Patologia molecular

Principais classes de mutação

 Deleções: de 1bp até megabases
 Inserções: incluindo duplicações
 Substituições de uma única base:
o Mutação com troca de sentido: trocam um aa por outro no produto gênico
o Mutação sem sentido: substitui um códon de aa por um de terminação
o Mutação nos sítios de encadeamento: criam ou destroem limites exon-intron
 Mutações de mudança de fase de leitura
 Mutações dinâmicas: repetições in tandem que mudam de tamanho de uma geração para outra

Qual a relação com o fenótipo?

Qual a relação com quantidade ou função do produto gênico?

Porque uma mudança pode ser patogênica?

Nomenclatura
Descrição de efeito de um alelo

 Alelo nulo ou amorfo: não elabora produto

 Hipomorfo: quantidade ou função reduzida do produto
 Hipermorfica: quantidade ou função aumentada do produto
 Meromorfo: cria uma nova função para proteina
 Antimorfo: atividade antagoniza com a do produto normal

Descrição de mutações

 Substituições de aminoácidos:
• Código de 1 letra (A, C, D, E, F, G, H, I, K, M, N, P, Q, R, S, T, V, W, Y e X - stop codon)
• Código de 3 letras (Arg, Gly, Stop, etc)
• Ex.: R117H ou Arg117His; G542Stop
 Substituição de nucleotídeos:
• No códon de iniciação ATG, o A é +1.
• Base imediatamente anterior ao ATG é -1
• Número do nucleotídeo seguido da mudança (1162G>A)
• Diferenciar entre DNA genômico (g.) ou cDNA (c.)
• Mudanças em íntrons quando se conhece só o cDNA
• # especificar número do intron (IVSn) ou o número da posição do éxon mais próximo- 621 +1G>T ;
IVS4 +1G>T
 Deleções ou inserções:
• del para deleções
• ins para inserções
• Ex.: F508del; 6232-6236delATAAG ; 409-410insC
Mutação de ganho de função X mutação de perda de função
Mutação pode causar mudança fenotípica por:

1. Mutação de perda de Função (amorfa ou hipomorfa)

o Em geral fenótipos recessivos
o Haplo-insuficiencia  fenótipo dominante
o Interferência em alelo normal  dominante negativo

Obs: se tiver mais de 50% da quantidade normal de proteína, o organismo funciona normalmente

2. Mutação de ganho de função (hipermorfo ou neomorfo)

o Em geral fenótipos dominantes
o Sinaliza ou não desliga quando devia
o Novas funções - neomorfo

Heterozigoto composto: duas cópias alteradas: a e a’  aa não significa que as mutações são iguais, pode ser aa’. Significa
que ele tem 2 mutações

Aa: alelo mutado em a interfere em A, dessa maneira a doença pode ser recessiva mesmo tendo característica dominante
em Aa.

Conceito de Doença dominante: afeta mais de uma geração; transmitido para homem e mulher; transmitido de homem
para homem pelo menos uma vez.

Perda de função

Mutações de ponto podem produzir mesma mudança patológica que deleções, em geral por perda de função

EX: Mutações trucantes: interrompem desenvolvimento normal da cadeia de aminoácido

Mutação dinâmica: aumenta ou diminui de tamanho

Ganho de função

Uma só mutação causa determinada patologia  provável ganho de função

 Ganho de função  mudança mais específica que perda de função

 Fenótipo de ganho de função é diferente de fenótipo de deleção

Porque uma única mutação pode ser responsável pela maioria ou todos os casos de uma doença? SLIDE

 Espectro mutacional restrito: mutação de ganho de função. EX: acondroplasia

 Consequencias são diretamente derivadas do produto gênico. Ex: Anemia falciforme
 Mecanismo molecular torna mais provável que uma determinada mudança seja mais provável que outras. Ex: X-
frágil
 Efeito fundador Ex: doenças metabólitas em judeus
 Seleção a favor de heterozigotos

É difícil avaliar se uma alteração no DNA é ou não patogênica

 Nem toda variação em pessoa afetada é patogênica

o Variantes
 Ganho de Função
o Mutação deve ser específica
o Outras mudanças provavelmente não serão patogênicas (ao menos para a doença em questão)
 Perda de Função
o Mais heterogêneas
 o Testes in vitro ou in vivo ou estudo da natureza da mutação podem ajudar

A mudança no DNA é ou não patogênica?

 Deleções de genes inteiros, mutações sem sentido e mudanças de fase normalmente destroem a função do
gene;
 Substituição de nucleotídeos conservados GT...AG , que flanqueiam íntrons, afetam encadeamento (outras
mudanças devem ser testadas in vitro, ou por RT-PCR);
 Mutações de troca de sentido que afetam domínios funcionais da proteína podem ser patogênicas;
 Se a substituição do aa for em região conservada na mesma espécie ou família gênica;
 Substituição de aa com características muito diferentes (polar por não polar,ácido por básico) devem ser
patogênicos;
 Presença da alteração no afetado mas não em seus pais.

Mutações por perda de função

Muitas mudanças podem causar perda de função

 Deleção
o Gene inteiro
o Parte do gene
 Inserção de seqüência no gene
 Fragmentação
o Translocação
o Inversão
 Impedimento de atuação do promotor
o Mutação
o Metilação
 Desestabilização do mRNA
o Mutação no sítio de poliadenilação
o Diminuição do RNA mediada por mutação sem sentido
 Impedimento do correto encadeamento
o Desativação do sítio doador
o Desativação do sítio receptor
o Ativação de sítio de encadeamento oculto
 Mudança de fase na tradução (del ou ins de + ou - que múltiplos de 3 nucleotídeos)
 Conversão para códon de terminação
 Substituição de aa essencial
 Impedimento de processamento posterior à transcrição
 Impedimento do correto posicionamento celular

Alfa talassemia: deleção de gene inteiro

Distrofina: deleção de parte do gene; mudança de fase

Distrofia de duchene: translocação X autossomo

IMPORTANTE:

 Deleções e inserções que causam mudança de fase são mais graves;

 Mutações sem sentido costumam instabilizar mRNA;
 Substituições em seqüências codificadoras são mais patogênicas por causa de problemas de sinalização do
que por causa da mudança de aminoácido
Mutações epigenéticas podem eliminar função de genes
 Silenciamento de gene por metilação de DNA
Ex: Sindrome de deficiência mental ligada ao X – tipo X frágil

 Mudanças na configuração da cromatina

o Resultantes de rearranjos cromossômicos
o Supra regulação ou silenciamento gênico
o Ex.: LINFOMA DE BURKITT - Translocação aproxima MYC de região de imunoglobulina =
hiperexpressão de MYC
 Memória
o Imprinting
o Ex.: Síndromes de Prader-Willi e Angelman

 Mudanças na conformação da proteína

o Pode se propagar por uma população de moléculas proteicas
 Príons
 Processos naturais de agregação de proteínas em estruturas subcelulares

 Mutações de Perda de Função tendem a ser recessivas:

o Função do organismo normal com nível de 50% de ação gênica
o Alça de retroativação compensando a baixa dose, aumentando transcrição do alelo normal (mais
raro)
 HAPLOINSUFICIENCIA: redução de 50% causa fenótipo anormal
o Número menor de genes
o Padrão de herança dominante
o Algumas funções são mais sensíveis:
 Sistemas de sinalização quantitativa que depende da ocupação de receptor
 Produtos gênicos que competem entre si (importantes no desenvolvimento ou no
metabolismo)
 Produtos gênicos que cooperam entre si, com razão fixa (como a alfa e beta globinas)

 Efeito Dominante Negativo

o Polipeptídeo mutante interfere no normal
o Efeitos mais graves que deleções e mutações sem sentido

Mutações de ganho de função

 Rara. Mais comum em câncer.
 Hiperexpressão patogênica
o Replicação gênica em massa
o Transposição de um gene para um ambiente de cromatina altamente ativa
 Poucas doenças são causadas por hiperexpressão

Mecanismos de ganho de função

 Hiperexpressão
o Doença de Charcot-Marie-Tooth (PMP22)
 Receptor permanentemente ligado
o Doença de McCune-Albright (GNAS1)
 Aquisição de novo substrato
o Deficiência de α1-antitripsina (PI)
 Canal iônico intempestivamente aberto
o Paramiotonia congênita (SCN4A)
 Multímeros estruturalmente anormais
 o Ostegênese imperfeita (COL2A1)
 Agregação protéica
o Doença de Huntington (HD)
 Gene quimérico
o Leucemia mielóide crônica (BCR-ABL)

Mutações de ganho de função e mudanças qualitativas

 Puberdade Precoce Familial

o Receptor luteinizante constitutivamente ativo
 Hiperplasia de Tiróide Autossômica Dominante
o Mutação ativadora no receptor do hormônio estimulante da tiróide
 Condrodistrofia Metafisária de Jansen
o Ativação constitutiva de receptor de hormônio paratiróideo
 Sindrome de McCune-Albright
o Proteína Gsα constitutivamente ativa

Do gene à doença

 Fenótipo na perda de função depende do nível residual do produto gênico

o Mais de 50% do produto ainda é normal
 Mutações de ganho ou perda causam doenças diferentes (no mesmo gene)
 Variabilidade Intrafamiliar
 Muitas doenças são clinicamente variáveis, mesmo dentro da família...COM MESMA MUTAÇÃO!
o Efeitos de outros genes (modificadores)
o Efeitos ambientais (incluindo efeitos aleatórios)
 Haploinsuficiência é especialmente sujeita a efeito de modificadores

Correlação fenótipo-genótipo em doenças mitocondriais é difícil

 Mesma mudança em diferentes síndromes/gravidades
 Razões
o Heteroplasmia tecido específica
o mtDNA é mais variável que o DNA nuclear, podendo haver mais variabilidade em algumas doenças
por efeito de modificadores
o Doenças de efeito quantitativo
o Efeito nuclear no perfil da doença

Gene subjacente a uma doença pode não ser óbvio

 Nem sempre mutações que levam a deficiência numa proteína se localiza no seu gene estrutural
o Agamaglobulinemia – várias LX // genes das imunoglobulinas – cr. 2, 14 e 22
 Um defeito gênico – muitas enzimas alteradas
o Deficiência de co-fatores comuns
o Deficiência de transportadores comuns
 Mutações costumam afetar subconjunto de tecidos
o Padrão de expressão tecido específico não é bom previsor de fenótipo
 Nem todo tecido onde o gene se expressa é afetado
 Pode haver expressão do gene em tecidos onde não tem função
 Perda de função pode afetar mais uns tecidos que outros por causa das diferenças de
funções e necessidades
 Ganho de função pode ser patológico em alguns tipos celulares e não enm outros
Heterogeneidade de lócus é regra e não exceção
 HETEROGENEIDADE DE LÓCUS: MESMA DOENÇA-DIFERENTES GENES
 FAZ SENTIDO!
o Doenças são causadas frequentemente por problemas em VIAS FISIOLÓGICAS OU DE
DESENVOLVIMENTO
o Peptídeos codificados em diferentes genes, mas que ATUAM DE FORMA AGREGADA

Classificação clinica x classificação molecular

 Classificação clinica: sintomas
 Classificação molecular: gene, localização e tipo de mutação

Defeitos cromossômicos
 Genes contíguos e síndrome de microdeleções: genes letais ou sensíveis a doses
o Ex: síndrome de williams – deleção submicroscópica
 Aneuploidias e desequilíbrio de dosagem
o Fenotipos de monossomia e trissomia
 Efeitos de uns poucos genes + pequenos distúrbios do desenvolvimento