MICROSCOPIA

Prof: Amanda de Avila Bicca Martins

BOA NOITE!
COMEÇAREMOS EM
ALGUNS MINUTOS!
Prof: Amanda de Avila Bicca Martins
Curso: Biomedicina
Disciplina: Laboratório de Instrumentação
Biomédica
Aula: Microscopia e Preparo de Soluções

Prof: Amanda de Avila Bicca Martins

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!
Objetivos de aprendizagem:
• Fornecer aos alunos conhecimento teórico sobre a utilização da
principal ferramenta de trabalho do profissional biomédico: o
microscópio;

• Abordar as principais características do microscópio de luz,

bem como sua anatomia detalhada, favorecendo a leitura e a
análise de materiais biológicos pelo profissional da saúde
habilitado.

• Demonstrar para os alunos os principais conceitos aplicados à

produção de soluções de laboratório e às principais
metodologias matemáticas para uma correta dissolução e
diluição de soluções e amostras de interesse.
Introdução ao Tema
● Microscópio: duas palavras gregas e quer dizer “pequeno” e
“observar”.
● Zacarias Janssen, óptico holandês → suposto inventor
● Depois desse, muitos outros modelos foram aperfeiçoados para as
mais variadas aplicações, que vão desde a Biologia até, mais
recentemente, à Microeletrônica e à Astronomia
● Avanço da Eletrônica e da Engenharia→ produção de
instrumentos ópticos de grande precisão e comodidade para
quem os utiliza.
 Microscópio Óptico – Aspectos Gerais
O microscópio apresenta dois sistemas de lentes
convergentes:

Objetiva - conjunto de lentes que apresenta pequena

distância focal e que fornece uma imagem real e
aumentada do objeto que é observado.

Ocular - também formada por lentes convergentes,

funciona como uma lupa, que nos dá uma imagem
virtual e aumentada da imagem real que se formou
pela objetiva.
 Microscópio Óptico – Aspectos Gerais
Componentes do Microscópio:
Constituição simples, é formado por três
elementos:
● sistema óptico de ampliação
● fonte de luz
● estágio de visualização.

Resolução: A luz pode ser obtida tanto na

forma de ondas quanto na forma de partículas.
Para fins de explicação dos resultados
experimentais, usa-se o conceito de ondas; para
outros, o conceito de partículas
 Microscópio Óptico – Aspectos Gerais
SISTEMA ÓPTICO
1. Sistemas de Iluminação (abaixo da platina):
a) Fonte de luz;
a luz da fonte luminosa do microscópio, geralmente
uma lâmpada embutida no equipamento,

b) Condensador;
passa pelo condensador, que forma um cone de luz
bem definido, concentrando a luz em direção à
amostra. A luz passa pela amostra e, em seguida,
pela objetiva que, então, projeta uma imagem real,
invertida e aumentada da amostra.
 Microscópio Óptico – Aspectos Gerais
SISTEMA ÓPTICO
1. Sistemas de Iluminação (abaixo da platina):
c) Diafragma;
equipa o condensador é responsável pelo controle
da abertura angular do cone de luz para a
iluminação da amostra

d) Objetiva;
primeira lente de um microscópio de luz é a que
está mais próxima do objeto sendo examinado
(amostra)
 Microscópio Óptico – Aspectos Gerais
SISTEMA ÓPTICO
Sistemas de Iluminação (abaixo da platina):
e) Ocular(es);
mais distante componente óptico da amostra e
serve para aumentar, posteriormente, a imagem
real projetada pela objetiva. Dessa forma, a ocular
produz uma imagem secundária aumentada, que é
captada pelo olho do observador.

AUMENTO TOTAL DO OBJETO OBSERVADO:

aumento da ocular X aumento da objetiva
Ex.: ao se usar uma ocular de 10X com uma objetiva
de 4X, a imagem final do objeto estará aumentada
40X.
 Microscópio Óptico – Aspectos Gerais
ESPECIFICAÇÕES DA LENTE OBJETIVA

Algumas características influenciam na qualidade da

imagem, oferecendo maior ou menor grau de correção
de aberrações.

Tipos de objetivas, de acordo com a qualidade óptica:

1. Acromáticas: são as mais simples e baratas, presentes em microscópios comuns;
2.Semiapocromáticas: construídas com fluorita, um material que proporciona alguma
correção para aberrações;
3. Apocromáticas: fornecem correção ampla para as aberrações;
4. Planacromáticas: além de proporcionar correção, são ótimas para fotomicrografias, pois o
campo fica todo em foco;
5. Planapocromáticas: são as melhores e as mais caras, combinando as correções das
apocromáticas e planacromáticas, o que resulta em grande resolução.
ESPECIFICAÇÕES DA LENTE OBJETIVA

Códigos de cores das lentes objetivas:

Cada lente objetiva tem uma marcação (anel) com

determinada cor, que ajuda na identificação rápida do
aumento a ser utilizado.

Bastante útil quando se utiliza um equipamento

contendo muitas objetivas.

As objetivas de imersão têm código adicional de cor,

que indica o meio de imersão que deve ser usado.
Sistema Mecânico

● Um microscópio, para ser realmente útil, deve ter

uma boa estabilidade mecânica.

● A base e o braço de um microscópio devem fornecer

uma rígida estrutura de suporte para a plataforma de
amostra (ou platina) e o corpo como um todo

● Em um microscópio, há dois sistemas de

focalização da amostra:

Focalização comum - primeiro passo da focalização.

Na maioria dos modelos modernos, o movimento é
feito pelo plano de amostra.
Focalização fina - movimentos são precisamente
controlados para obter uma profundidade de foco
em torno de 0.2um ao usar objetivas de alta potência
de ampliação.
https://www.youtube.com/watch?v=rBFQ9lqPryo
PREPARO DE SOLUÇÕES
Prof: Amanda de Avila Bicca Martins
• Solução: mistura homogênea de substâncias puras (átomos,
moléculas ou íons) na qual não há precipitação. Suas propriedades
físicas e químicas podem não estar relacionadas às substâncias
originais.

• Substância pura: substância com composição característica e Por exemplo, a temperatura de

fusão do gelo e da salmoura é
definida, com um conjunto definido de propriedades, exemplos: menor que a temperatura de fusão
da água e do sal.
água, ferro (Fe), sal (NaCl), açúcar comestível, oxigênio (O2);

• Fase: região distinta em um Sistema, na qual todas as propriedades

são as mesmas. A visualização das fases pode ser feita a olho nu ou
através de microscópio. Estados físicos diferentes caracterizam fases
diferentes;
• Solvente: substância presente em maior quantidade em uma solução, por meio da qual
as partículas do(s) soluto(s) são preferencialmente dispersas. É muito comum a utilização
da água como solvente, originando soluções aquosas;

• Soluto: substância(s) presente(s) em menor quantidade em uma solução. Por exemplo,

ao preparar uma xícara de café solúvel, temos como soluto o café e o açúcar, e como
solvente a água quente;

• Concentração do soluto: é a proporção entre soluto e solvente em uma solução. A

composição de uma solução é expressa pela concentração de um ou mais de seus
componentes;

• Soluções concentradas e diluídas: são indicações qualitativas da proporção entre o

soluto e o solvente na solução. É incorreto dizer que uma solução é forte ou fraca, pois
esses termos apresentam outros significados em química, indicando a força de
eletrólitos;
• Solução insaturada: quantidade de soluto dissolvido menor que a sua solubilidade. É aquela que
tem uma concentração de soluto menor do que a de uma solução saturada, podendo, ainda,
dissolver soluto adicional até se tornar uma solução saturada;
• Solução saturada: solução em que quantidade de soluto dissolvido igual à sua solubilidade.
É aquela que, ao se ir adicionando um soluto sólido a um solvente, atinge o ponto de equilíbrio,
que é quando não há mais condições de dissolução desse soluto;
• Solução supersaturada: é aquela que tem uma concentração de soluto maior do que a de uma
solução saturada. É uma solução instável, não havendo equilíbrio de solubilidade e seu soluto
tende a se cristalizar.
Essa situação é possível quando uma solução saturada, sob certas condições, é colocada em
condições diferentes de temperatura, nas quais o soluto é menos solúvel, retendo, assim, mais
soluto do que reteria na temperatura original;

• Solubilidade: solubilidade do soluto é a quantidade necessária para formar uma solução saturada
numa dada quantidade de solvente;
• Mistura: são duas ou mais substâncias diferentes juntas em um mesmo Sistema.
Podem ser classificadas em: homogêneas (soluções) e heterogêneas.

As propriedades de uma mistura

=
combinação das propriedades dos seus componentes

Misturas heterogêneas: propriedades são uma

combinação das propriedades das substâncias
individuais. Existe um método comum de
laboratório para identificar uma solução de uma
mistura heterogênea, que se baseia na medida da
temperatura de mudança de fase.
Tipos de Solução

As soluções podem ser classificadas quanto ao

seu estado físico: sólido líquido ou gasoso.
As soluções podem ser classificadas quanto ao seu tipo de dispersão:

solução dispersão coloidal dispersão coloidal

o sentido amplo, é uma
dispersão homogênea diâmetro das partículas se situa partículas do disperso possuem
de duas ou mais entre 10 e 1000 Å diâmetro superior a 1000 Å
substâncias
moleculares ou iônicas.

o âmbito mais restrito,

as dispersões que
apresentam as
partículas do disperso
(soluto) com um
diâmetro inferior a 10 Å
são denominadas
soluções
https://www.youtube.com/watch?v=DN_iD1rsKZs
 Cálculo para Preparo de Soluções

Para darmos início aos cálculos para o preparo de soluções, algumas unidades de
medida importantes devem ser destrinchadas:
Fórmulas de importância laboratorial:
sendo:
m = massa (em gramas);
V = volume (em mililitros);
MM = massa molar (em gramas por mol)
Expressão de
concentração de
soluções:
concentração de uma
solução
=
relação entre a quantidade
do soluto e a quantidade
do solvente ou da solução
há diversas formas de
expressar a concentração
de soluções: massa, volume
ou quantidade de matéria
Diluição :
Com frequência, é necessário preparar uma solução diluída a partir de uma
solução mais concentrada. Diluir uma solução significa adicionar a ela mais
solvente, não alterando a massa do soluto. O princípio básico da diluição é que o
número de mol do soluto é o mesmo na alíquota da solução concentrada e na
solução diluída final. Exemplo: rótulo da água sanitária,
Assim, é necessário calcular a quantidade de preparo de soluções entre
soluto (sólido ou líquido) que será necessária líquidos, as vidrarias utilizadas
para preparar uma solução de concentração são a pipeta volumétrica e o
definida. balão volumétrico

Quando o solvente atingir o

traço de aferição, observa-se a
formação de um menisco.
https://youtu.be/kes0efmdLyg
Para soluções translúcidas, a leitura sempre se faz na parte inferior do menisco

Para soluções não translúcidas, a leitura se faz na parte superior do menisco.

Fatores que Influenciam na Solubilidade
Vários fatores afetam a quantidade
de soluto que pode ser dissolvido em
um solvente.

Logicamente, a natureza de ambos é

fator crucial no processo de
dissolução,

• Agitação: agitação da solução

possibilita que partes novas de
solvente fresco entrem em contato
com o soluto.
Fatores que Influenciam na Solubilidade
• Temperatura: este fator influencia na
velocidade na qual o soluto se dissolve,
- energia cinética das moléculas, a
frequência e a força de suas
colisões
- solubilidade da maioria das
substâncias sólidas e líquidas em
um solvente líquido aumenta com
o aumento da temperatura.
Fatores que Influenciam na Solubilidade
• Pressão: em geral, tem pouco efeito
sobre a solubilidade de líquidos ou
sólidos em solventes líquidos.
A solubilidade de gases, todavia,
sempre aumenta com o aumento da
pressão.
https://www.youtube.com/watch?v=Yp5wkTTYrm4