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UNIVERSIDADE NILTON LINS

CURSO DE BIOMEDICINA

RELATÓRIO AULA PRÁTICA: COLESTEROL

MANAUS/AM

2023
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ALUNAS: INAELI PAIXÃO DE ZOUZA

JANINA NILO GONÇALVES

KELLINAYRA MOREIRA DA SILVA BATISTA

LAYANNA CASTRO DE ASSUNÇÃO

RELATÓRIO AULA PRÁTICA: COLESTEROL

Trabalho apresentado para a Disciplina

Bioquímica das Doenças Metabólicas, do
curso de Bacharelado em Biomedicina da
Universidade Nilton Lins, ministrada pela
Prof.ª Jéssica Brandão.

Turma: LMB041

MANAUS/AM

2023
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1. INTRODUÇÃO

O presente trabalho tem como objetivo de apresentar procedimentos para a análise quantitativa
do colesterol no soro/plasma humano. As medidas do nível de colesterol irão fornecer para você os
dados necessários para avaliar o risco de doença cardiovascular e para prevenir, o tanto quanto for
possível, um evento cardiovascular como infartos e derrames.

O colesterol é um tipo de gordura importante para manter o organismo saudável, ele trafega em
nosso sangue através de partículas chamadas de lipoproteínas. Três das lipoproteínas comuns são:
lipoproteínas de baixa densidade (LDL), lipoproteínas de alta densidade (HDL), e lipoproteínas de muita
baixa densidade (VLDL).

O colesterol alto, também chamado de hipercolesterolemia, é quando existe grande

concentrações dessa substância no sangue, podendo causar sintomas como barriga inchada e sensível,
e bolinhas de gordura na pele.
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2. PARTE EXPERIMENTAL

Materiais:

• Amostra de 1ml de sangue (sem jejum);

• Seringa;
• Algodão;
• Álcool 70;
• Garrote;
• Luvas;
• Tudo de ensaio;
• Cubeta;
• Banho Maria;
• Espectrofotômetro;
• Pipeta Graduada;
• Reagente

3. OBJETIVO

Realizar a dosagem de colesterol no sangue e comparar os resultados encontrados com os

valores de referência através do teste enzimático colorimétrico para determinação de colesterol total.
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4. PROCEDIMENTOS

Procedimento 1

Fonte: Autoria Própria

Realizamos a coleta de 1ml de sangue na seringa

• Colocamos a agulha na ponta da seringa, sem retirar dela a sua capa protetora. Com cuidado
para não tocar na parte inferior da agulha e a manuseamos apenas pela capa;

• Pressionamos o êmbolo da seringa, retirando dela todo o ar;

• Foi adicionado garrote no braço da cobaia e pedimos que ele feche a mão;

• Foi feita a escolha a veia que será puncionada delicadamente

• Realizada a assepsia da pele, utilizando álcool 70% e algodão e não tocando mais no local que
foi limpo;

• Foi retirada a capa da agulha, pedindo que que a cobaia abra a mão e faça rapidamente e
cuidadosamente a punção da veia;

• O garrote foi retirado logo o sangue flua pela seringa;

• Foi retirado 1,0 ml de sangue da cobaia;

• Foi retirado a agulha da seringa e foi colocada em uma embalagem apropriada para perfurantes;
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Em seguida colocamos a amostra no tubo de ensaio amarelo junto com o gel separador. O tubo
possui gel separador que impede a mistura entre células sanguíneas e plasma, assim facilitando a
separação.

Procedimento 2

Fonte: Autoria Própria Fonte: Autoria Própria

Após adicionar a substância, colocamos para centrifugar durante 10 min. O nível de água do
tubo deve ser superior ao nível de reagentes nos tubos de ensaio.

Marcar os tubos de ensaio e adicionar os volumes conforme o quadro abaixo:

Tubos B (branco) Teste Padrão

Soro - 10 µL -
Padrão (1) - - 10 µL
Reagente de cor (2) 1,0 ml 1,0 ml 1,0 ml
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Procedimento 3

Fonte: Autoria Própria Fonte: Autoria Própria

Fonte: Autoria Própria

Após tirar a mostra da centrífuga, realizamos o processo de espectrofotometria zerando o

aparelho e determinando as absorbâncias da amostra padrão, utilizando o tubo controle (branco) no
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espectrofotômetro, cuja função é medir e comparar a quantidade de luz (energia radiante) absorvida por
uma determinada solução.

Adicionamos 10 uL da amostra do plasma e adicionamos a 1,0 ml de reagente de cor

(enzimático) que contém as enzimas envolvidas na determinação analítica (especificadas nas reações).
Após isso, aquecemos no banho maria manual durante 10 min, vendo a mudança na coloração. E por
fim, adicionamos a amostra dentro do espectrofotômetro.

Neste processo, a luz irá atravessara a fenda e chegar até o monocromador, ou seja,
prisma/outro elemento difrativo. Nisso, irá permitir que apenas o comprimento de onda específica
chegue na amostra. Este comprimento de onda passa pela fenda, atravessa a amostra (dentro da cubeta)
e a luz atravessada na amostra é lida pelo detector liberando o resultado. Após todo os processos,
obtivemos os seguintes números:

Absorbância do padrão=0,674

Absorbância do teste= 0,390

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Procedimento 4

Fonte: Autoria Própria

Cálculo matemático do Colesterol com os valores de absorbância, assim obtendo o seguinte resultado:

Absorbância do teste x 200 = 0,390 x 200= 115,72 mg/dl

Absorbância do padrão 0,674

Valores de Referência- Colesterol total

Valores em mg/dl
Ideal Menor que 200
Superior Entre 200 e 240
Indesejável Maior que 240
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5. RESULTADOS

Colesterol
Amostra Média de análise Valor de Referência Resultado

115,72 Níveis
1 Desejável:<200
normais

Alto risco>200

6. DISCUSSÕES

1) Descreva sobre o Espectrofotômetro, incluindo sua finalidade e os exames realizados.

É um aparelho que é utilizado em laboratórios, que tem a função de medir e comparar a

quantidade de luz (energia radiante) absorvida por uma determinada solução. Ele mede a concentração
de substâncias, que absorvem energia radiante, em um líquido ou solução. É muito útil em análises
clínicas e bioquímicas, pois permite a quantificação de substâncias como proteínas, ácidos nucleicos e
enzimas. Seu uso também pode ser aplicado no setor petroquímico, cosmético, indústria de bebidas,
rações, indústria farmacêutica e biologia molecular

2) Em que consiste a técnica de Espectrofotometria?

A espectrofotometria é uma técnica analítica, aonde uma fonte de luz atravessa uma fenda que
vai chegar no monocromador, após, uma fenda na saída do monocromador, vai permitir que ondas
específicas cheguem na amostra, a qual estará numa cubeta, assim que a luz atravessa a amostra, é lido
pelo detector. E assim ele mede as concentrações das soluções, através da luz com a matéria.

3) Em que consiste a Absorbância na Espectrofotometria?

Consiste na medida quantitativa da absorção da luz pelas soluções, já que a concentração na

solução da substância absorvente é proporcional à quantidade de luz absorvida. E o número de fótons
absorvidos por uma solução é chamado de leitura de absorbância.
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4) Quais as vantagens da espectrofotometria?

A espectrofotometria além de ser usada para examinar a estrutura e função de biomoléculas,

também pode ser usada para pesquisar as características das moléculas e identificar substâncias
desconhecidas.

5) Qual a unidade de medida de um espectrofotômetro?

A unidade de medida de um espectrofotômetro é a absortividade. A absortividade não possui

unidade.

6) O que diz a Lei de Lambert?

As leis de Lambert-Beer são o fundamento da espectrofotometria. Elas são tratadas

simultaneamente, processo no qual a quantidade de luz absorvida ou transmitida por uma determinada
solução depende da concentração do soluto e da espessura da solução. “A absorbância é diretamente
proporcional a concentração da solução de amostra.”
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7. CONCLUSÃO

O trabalho teve como objetivo de mostrar a análise da dosagem de colesterol, desse modo,
apresentou resultados satisfatórios para a equipe, tendo como valor 115 mg/dl, sendo um valor normal
dentro dos valores de referência do colesterol.

Foi de extrema importância o conhecimento de análise do colesterol dentro dos parâmetros,

assim podendo conhecer os processos analíticos de forma prática para chegar no resultado desejado,
onde puderam ser compreendidos de forma mais clara.
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8. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Fundamentos de Química Analítica - West, Donald M.; Holler, F. James; Skoog, Douglas

LABTEST Diagnóstica – Colesterol HDL (COD–ANA). Cat. 13. Instruções de uso. Minas

Lenhinger, Albert Lester; Princípios de Bioquímica.3.ed. Guanabara Koogan, Rio de Janeiro:1992.

cp.3.