UNIVERSIDADE DE CAXIAS DO SUL

TOXICOLOGIA
PROF. DR. LEANDRO TASSO

PREPARAÇÃO DA AMOSTRA

1. Precipitação de proteínas

• Colocar 0,4 mL de sangue em três eppendorf (1, 2 e 3)

• Centrifugar a 13.000 rpm por 2 minutos
• Retirar o sobrenadante e transferir para outros eppendorfs (4, 5 e 6)
• Eppendorf 4: Adicionar 0,4 mL de MeOH
• Eppendorf 5: Adicionar 0,8 mL de MeOH
• Eppendorf 6: Adicionar 0,8 mL de ácido tricloroacético
• Agitar em vórtex por 10 segundos
• Centrifugar a 13.000 rpm por 2 minutos
• Observar o resultado
• Retirar o sobrenadante e transferir para outros eppendorfs (7, 8 e 9)
• Recentrifugar a 13.000 rpm por mais 2 minutos
• Observar o resultado

# O que pode ser concluído?

2. Extração líquido-líquido (ELL)

• Colocar 10 mL de urina no funil de decantação (pêra de decantação ou ampola de decantação) e

medir o pH
• Ajustar o pH entre 4-5 com solução de HCl 2%
• Adicionar 5 mL de uma solução saturada de NaCl
• Extrair com 20 mL de uma mistura de n-hexano:acetato de etila (1:1), agitando-a. Deixar decantar
• Remover a fase aquosa
• Filtrar a camada orgânica sobre Na2SO4 anidro e recolher em béquer (50 mL)
• Evaporar o solvente até a secura e reservar o resíduo obtido

# O analito de interesse a ser extraído tem caráter básico ou ácido de acordo com a metodologia
proposta?

3. Extração em fase sólida (SPE manual) – demonstrativo pelo professor

• Condicionar o cartucho (2 mL de MeOH e 2 mL de água)

• Introduzir a amostra de urina (2 mL)
• Lavar o cartucho (clean up) (4 mL de água). Recolher o resíduo
• Eluir os analitos (3 mL de diclorometano)