Introdução

A espectrofotometria é um método de análise que estuda a interação qualitativa e

quantitativa de absorbância da radiação eletromagnética com a matéria; cada composto
químico absorve, transmite ou reflete luz ao longo de um determinado intervalo de
comprimento de onda. la tem como principal objetivo quantificar e identificar a
concentração dos compostos em uma solução, sendo muito usada em laboratórios de
análises clínicas.
Grande parte dos métodos de análise bioquímica envolve a determinação
espectrofotométrica de compostos corados, obtido pelas reações que resultam em
soluções coloridas são aparelhos responsáveis pela medição da intensidade de cor, e
possuem: uma fonte estável de energia radiante; um seletor de faixa espectral
(monocromatizadores como os prismas, para selecionar o comprimento de onda da luz
que passa através da solução de teste); um recipiente para colocar a amostra a ser
analisada (cubetas e tubos de ensaio); e um detector de radiação, que permite uma
medida relativa da intensidade da luz).
Quando um feixe de luz monocromática atravessa uma solução com moléculas
absorventes, parte da luz é absorvida pela solução e o restante é transmitido, a
absorbância de luz é medida de 0 a 1 e depende dos seguintes fatores da lei de Lambert-
Beer: cor do composto ou do tipo de ligações químicas presente; do tamanho da
partícula; da transparência da solução; e a combinação dos fatores acima. Portanto, a
intensidade da absorção é proporcional à concentração da solução, quanto mais
concentrada for à solução, maior será a absorção de luz; por outro lado, a cor da solução
é determinada pela cor da luz transmitida. (HARGREAVES, AB. Métodos de Análises -
Fotocolorimetria e pHmetria. Rio de Janeiro: Atheneu, 1979.)

Objetivo

Estimou-se a concentração de uma espécie química por meio de absorção da energia luminosa
incidente sobre esta, utilizando o método espectrofotométrico.

Material

• Pipeta graduada de 1,0 mL

• Pipeta graduada de 2,0 mL
• Pipeta graduada de 5,0 mL
• Tubos de ensaio
• Estante para tubos de ensaio
• “pêra” de borracha
• Indicador azul de metileno 6,0 μg.mL-1
• Espectrofotômetro UV-Vis
• Cubetas de plástico (1,0 cm de espessura)
• Pisseta com água deionizada
• Caneta marca tubo

Método

Identificou-se os tubos de ensaio de 1 a 7 e o tubo da amostra X e preparou todos os tubos de

ensaio de acordo com sua composição disposta na tabela abaixo.
Foi calculado as concentrações do indicador em cada tubo
As leituras de absorvância a 660 nm (A660nm) foram realizadas no espectrofotômetro e seus
valores anotados na coluna indicada na tabela
No espectrofotômetro, ajustou-se o zero do aparelho com o tubo número 1 (branco) contendo
apenas água deionizada. Em seguida, foi mensurado a absorvância de todos os tubos no
comprimento de onda correspondente à absorção máxima do azul de metileno
Com os dados obtidos, foi feito um gráfico da absorvância em função da concentração do
indicador (Abs x Concentração) e por meio da curva padrão obtida, determinou-se a
concentração de azul de metileno na amostra fornecida (amostra X).

Resultados e Discussão

Após calcular a concentração do indicador de cada tubo, obtivemos os seguintes resultados:

(M1.V1= 2.V2)
Tubo 1: 6x0,2=M2x4= 0,3
Tubo 2: 6x0,4=M2x4= 0,6
Tubo 3: 6x0,8=M2x4= 1,2
Tubo 4: 6x1,2=M2x4= 1,8
Tubo 5: 6x1,6=M2x4= 2,4
Tubo 6: 6x2,0=M2x4= 3,0

Colocados no espectrofotômetro e feito a leitura de suas absorvâncias, completou-se a tabela :