Lei de Lambert-Beer pode não ser
aplicável diretamente. Nestes casos, técnicas mais avançadas, como espectroscopia
multivariada, podem ser permitidas para analisar as espectros com precisão.

Variações nas Condições Experimentais: variações de temperatura, pressão,

solvente e composição da matriz podem afetar a aplicabilidade da Lei de
Lambert-Beer. Estas variações podem influenciar os coeficientes de absorção molar e
o caminho óptico, levando a erros na quantificação da concentração.

Limitações Instrumentais: fatores como largura de banda espectral do instrumento,

não linearidade do detector, e desvios no comprimento do caminho óptico podem
introduzir erros na aplicação da Lei de Lambert-Beer.

4- Represente as reações envolvidas no método da glicose oxidase e indique o

analito e o cromógeno?

O analito nessa reação será a glicose e o cromógeno será a antipirilquinonimina que

produz cor vermelha, que no qual a intensidade da cor é proporcional a concentração
de glicose na amostra sanguínea.

5-Defina metodologia enzimática colorimétrica?

A metodologia enzimático-colorimétrica é um método analítico utilizado para

quantificar a atividade enzimática de uma amostra através da medição de uma
mudança de cor produzida por uma reação enzimática específica. Este método envolve
o uso de um substrato reconhecido e convertido pela enzima em um produto colorido
ou que produz um composto colorido como resultado da reação enzimática.

6-Defina metodologia de ponto final?

A metodologia de ponto final é uma abordagem utilizada em ensaios bioquímicos e

análises laboratoriais para determinar uma medida específica em uma reação química
ou bioquímica. Nesse método, a medição ocorre em um único momento, após a
conclusão da reação, quando se considera que a reação atingiu seu estado final.
7-Por que na dosagem de glicose foi necessário incubar a amostra por 10 minutos
a 37°C?

Ativação enzimática: A atividade ótima da enzima ocorre em torno de 37 graus

Celsius. Portanto, a incubação a essa temperatura garante que a enzima esteja ativa e
eficiente na conversão da glicose presente na amostra.

Estabilidade da reação: A temperatura de incubação constante ajuda a garantir que a

reação ocorra de forma consistente e completa. Variações de temperatura podem afetar
a velocidade e a eficiência da reação enzimática, levando a resultados imprecisos.

Tempo suficiente para reação: A incubação por 10 minutos permite que a enzima
converta quantidades adequadas de glicose na amostra em produtos que podem ser
detectados e medidos. Esse período de tempo é suficiente para que a reação alcance
seu estado de equilíbrio, proporcionando resultados confiáveis e reproduzíveis.

8- Para a dosagem, de glicose por metodologia enzimático-colorimétrica podemos

utilizar amostra de plasma fluoretado ou de soro.

a. Qual é a importância do uso de anticoagulante contendo fluoreto de sódio para

a dosagem da glicose?

O anticoagulante fluoreto age como inibidor da glicólise, ou seja, ele impede a

degradação da glicose após a coleta da amostra de sangue. Isso é importante porque
evita que a glicose presente na amostra seja metabolizada pelas células sanguíneas
antes que a análise laboratorial seja realizada.

b. Porque ao utilizar o soro, este deve ser separado imediatamente após a

centrifugação da amostra?

Para evitar a coagulação, se o soro não for separado imediatamente após a coleta, pode
haver ativação das vias de coagulação resultando em formação de coágulos.
Para evitar a metabolização, pois no soro contém várias substâncias como a glicose, se
a separação não for feita após a centrifugação ainda há atividade metabólica das
células sanguíneas presentes na amostra. Dessa forma, pode haver uma utilização da
glicose pelas células, diminuindo sua concentração na amostra e consequentemente
um erro nos resultados do exame.
E também para evitar contaminações microbiológicas.
9- Em um laboratório, durante a dosagem de glicose pelo método enzimático
colorimétrico de ponto final foram obtidas as absorbâncias a seguir. Calcule
valor da concentração de glicose e nas amostras e análise os resultados com base
nas Diretrizes da Sociedade Brasileira de Diabetes Mellitus

Concentração do padrão: 100 mg/dl.

Absorbância do Padrão: 0,128

Absorbâncias das amostras:

Paciente Absorbância

Anita Vittar 0,082

Simone Maraisa 0,230

Luan Mioto 0,102

1- Anita Vittar: 0,082 ÷ 0,128 × 100= 64,1 mg/dL

Fator de calibração: 100mg/dL ÷ 0,128 = 781,25
Glicose: 0,082 × 781,25=64,1 mg/dL

2- Simone Maraísa: 0,230 ÷ 0,128 × 100=179,7 mg/dL

Fator de calibração: 100mg/dL ÷ 0,128 = 781,25
Glicose: 0,230 × 781,25=179,7 mg/dL

3- Luan Mioto: 0,102 ÷ 0,128 × 100= 79,7 mg/dL

Fator de calibração: 100mg/dL ÷ 0,128 = 781,25
Glicose: 0,102 × 781,25= 79,7 mg/dL

Com isso, conclui-se de acordo com as Diretrizes da Sociedade Brasileira de Diabetes

Mellitus, que o paciente 1 está com a glicemia baixa (<70 mg/dL), o paciente 2 está
com a glicemia alta (>100 mg/dL) e o paciente 3 está com a glicemia boa, pois não
está menor que 70mg/dL e nem maior que 100mg/dL.