Universidade Federal da Bahia - UFBA Bibliografias Básicas

Instituto Multidisciplinar em Saúde - IMS

Biologia molecular do gene / 2006

WATSON, James D. Biologia molecular do gene. Porto Alegre, RS: Artmed,

2006. xxxi, 728 p. ISBN 9788536306841 (enc.).

Capitulo 14 e 15

Biologia Molecular

Tradução

Ricardo Fraga

1. Introdução - Continuação

- Proteínas: Produtos finais da maioria das vias de informação. - Síntese ocorre em resposta às suas necessidades;
- Célula: Diferentes proteínas em respostas às necessidades - Transportada para sítios específicos (endereçadas);
celulares. - Degradadas ao fim da sua necessidade.
- Gene: sequência de DNA que codifica uma cadeia - 90% da energia celular é destinada às reações
polipeptídica e sequências que codificam RNAr, RNAt e biossintetizantes.
outras espécies de RNAs;
Características: Funções:
- Regulação da expressão gênica:
Abundantes • Enzimática
- Célula responda a mudanças em seu ambiente; • Estrutural
- Coordenar suas atividades nos tecidos do organismo. • Regulatória
Variáveis • Síntese de DNA: manutenção e
- Sequências regulatórias; transmissão da informação
- Genes estruturais: codificam as proteínas; genética etc.
- Sequências de fim de transcrição e tradução.

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 2. O Código Genético (CG)

- Como a sequência de nucleotídeos

(A, U, C e G) codifica cerca de 20
aminoácidos (aas)?

- 1 nt = 1aa = 41 = 4 aas (insuficiente)

- 2 nt = 1aa = 42 = 16 aas (insuficiente)
- 3 nt = 1aa = 43 = 64 aas (suficiente)

- Códon: sequência de 3 nt. (no DNA ou

RNA) que codifica um aa.

- Continuação
• Década de 60:

- Marshall Niremberg & Heinrich Matthaei:

- Poli (U) + aa marcados = poli (Phe).

- mRNAs,
- Poli (A): AAA = Lys
- Poli (C): CCC = Pro - tRNAs,

- 1964: Niremberg & Leder: ribossomos de Escherichia - Aminoacil-tRNA

sintetases e
coli ligavam-se à um aminoacil RNAt específico se um
RNAm sintético estivesse presente. - Ribossomos

- 7 anos: o CG foi elucidado

- Continuação

• Características do Código Genético:

• Unidade do código genético: Códon

• Ponto inicial: AUG.
• Ponto final: UAA, UGA, UAG.
• Redundante.
• O arranjo na tabela não é aleatória.
• Não tem vírgulas.
• Não é sobreposto.
• Não é ambíguo.
• “Quase” universal.

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Sobreposição do código genético Muitos aminoácidos são especificados por mais de um códon –
degeneração.

- Continuação
Variação na designação de códons conhecidos na mitocôndria

Organismo Genes Códon Padrão Não

padrão
Mamíferos mt UGA FIM Trp
AGA Arg FIM
AGG, AUA Ile Met
Drosophila mt UGA FIM Trp
AGA Arg Ser
AUA Ile Met
Saccharomyces mt UGA FIM Trp
cerevisae CU_ Leu Thr
AUA Ile Met

3. RNAt e sua ligação ao aminoácido

• Francis Crick (1955): Os RNAt são moléculas
adaptadoras mediadoras as quais carregam um aa
específico ligado e reconhecem códons de ácidos
nucléicos correspondentes.

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 - Continuação
Processamento do precursor do tRNA
1. Possuem 73 a 93 ribonucleotídeos.
2. Bases raras (7 e 15 por molécula).
3. 5' dos tRNA é fosforilada.
4. 3' é CCA.
5. O aminoácido ativado é ligado à hidroxila 3„ (5´CCA 3´).
6. Metade dos nucleotídeos nos tRNAs forma pareamento
Modificação de bases, originando uma dupla hélice.
das bases Processamento 7. Cinco regiões:

tRNA maduro - Braço aceptor (região CCA 3„)

- Braço T (ribotimidina-pseudo-uridina-citosina)
- Braço extra (número variável de nucleotídeos)
- Braço D (diidrouracilas)
- Braço do anticódon

- Continuação

- Continuação

• Enzimas específicas acoplam cada aa à sua molécula

apropriada de RNAt.
• Como uma molécula de RNAt se liga covalentemente ao
aa específico dentre os 20 aas existentes?

• Enzima: Aminoacil RNAt sintetase

• 1 aminoacil RNAt sintetase : 1 aa

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- Continuação - Continuação

◊ Reação de acoplamento:
- Ativação do aa:
AA + ATP  aminoacil adenilato + AMP
- Formação do aminoacil RNAt:
Aminoacil AMP + RNAt  aminoacil RNAt + AMP + PPi
- A expressiva quantidade de nt modificados afeta
sua conformação tridimensional.
- Esses nt modificados são reconhecidos pela enzima
que catalisa a ligação do RNAt com o aa e o
emparelhamento com o RNAm.

• Sintetases reconhecem seu RNAt primeiramente

com base em seu anticódon, mas existem
elementos determinantes da identidade do tRNA.

• Elementos de identidade.

- Continuação

- Continuação

Classe I Classe II
Aminoácido Estrutura Número Aminoácido Estrutura Número
quartenária de quartenária de
resíduos resíduos
Arg  577 Ala 2 875
Cys  461 Asn 2 467
Gln  551 Asp 2  590
Ligação do RNAt ao seu
Glu  471 Gly 2 303 / 689
aminoácido. Ile 939 His 424
 2
Leu  860 Lys 2 505
Met 2 676 Pro 2 572
Trp 2 325 Phe 2  327 / 795
Tyr 2 424 Ser 2 430
Val 2 951 Thr 2 642
Motivos estruturais: (II); estrutura em 
Reconhecimento do anticódon: (II): não interage com o códon
Sítios de aminoacilação: (I): 3‟ – OH ou (II): 2‟ – OH
Especificidade;
Classe I: maiores e mais hidrofóbicos

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4. Hipótese do pareamento oscilante (James Crick)
• RNAt carregado: interage com o códon do RNAm (antiparalelo)
• 61 códons (menos AUG e FIM) para ~ 30 RNAt (leveduras):
défict 31 RNAt
• Ocorre uma oscilação na primeira posição do anticódon (5‟  3‟),
permitindo ajustes conformacionais na sua geometria de
pareamento (RNAt isoaceptor)

Codon/Anticodon Interaction

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5. Ribossomos - Continuação

Grandes complexos de RNAr + proteínas ribossômicas 2 subunidades (se unem durante a síntese):
Semelhantes em procarioto e eucarioto - Menor: liga o RNAm ao RNAt
- Maior: catalisa reações do tipo ligações peptídicas

Unidade usada para medir a velocidade de sedimentação é o

Svedberg (S: quanto maior o valor de S maior a velocidade).

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6. A síntese protéica - Continuação
1. Iniciação:
- A síntese protéica é dividida em três fases:
- Como o ribossomo reconhece o sítio do RNAm para iniciar a
1. Iniciação síntese uma vez que existe várias sequências AUG ao longo do
RNAm?
2. Elongamento
3. Terminação

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- Continuação

Procarioto Eucarioto

Fatores proteicos requeridos para a iniciação de tradução em bactérias e eucariotos

Fator Função
IF-1 Estimula as atividades do IF-2 e IF-3
IF-2 Facilita a ligação do fMet-RNAt à subunidade ribossômica 30S
IF-3 Liga-se à subunidade 30S; previne a associaçào à subunidade 50S

Fator Função

eIF-2* Facilita a ligação do Met-RNAt à subunidade ribossômica 40S

eIF-3 eIF4C Primeiro fator a se ligar à subunidade 40S; facilita as etapas
subsequentes
CBPI Liga-se ao CAP 5‟do RNAm
eIF4A Liga-se ao RNAm; facilita a observação do RNAm para localizar o
eIF4B eIF4F primeiro AUG
eIF5 Promove a dissociação de vários outros fatores de iniciação da
subunidade 40S como preliminar à associação da subunidade 60S
para formar o complexo de iniciação 80S
eIF6 Facilita a dissociação do ribossomo 80S inativo nas subunidades 40S
e 60S
 eIF2 parece ser multifuncional. Atua, além no início da tradução está envolvida na emenda dos RNAm precursores no
núcleo. Esse achado fornece uma ligação intrigante entre a transcrição e a tradução nas células eucarióticas

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- Continuação

2. Elongamento

- Fatores de alongamento:

• 1º estágio: um aminoacil RNAt se liga

ao ribossomo no sítio A desocupado que
é adjacente ao sítio P (ocupado com a
met em eucariotos)
• 2º estágio: formação da ligação
peptídica entre os aas dos sítios A e P.
• 3º estágio: translocação ao longo da
RNAm.

- Continuação

◊ Ligação do aminoácido na cadeia polipeptídica:

- Peptidil transferase

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 - Continuação
3. Terminação
- Fatores de liberação (RF: release factors)
Procariotos Eucariotos
• RF1: reconhece UAA/UAG ERF: reconhece
• RF2: reconhece UAA/UGA os três códons
• RF3: estimula a ligação do de terminação
ribossomo aos RF1 e RF2

Componentes requeridos para as etapas na síntese de proteínas de procariotos e eucariotos

Ativação dos aas - 20 aas

- 20 aminoacil RNAt sintetases
- 20 ou mais RNAts
- ATP
- Mg+2
Iniciação - RNAm
- N formil metionil RNAt (pro) ou metionil RNAt (eu)
- Códon de iniciação AUG
- Subunidade ribossômica 30S (pro) e 40S (eu)
- Subunidade ribossômica 50S (pro) e 60S (eu)
- Fatores de iniciação: IF (pro) e eIF (eu)
- GTP
- Mg+2
Alongamento - Ribossomo 70S (pro) e 80S funcional (eu)
- Aminoacil RNAt especificados pelos códons
- Fatores de alongamento (EF)
- Peptidil transferase
- GTP
- Mg+2
Terminação e liberação - Códons de terminação
- Fatores de liberação (RF)
- ATP

- Continuação 7. Polissomos em procariotos

- A fidelidade da tradução é garantida tanto na ligação do aminoácido
quanto no pareamento códon – anticódon.

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8. Polissomos em eucariotos

8. Alvos dos antibióticos

*
FIM

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