07/04/2016

Universidade Federal da Bahia - UFBA Bibliografias Básicas

Instituto Multidisciplinar em Saúde - IMS
Biologia molecular do gene / 2006

WATSON, James D. Biologia molecular do gene. Porto Alegre, RS: Artmed,

2006. xxxi, 728 p. ISBN 9788536306841 (enc.).

Capitulo 09

Biologia Molecular
Princípios de bioquímica de Lehninger - 4. ed / 2006

LEHNINGER, Albert L.; COX, Michael M; TERMIGNONI, Carlos. Princípios de

Mutação e Reparo bioquímica de Lehninger. 4. ed. Porto Alegre, RS: Artmed, 2006

Capitulo 25

Ricardo Fraga

1. Introdução - Continuação
Linhagem germinativas X Linhagem somática
As células vivas dependem do funcionamento correto de
milhões de genes.

Os danos podem ser:

 Nos diversos sítios da sequência que codifica as suas

proteínas;
 Nas regiões flaqueadoras que promovem sua expressão ou
 O processamento de seu RNA mensageiro.

- Continuação - Continuação

São alterações ou modificações em genes ou cromossomas,

podendo acarretar variação hereditária.
Se o material genético fosse perpetuado com uma fidelidade
perfeita, a variação genética necessária para permitir a
evolução seria perdida e novas espécies não teriam surgido.

A vida e a biodiversidade dependem

de um equilíbrio entre a ocorrência
de uma mutação e seu reparo.

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- Mutação e reparo genômico - Continuação

- Estabilidade: Anemia Falciforme – mudança de A - T
- Mecanismo preciso de replicação do DNA;
- Mecanismo preciso de reparo dos erros de cópia;
O gato viu o cão

O gato viu og vermelho

O ats na cabeça do

O gato viu o zod g

O cma tsa com edo g

O morcego viu o cão
O gato viu o porco
O gato sentou-se no cão

- Mutação e reparo genômico - Continuação

- Estabilidade:
- Mecanismo preciso de replicação do DNA;
ACT GGG CAC CTA sequência normal
- Mecanismo preciso de reparo dos erros de cópia;
O gato viu o cão ACT AGG CAC CTA mutação de ponto

ACT GGG CTA deleção sem desvio da leitura

O gato viu og vermelho

ACT GGG C CTA deleção com desvio da leitura

O ats na cabeça do
ACT GTGGCAC CTA inserção com desvio da leitura
O gato viu o zod g

O cma tsa com edo g

O morcego viu o cão
O gato viu o porco
O gato sentou-se no cão

Tipos de mutações - Continuação

- Tipos de mutações pontuais:

- Modificação súbita e hereditária no genoma não
explicável pela recombinação da variabilidade genética - Substituição de bases: altera um único códon no DNA
pré-existente - Transição: Purina (A por G) ou pirimidina (T por C)
-Aberrações cromossômicas - Transversão: Purina por uma pirimidina
-Mudanças em genes individuais

- Espontâneas: nenhum agente além do ambiente

- Taxa de mutação espontânea : 10-7

- Induzidas: presença de um agente indutor

- Físico: raios X, radiações ionizantes, etc
- Químico: agentes alquilantes, acridinas etc
- Biológico: transposons ou agentes equivalentes.

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- Continuação

- Continuação - Continuação
Alguns sítios do cromossomo são pontos preferenciais de Alguns erros de replicação escapam da revisão de leitura.
mutações (sítios quentes) – mutações aparecem com mais
frequência.

• DNA microssatélite – são repetições de sequências simples de

di-, tri- ou tetranucleotídeos (exemplo, sequência CA)

O comprimento da repetição CA em um determinado

sítio cromossômico é geralmente polimórfico na
população – servindo como marcado físico para
avaliações de mutações

Repara de mal pareamento - Continuação

O sistema de reparo de mal pareamento tem por finalidade:
Na E. coli os mal

• Verificar o genoma por mal pareamento e corrigir pareamentos são detectados

rapidamente; por um dímero proteico

• Corrigir o mal pareamento de forma precisa (substituir o conhecido como MutS

nucleotídeo na fita recém-sintetizada.

Reconhecimento a partir de
distorções que esses
provocam no esqueleto do
DNA.

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- Continuação - Continuação

O complexo (DNA + MutS) UvrD – Helicase

recruta MutL, que por especifica que desenrola
sua vez ativa MutH a fita de DNA

MutH – enzima que quebra A lacuna é preenchida

uma das fitas próximo ao pela DNA polimerase tipo
sítio do mal pareamento III e fechada pela DNA
ligase.

- Continuação - Continuação

A enzima Dam metilase

Mas como o sistema de reparo de mal metila os resíduos de A
pareamentos de E. coli sabe qual dos em ambas as fitas da
dois nucleotídeos erroneamente sequência 5’ – GATC – 3’
pareados deve ser substituído? (aparece a cada 256 pares de base)

Fica metilado só a fita

parental

- Continuação - Continuação

As células eucarióticas apresentam diversas proteínas

homólogas à MutS (chamadas MSH para Homólogas da
MutS) e MutL (chamadas de MLH e PMS)

A predisposição genética
para o câncer de cólon
(não polipóide hereditário)
se deve a uma mutação
nos genes homólogos de
MutS e MutL

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- Continuação Lesões no DNA

Nas células eucarióticas não As mutações surgem não apenas por erros na replicação, mas
tem a metilação também por lesões no DNA.

Os homólogos de MutS (MSH) O DNA pode sofrer

interagem com o grampo lesões espontâneas,

deslizante (PCNA) e como por exemplo pela

reconhece as quebras dos ação da água. O tipo

fragmentos de Okazaki (fita mais frequente é a

descontinua) ou na desaminação da C

extremidade 3’ (fita lider)

A Uracila ira parear com a A, ao invés de G que deveria parear com C.

- Continuação Metilação do DNA

- Resíduos A e C do DNA podem ser metilados;

A hipoxantina vai parear com a Citocina, ao invés da - Metiltransferase:
Timina
- 5 metilcitosina (m5 C): única metilada em vertebrados.

Procariotos Eucariotos
- Envolvida no reparo - Padrão de metilação varia
- Proteção contra endonucleases com a espécie, tecido e
- Interação com proteínas posição no cromossomo
Ligadoras de DNA - Envolvida na expressão
gênica (regiões controle)
hipoxantina

As Cs metiladas são sítios preferenciais para mutações

espontâneas em vertebrados – gera Timina

Sistema de modificação restrição Outros danos

- As bases podem ser quimicamente modificadas:
O DNA é vulnerável a danos por alquilação, oxidação e radiação.
- E.coli: 6 methyladenina e 5 methilcitocina (3 metilases e 3 sistemas)

a) Sistema hsd: metila Adenina especifico de cada hospedeiro

b) Sistema dam: também metila Adenina, distingue as fitas
recém sintetizadas (sistema de replicação e reparo)
c) Sistema dcm: metila citocina, função desconhecida Na alquilação – grupos

- Função: metil ou etil são

- Procarioto: distinguir o próprio DNA do DNA estranho (ataque por acrescentados nas bases
enzimas de restrição)
- Eucarioto: distinguir genes em diferentes estádios funcionais ou fosfato no esqueleto
do DNA.

Um dos sítios mais vulneráveis é a guanina, frequentemente

pareando com Timina.

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- Continuação - Continuação
A radiação da luz ultravioleta é intensamente absorvida pelas DNA sujeito ao ataque de espécies reativas de oxigênio.
bases – fusão fotoquímica de duas pirimidinas

A oxidação de Guanina
Quando correr
gera (oxoG) que pode
entre duas Timinas
parear tanto com adenina
– dímero de timina
quanto por citosina

Os efeitos carcinogênicos da radiação ionizante e dos agentes oxidantes

sejam parcialmente causados pelos radicais livres agindo na G.

- Continuação Câncer de pele em paciente com Xeroderma Pigmentosum

- Xeroderma pigmentoso: Doença rara autossômica recessiva

1:250.000
Hipersensibilidade à luz UV, predisposição a câncer de pele quando
jovens
Tendência a degeneração neurológica
Deficiência no sistema de reparo por excisão dos dímeros de
pirimidina

- Continuação - Continuação
A radiação ionizante é utilizada de forma terapêutica no
A radiação gama e os raios
tratamento do câncer – estabilidade dos cromossomos.
X (radiação ionizante)
provocam quebras na fita
dupla do DNA.

Radiação ionizante –
ataca a pentose no
esqueleto do DNA

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Análagos de bases Sistemas de reparo

As mutações podem ser causadas por compostos que substituem 1. Simples mudança de base:
as bases normais – são estruturalmente semelhantes. - Reparo por excisão de bases
- Reparo por excisão de nucleotídeos (REN)

2. Distorções estruturais:
- Dímeros de pirimidina: Reparo por fotoreativação
enzimática
- Alquilação: Reparo por O6 Metilguanina transferase

3. Maus pareamentos:
- Reparo por correção de erro
- Reparo por desvio:
5-bromouracila – análogo a Timina - Recombinação pós-replicação
- Reparo SOS
- Reparo sujeito a erro (error-prone)

Reversão direta da lesão do DNA -

Fotorreativação

Reparo por excisão de bases

- Continuação

Este reconhecimento é
A enzima DNA-fotoliase captura a energia luminosa e a utiliza
possível uma vez que a base
para quebra as ligações covalentes que ligam as Timinas
danificada é deslocada, de
forma que ela se projeta
para fora da dupla hélice

O DNA é flexível

08 diferentes
DNA-glicosilases

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Reparo por excisão de nucleotídeos

Este sistema utiliza o

reconhecimento de
distorções na dupla hélice.

Os eventos deste sistema

levam à remoção do pequeno
segmento de fita simples que
contem a lesão.

- Continuação Ação das nucleases

O reparo em E. coli é realizado - Degradam moléculas de DNA quebrando as ligações

fofodiéster que ligam um nucleotídeo ao seguinte.
por: UvrA, UvrB, UvrC e UvrD.
1. Exonucleases: clivam o DNA a partir do final da
molécula
• UvrA – identificação e distorção na
hélice; 2. Endonucleases: clivam em qualquer local da molécula
• UvrB – separa o DNA, cria uma bolha
de fita simples ao redor da lesão;
Enzimas de restrição:
• UvrC – promove duas incisões, uma
cortam as moléculas de
em cada lado (faz um fragmento de 12 a DNA em posições
13 nucleotideos); específicas
• UvrD – DNA-helícase.

- Continuação

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Mutações cromossómicas Estruturais - Continuação

Translocação

Deleção / duplicação / inversão

- Continuação - Mutações cromossómicas Numéricas

Síndroma do “Grito do gato” – exemplo de deleção

- Continuação

Trissomia 21 (Síndroma de Down) – Aneuploidia autossómica