Preparação e caracterização de scaffolds

3D porosos de nanocompósitos de
argamassa de concha de berbigão para
reparo ósseo

Destaques
•

Uma mistura inovadora de nano-CaCo ​3(aragonite),

​ gelatina, dextrina e
dextrana.
•

O Andaime 5211 atingiu um ponto de viragem em termos de

morfologia ideal, ótimas propriedades físico-químicas e grande
resistência mecânica.
•

Andaime 5211 pode garantir a realização dos fins de andaime

desenvolvidos no verdadeiro sistema biológico.
Abstrato
As demandas por andaimes de engenharia de tecidos aplicáveis ​que podem ser
usados ​para reparar defeitos ósseos segmentais com carga (SBDs) são vitais e
estão aumentando a demanda. Neste estudo, sete combinações diferentes de
estruturas estruturadas porosas nanocompósitos tridimensionais (3D) foram
fabricadas para reconstruir SBDs usando uma extraordinária mistura
de conchas de ​berbigão​ (CaCo 3​ ​), gelatina, ​dextrana​ e ​dextrina​ para estruturar
um esqueleto ósseo ideal. com taxa de degradação adequada, utilizando
o método de ​liofilização​ (FDM) e rotulados como 5211, 5400, 6211, 6300,
7101, 7200 e 8100. A casca de berbigão obtida em micron (75 µm) foi
transformada em nanopartículas utilizando o método de síntese de
nanopartículas mecanomecânicas, top-down, com a presença do surfactante
BS-12 (dodecil dimetil bataine). A pureza das fases e as ​estruturas
cristalográficas ​, a funcionalidade química e a caracterização térmica do pó
dos andaimes foram reconhecidas utilizando Difratômetro de Raios X
(XRD), Espectrofotômetro de ​Infravermelho com ​Transformada de
Fourier​ (FTIR) e ​Calorimetria Diferencial de Varredura ​(DSC),
respectivamente. As caracterizações dos scaffolds foram avaliadas
por ​Microscopia Eletrônica de Varredura​(MEV), Degradação, Teste
de ​Absorção de Água ​, Teste de Inchaço, ​Teste Mecânico​e teste de
porosidade. O método top-down produziu nanopartículas de concha de
 berbigão com uma média de alcance de 37,8 ± 3–55,2 ± 9 nm em tamanho, as
quais foram determinadas usando ​Microscópio Eletrônico
de​ Transmissão (TEM). Uma forma principalmente aragonítica
de ​carbonato​ de ​cálcio​ foi identificada tanto em XRD quanto em FTIR para
todos os scaffolds, enquanto as temperaturas de fusão (Tm) e transição (Tg)
foram identificadas usando DSC com a faixa de Tm 62,4-75,5 ° C e Tg
230,6–232,5 ° C. Os andaimes recém-preparados apresentavam as seguintes
características: (i) boa biocompatibilidade e ​biodegradabilidade​ , (ii) química
de superfície apropriada e (iii) altamente porosa, com rede de poros
interconectados. Análises de engenharia mostraram que o andaime 5211
possuía estrutura porosa homogênea interconectada 3D com uma porosidade
de cerca de 49%, ​tamanhos de poros​ variando de 8,97 a 337 µm, resistência
mecânica de 20,3 MPa, ​Módulo de Young​ 271 ± 63 MPa e taxa de ​degradação
enzimática​ de 22,7 em 14 dias.
● Artigo ​anterior
● Artigo ​seguinte
Abreviaturas
SBD

Defeitos ósseos segmentares

3D

3 Dimensional

CaCO ​3

Carbonato de cálcio

CCN

Nanopartículas de Carbonato de Cálcio

FDM

Método de liofilização

5211

casca de berbigão, nanopartículas a 50%, gelatina a 25%, dextrana a 10% e

dextrina a 15%

5400

casca de berbigão, nanopartículas a 50%, gelatina a 40%, dextrana a 5% e

dextrina a 5%.
6211

casca de berbigão, nanopartículas a 60%, gelatina a 20%, dextrana a 10% e

dextrina a 10%

6300

casca de berbigão, nanopartículas a 60%, gelatina a 30%, dextrana a 5% e

dextrina a 5%

7101

casca de berbigão, nanopartículas a 70%, gelatina a 15%, dextrana a 5% e

dextrina a 10%

7200

casca de berbigão, nanopartículas a 70%, gelatina a 20%, dextrana a 5% e

dextrina a 5%

8100

casca de berbigão, nanopartículas a 80%, gelatina a 10%, dextrana a 5% e

dextrina a 5%

µm

Micrômetro

BS-12

batina dodecil dimetil

XRD

Difração de raios X

FTIR

Transformada de Fourier Infra-vermelho

DSC

Calorimetria de varrimento diferencial

SEM
Microscopia Eletrônica de Varredura

nm

Nanômetro

TEM

Microscopia Eletrônica de Transmissão

T ​m

Temperatura de fusão

°C

Graus Celsius

T ​g

Temperatura de transição do vidro

Percentagem

MPa

Megapascais (MPa ou N / mm 2​​ ) unidade pascal (Pa) = um Newton por metro

quadrado

ECM

Matriz extracelular

HA

Hidroxiapatita

Ca ​10​ PO ​46​ OH ​2

Estrutura química da hidroxiapatita

NC

Coral natural
mL

Mililitro

DW

Água desionizada

min

Minutos

cm

Centímetro

W ​d

Peso seco

Raio

Espessura

W ​w

Peso úmido

P ​et

Densidade do Etanol

PBS

Solução tampão de fosfato

W ​1

Peso seco

W ​2

Peso úmido
U / mL

Unidade por mililitro

W ​0

Peso seco (peso inicial)

ANOVA

Análise unidirecional de variação

ACN

Nanopartículas de Carbonato de Cálcio de Aragonita

SE

Erro padrão

CH

Grupo Carbono-Hidrogênio

CO

Grupo Carbono-Oxigênio

JCPDS

Comitê Conjunto da Sociedade de Difração de Pó

H ​f

Calor de fusão

Palavras-chave
Caracterização

Conchas de berbigão

Aragonite

Andaime de nanocompósito poroso 3D

Osso
1 . Introdução
Recentemente, as abordagens biomédicas envolvidas na reparação e
restauração das funções dos tecidos danificados são categorizadas no campo
da engenharia de tecidos. De todos os ossos, a engenharia de tecidos é um dos
campos promissores que visam a criação de substitutos biológicos que tenham
a capacidade de restaurar, reparar, manter ou melhorar as funções dos
tecidos. As etapas geralmente começam com a manipulação e fabricação de
um suporte poroso tridimensional (3D) apropriado adequado para
a ​regeneração do tecido​ ósseo . No entanto, as modificações do andaime
podem ser a melhor maneira de acelerar a degradação, por exemplo,
adicionando partículas de cerâmica para aumentar a área de superfície que
está disponível para ​hidrólise​ para melhorar o reparo funcional de defeitos
segmentares ​[1]​,​ [2]​. Existem muitos tipos de biomateriais que apresentam
infinitas oportunidades para inovações de novas matrizes ou um substrato para
semeadura celular ​[3]​ , ​[4] ​. Esses biomateriais servem como matriz
extracelular (MEC) capaz de suportar a nova ​morfogênese​ óssea ​[5]​ , ​[6]​ . O
osso é um órgão auto-reparador que tem a capacidade de adaptar sua massa,
forma e propriedades em resposta a mudanças, tais como necessidades
mecânicas, e sofre ação física específica na vida sem quebrar ou causar
dor ​[7].​. Essas bio-capacidades do osso provêm do fato de que o osso é um
órgão vivo e contém células que ativam as capacidades de renovação e
reparo. É composto de materiais orgânicos e inorgânicos (minerais). A
substância orgânica é concentrada na ​matriz óssea​ que consiste principalmente
de 90% de fibras de colágeno e outras proteínas não-colágenas. A substância
inorgânica do osso é um ​fosfato de cálcio​ chamado hidroxiapatita (HA),
Ca 1​ 0​ (PO​ 4​ )​ 6​ (OH)​ 2​ . Considera-se que os minerais HA preenchem os locais
entre as fibras de colagénio. As propriedades mecânicas de qualquer osso
provêm do processo de impregnação das substâncias orgânicas moles com
minerais HA que são firmes e quebradiços.​[8]​ .
Um andaime é basicamente uma matriz extracelular que oferece uma estrutura
tridimensional capaz de desempenhar uma função significativa. Essa
praticidade deve-se a uma estrutura de estrutura quase na rede do andaime que
garante ampla porosidade com ​tamanho de poros​ e
interconexões adequados para permitir transporte e migração suficientes de
células, nutrientes, metabólitos, moléculas sinalizadoras
e ​vascularização ​suficiente para nutrir o corpo. novo ​crescimento de
tecido​ ​[12]​ ,​ [9]​ . O conceito de engenharia de tecido ósseo consiste em
desenvolver e fabricar substitutos biológicos (arcabouços 3D) que permitam a
substituição de ossos perdidos ou danificados por doenças ou
traumas​ [6].​. Até à data, a terapia de substituição óssea inclui autoenxertos,
aloenxertos ou xenoenxertos ​[13]​ , ​[14]​ . Os autoenxertos podem ser
manipulados e produzidos por cultura de c�ulas aut�ogas in vitro guiadas
por um esqueleto ou por implanta�o de uma estrutura celular in vivo e
deixando as c�ulas do paciente para restaurar o tecido �seo guiadas pelo
suporte. É preferível que o esqueleto se degrade em um determinado momento
em harmonia com o tempo de restauração do tecido, o que significa que tão
logo o tecido tenha se desenvolvido, o arcabouço não mais existe e o tecido
recém-desenvolvido é tão funcional quanto o tecido perdido ​[15]​ , ​[5]​. Tal
suporte deve ser criado a partir de material biocompatível com propriedades
físicas e mecânicas suficientes, bem como sem reação imunológica ou
clinicamente estranha do corpo ​[16]​ , ​[4]​ .
Os materiais de qualquer andaime devem cumprir os seguintes requisitos: “1)
biocompatibilidade 2) esterilização 3) características físicas adequadas
(propriedades mecânicas) 4) manufaturabilidade 5) ​biodegradabilidade ​6) alta
porosidade com rede interconectada de poros e química de superfície que
promove a regulação adequada ​atividades celulares ​tais como a) ​adesão
celular​ b) proliferação c) migração ed) diferenciação ”​ [17] ​. Existem muitas
substâncias que têm semelhança com as ​estruturas ósseas​que pode ser usado
para fabricar andaimes para serem usados ​na regeneração do tecido ósseo. De
tudo, coral natural (NC) tem sido usado como substituto de enxerto ósseo
devido à sua composição semelhante de ossos. O NC pode ser transformado
em HA estruturalmente semelhante poroso através da resposta de troca
hidrotérmica. Assim, o diâmetro médio do poro do coral é de 200 µm
(190-230 µm) ​[15]​ .
A diferença básica entre o HA e o NC é que este último é biodegradável e o
HA não é. Ambos NC e HA são bem conhecidos por serem osteocondutores,
biocompatíveis e muito inertes ​[18]​ , ​[19] ​. Desde 1980, as coralinas naturais
de ​carbonato​ de ​cálcio​ (CaCO 3​ ​ ) e sua hidroxiapatita transformada,
Ca ​10​ (PO ​4​ ) ​6​ (OH) ​2​ , têm sido amplamente utilizadas como um biomaterial de
reposição para enxertos ósseos ​[15]​ , ​[18] ​. Além disso, um grande número de
biomateriais tem sido investigados como candidatos para alternativas de
enxerto ósseo, incluindo osso animal, ​quitosana​, exoesqueletos de corais e
materiais nacarados ​[2]​ , ​[20]​ . Os melhores resultados são obtidos com os
biomateriais naturais devido à melhor fixação, diferenciação e função
celular ​[21]​ .
O ​joio​ concha é constituída por cerca de 96% de CaCO 3​ ​, enquanto outros
componentes incluem substâncias orgânicas e outros óxidos como SiO 2​ ​ ,
MgO e SO 3​ ​[22]​ , ​[23]​ . O CaCO 3​ ​possui três polimorfos que são a ​calcita​ ,
aragonita e vaterita. Estudos mostraram, além disso, que a aragonita mais
densa é um biomaterial apropriado devido à sua capacidade de ser incorporada
e substituída por tecidos ósseos ​[24]​ , ​[25]​ , ​[26]​ , ​[27]​ . As características
significativas de um material de implante ósseo ideal são: “i)
Biocompatibilidade ii) Resistência mecânica e iii) Segurança”​[28]​ , ​[6]​ . A
mistura de recursos orgânicos e inorgânicos fornece uma escolha diferente
adequada para misturar as melhores propriedades de cada etapa e superar
muitas das suas fraquezas quando usadas como materiais
padronizados ​[29]​ . Nos últimos 10 anos, o pó de casca de berbigão foi usado
para fabricar um novo andaime poroso. A relevância dessa substância para a
fabricação de substitutos ósseos vem de um estudo anterior conduzido por
Zuki et al. ​[22]​ . O estudo relatou que conchas de berbigão e exoesqueletos de
coral têm características minerais e físico-químicas
similares ​[22]​ , ​[23]​ , ​[30]​ , ​[33]​. Com base neste estudo anterior, foi
recomendado que as conchas de berbigão possam ser usadas como um bom
biomaterial opcional para a substituição óssea na organização de defeitos
ósseos. A gelatina desempenha um papel crucial na pesquisa de conchas de
berbigão. Tem sido amplamente utilizado em andaimes de engenharia de
tecidos devido às suas propriedades e tem funções biológicas intactas como o
seu colágeno de forma natural, como biocompatibilidade e propriedades
físicas ​[31]​ . O objectivo deste estudo é o de produzir, e avaliar as
propriedades morfológicas, físico-químicas e mecânicas do novo aragonite
CaCO 3​ ​nanopartículas, gelatina, ​dextrano​ e ​dextrina​ andaime derivada como
uma matriz óssea potencial para a engenharia de tecidos e material de reforço.
2 . materiais e métodos
2.1 . Conchas de berbigão em nanopartículas de preparação em pó
O pó de casca de ​berbigão​ foi preparado seguindo o método descrito por Zuki
et al., ​[22]​ . No entanto, algumas modificações foram feitas para obter os
melhores resultados. As cascas foram secas em estufa (Memmert, UM 500,
Alemanha) a 50 ° C por 5 a 7 dias, moídas usando um liquidificador de aço
inoxidável (Good and Well®, Taiwan) e peneiradas através de uma peneira de
75 µm (Endecotts Ltd, Londres, Inglaterra). ). O pó de tamanho mícron foi
ainda seco no forno (Memmert, UM 500, Alemanha) a 50 ° C durante 5 dias
e mantido num saco de plástico de polietileno hermético (Embalagem JP) até
ser utilizado. O pó micron obtido 75 µm foi transformado em nanopartículas
utilizando um método mecânico-químico na presença do surfactante BS-12
(dodecil dimetil bataina) que foi obtido da Sigma-Aldrich (Steinheim,
Alemanha). Resumidamente, agitação mecânica de 2 g de 75 µm de pó com
os 50 mL de água desionizada (DW) (HPLC grau de resistência> 18 MΩ
obtido de um sistema MilliRO6 mais sistema Milli-Q-Water (Organex) e
0,5 mL de surfactante BS -12 a 1000 rpm à temperatura ambiente durante
90 min utilizando a máquina agitadora homogeneizadora de aquecimento
(Wise Stir® Heating Multiple Stirring) A pasta resultante foi então filtrada
usando papel de filtro de tamanho 12,5 cm (Filter Fioroni, China) e seca a
80 °. C durante a noite depois armazenado a 50 ° C num recipiente estéril
antes da utilização.
2.2 . Desenvolvimento dos andaimes
Três materiais naturais específicos, a saber, gelatina, ​dextrana​ e ​dextrina​ ,
foram misturados com o pó de nanopartículas de casca de berbigão (CaCO ​3​ )
para formular os arcabouços. Sete diferentes fórmulas dos andaimes foram
preparadas usando as seguintes combinações:
Andaime 5211:​ conchas de berbigão, nanopartículas a 50%, gelatina a
25%, dextrana a 10% e dextrina a 15%.
Andaime 5400:​ conchas de berbigão, nanopartículas a 50%, gelatina a
40%, dextrana a 5% e dextrina a 5%.
 Andaime 6211:​ casca de berbigão, nanopartículas a 60%, gelatina a
20%, dextrana a 10% e dextrina a 10%.
Andaime 6300:​ casca de berbigão, nanopartículas a 60%, gelatina a
30%, dextrana a 5% e dextrina a 5%.
Andaime 7101:​ conchas de berbigão, nanopartículas a 70%, gelatina a
15%, dextrana a 5% e dextrina a 10%.
Andaime 7200:​ conchas de berbigão, nanopartículas a 70%, gelatina a
20%, dextrana a 5% e dextrina a 5%.
Andaime 8100:​ conchas de berbigão, nanopartículas a 80%, gelatina a
10%, dextrana a 5% e dextrina a 5%.
Os números 5211, 5400, 6211, 6300, 7101, 7200 e 8100 representam as
percentagens de nanopartículas de conchas de berbigão em pó, gelatina,
dextrano e dextrina, respectivamente, e os esqueletos foram preparados pelo
método de ultracongelação. A combinação dos três materiais (gelatina,
dextrana, dextrina) foi primeiramente dissolvida em água deionizada quente a
70 ° C por 90 min usando a máquina agitadora homogeneizadora de
aquecimento (Wise Stir® Heating Multiple Stirring) a 400 rpm e o pó de
nanopartículas de casca de berbigão foi adicionou-se à mistura e agitou-se até
se obter uma pasta uniformemente lisa. A combinação foi vertida em
um ​molde​ cilíndrico de folha de alumínio de 4 cm de altura x 1 cm de
diâmetro, permitido para definir um pouco antes de ser transferido para -20 °
C por 24 h então transferido para o freezer a -80 ° C e os scaffolds foram
posteriormente liofilizados em um liofilizador (LABCONCO Freezon 6​ ​USA)
para ​liofilização​ até que ele seja completamente seco por 4 dias a -50 ° C, e
posteriormente mantido em um recipiente estéril antes do uso futuro ( ​Fig.
1​ ) ​[30]​ , ​[32]​ , ​[33]​ . Os experimentos foram repetidos no mínimo três vezes
para garantir confiabilidade e observação adequadas.
1. Baixe imagem de alta resolução (702KB)
2. Baixar imagem em tamanho real
A Fig. 1 . As fotografias mostram a forma e o tamanho das nanopartículas das
conchas de ​berbigão​ usando TEM, (A e B), 100 nm.
2.3 . Caracterização de andaime

2.3.1 . Estudo de Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV)

O exame dos suportes preparados foi feito por ​microscopia ​electrica

de ​varrimento ​(JEOL JSM 6400 SEM ANEXO COM EDX, Alemanha). O
corte dos andaimes em seções circulares e longitudinais menores foi feito e
enviado para a Unidade de Microscopia Eletrônica, Instituto de Biociências,
Universiti Putra Malaysia para análise de MEV. As amostras foram fixadas
em stubs em diversos ângulos e sputter revestidos com ouro (BAL-TEC SCD
005) antes de estudos de condutividade eletrônica, caracterização
microestrutural e ​diâmetro​ médio de ​poro​ baseado em 300 medidas tomadas
em diferentes posições na imagem da micrografia de seis
réplicas​ [30]​ , ​[32]​ , ​[33]​ .

2.3.2 . Estudo de porosidade

A porosidade dos andaimes organizados foi examinada através de

deslocamento de fluido usando etanol; este método foi adotado por Shahini et
al., ​[34]​ . Os andaimes foram cortados em pequenos discos circulares, com
1 cm de diâmetro e 1 cm de espessura. O ​peso​ supporting (Wd ), o raio
(calma) (R) e ​v (6)
​ emotion de 6 responsabilidades por cada estrutura de
suporte foram calculados antes da ​imers supervisionada​ . As amostras foram
posteriormente mergulhadas em 20 mL de etanol e posteriormente tratadas
com um sistema de repressurização até que não saíssem mais bolhas das
amostras e deixadas em etanol por 48 h, para permitir uma saturação
completa, sendo pesadas e registradas como (W w​ ​ ). A porosidade do
andaime foi calculada de acordo com a fórmula abaixo.
PorosEutyPercentumage=(WW-Wd)/PetxπR2Tx100%

Enquanto (P ​et​ ) representam a densidade do etanol.

2.3.3 . Estudo inchaço

O estudo de inchaço foi realizado seguindo Soumya et al. ​[35] ​método. Isso
mediu a absorção / difusão dos nutrientes nos scaffolds, vital para ​a
viabilidade e crescimento celular​ . O teste de intumescimento determinou a
percentagem de absorção média por cada arcabouço. Seis amostras de cada
tipo dos andaimes fabricados foram usadas neste estudo; os pesos de cada
amostra foram medidos antes e depois da imersão em solução tampão de
fosfato (PBS) pH 7,4 por 10 min. A diferença entre o peso dos suportes secos
e molhados denota a quantidade de solução de PBS a partir da qual a
percentagem de absorção média foi calculada de acordo com a seguinte
fórmula:
PercentumageofmedEuvocêmvocêptumake=(W2-W1)/W1x100%

onde, (W ​1​ ) é o peso inicial da amostra antes da imersão (seco) e (W ​2​ ) é o

peso da amostra após a imersão (úmido). O processo acima foi repetido após
a secagem das mesmas amostras de andaimes por mais 10 min. A melhor
amostra foi reconhecida com base na comparação entre os andaimes para a
primeira e a segunda porcentagem de absorção de PBS.

2.3.4 . Estudo de absorção de água

O​ estudo de ​absorção de água​ foi realizado utilizando seis amostras de cada

tipo de andaime. Os pesos das amostras foram medidos antes e depois da
imersão em água deionizada por 10 min. A diferença entre o peso das
amostras molhadas e secas denota a quantidade de água absorvida a partir da
qual a percentagem de água absorvida foi calculada de acordo com a seguinte
fórmula:
WumaterUMAbsorptEuonPercentumage=(W2-W1)/W1x100%.

onde, (W ​1​ ) é o peso inicial da amostra antes da imersão (seco) e (W ​2​ ) é o

peso da amostra após a imersão (úmido). O método acima foi repetido após
a secagem dos andaimes por mais 10 min. A melhor amostra foi reconhecida
com base na comparação entre as amostras de andaimes para a primeira e
segunda porcentagem de absorção de água.

2.3.5 . Estudo de Degradação

A degradação dos suportes de nanocompósitos 3D foi estudada em solução de

PBS pH 7,4 usando duas abordagens. O primeiro ​método enzimático
de​abordagem envolveu o estudo da taxa de degradação usando ​lisozima​ , na
adoção do método​ [36]​ . Seis amostras medindo 1 cm de diâmetro e 1 cm de
espessura cada foram testadas de cada tipo de andaime. As amostras foram
imersas em solução de PBS contendo 10.000 U / mL de lisozima a 37 ° C por
14 dias. O líquido foi trocado a cada 3 dias para garantir ​atividade
enzimática​ constante . Os pesos iniciais de cada amostra dos andaimes foram
registrados como W ​0​ . As amostras foram removidas após 14 dias e
liofilizadas por 4 dias a -50 ° C. As amostras foram então pesadas e o peso
seco foi registada como (W 1​ ​ ). A porcentagem de degradação foi então
calculada de acordo com a seguinte fórmula:
Degradação%=(W0-W1)/W0x100%

Para o segundo método semi-quantitativo, seis amostras medindo 1 cm de

diâmetro e 1 cm de espessura cada foram coletadas de cada tipo de arcada
para o experimento semiquantitativo de 14 dias. Fotografias foram obtidas em
intervalos de tempo fixos para mostrar as mudanças físicas dos andaimes
degradantes. Durante a degradação das amostras, as mudanças de pH foram
também medidas simultaneamente a intervalos variáveis.
Para o terceiro método semi-quantitativo, este estudo adotou um método de
exame visual direto (a olho nu) para avaliar a taxa de degradação. Em
diferentes períodos de tempo, a comparação da condição do andaime,
monitorando as mudanças nas dimensões do andaime embebidas em ambiente
especial. Seis amostras foram coletadas de cada arcada medindo 1 cm de
diâmetro e 1 cm de espessura cada foram utilizadas para este experimento
semiquantitativo de 14 dias. As amostras foram imersas em água
desionizada. A informação fornecida pela degradação em solução de PBS pH
7,4 usando as duas abordagens e através do método de observação visual
direta foi aceitável para julgar a diferenciação nas taxas de degradação de
diferentes tipos de andaimes com diferentes componentes fabricados.

2.3.6 . Estudo de força mecânica

A força mecânica compressiva e o módulo de andaimes foram testados usando

um testador mecânico Instron 3365 (Instron 3365, células de carga de 10 kN,
Canton, MA, EUA) com células de carga de 10 kN ​[9]​ . Seis amostras foram
coletadas de cada arcada e preparadas como discos circulares de 1 cm de
diâmetro e 1 cm de espessura. A velocidade de uma cruzeta usada foi de
0,4 mm / min e a carga foi aplicada até que as amostras fossem comprimidas
até aproximadamente 100% de sua altura original. A rigidez dos andaimes foi
avaliada na região do ponto de tensão. A força de escoamento foi levada para
o ponto de escoamento no esforço-tensão MPa.

2.3.7 . Análise de Infravermelho de Transformada de Fourier (FTIR)

Para descobrir a funcionalidade química dos scaffolds nanocompósitos 3D, o

método espectroscópico utilizando um espectrofotômetro ​Fourier
Transform​Infrared​ (FTIR) (Perkin Elmer) foi utilizado na faixa de 400 cm​ −1​ a
4000 cm​ −1​ . 1-2 g de amostras foram preparadas e utilizadas através de
métodos de UATR.

2.3.8 . Análise de Difração de Raios-X em Pó (PXRD)

1-2 g de amostras de cada tipo de andaime foram trituradas e usadas para esta
análise. A análise implicou a realização de ​Difração​ de ​Raios X de​ grande
ângulo para diferenciar a natureza dos componentes amorfos e cristalinos das
amostras à temperatura ambiente. Todas as fases cristalinas presentes foram
reconhecidas utilizando difract�etro de raios X em p� (difract�etro de
p� Shimadzu XRD-6000, Japan) atrav� da utiliza�o de CuK? (?
1,540562 �) a 40 kV e 30 mA ​[10]​ . A forma de difração foi coletada a uma
taxa de varredura de 0,02 graus por segundo em 2θ na faixa de 20 ° a 60 ° a
37 ° C.
XPPA pela fórmula de Scherrer para comparar com os valores obtidos dos
resultados da análise TEM. Os tamanhos de cristalito Dv é uma técnica fácil
que distingue abertamente entre a deformação induzida e a extensão induzida
pelo tamanho, considerando o comprimento do pico como uma função de
2θ ​[11]​ .

2.3.9 . Análise de Calorimetria Exploratória Diferencial (DSC)

Calorimetria Exploratória Diferencial​ (DSC) foi realizada em amostras de

andaimes para examinar suas características térmicas. A alteração térmica do
pó dos suportes desenvolvida a partir de diferentes combinações foi analisada
utilizando calorímetro diferencial de varrimento (METTLER TOLEDO
DSC822e Switzerland). Cerca de 1-2 g de amostras de cada andaime foram
aterrados, preparados e utilizados para esta análise. Os pós da amostra foram
digitalizados à temperatura ambiente. As amostras foram aquecidas at250 a
uma velocidade de 10 / min, mantidas isotermicamente durante cinco minutos
e novamente arrefecidas a 25 durante cada ciclo. Durante o primeiro ciclo, o
calor da temperatura de fusão, (T​ m​), foi gravado para descobrir a
cristalinidade. O mínimo do pico de fusão foi definido para a temperatura de
fusão. Durante o segundo ciclo, a ​temperatura de transição vítrea​ ( T​ g ​) foi
determinada como o ponto de inflexão da ​transição vítrea​ .
 2.3.10 . Análise estatística

Em primeiro lugar, os resultados quantificáveis ​foram avaliados usando

Explorar para Normalidade de dados, em seguida, Análise de Variância
Unidirecional (ANOVA) e Teste de Kruskal-Wallis. Os resultados foram
apresentados como média ± erro padrão (SE). O teste Post Hoc foi calculado
para valores significativos p <0,05 usando o Teste de Comparação Múltipla de
Tukey. Todas as análises estatísticas descritivas e inferenciais foram
realizadas no Excel versão 2013, ​SPSS​ versão 21.0, 22.0 e 23.0 e SAS versão
9.4.
3 . Resultados
3.1 . Caracterização de nanopartículas de conchas de berbigão
O TEM revelou nanopartículas de ​carbonato de cálcio​aragonita (ACN) com
um tamanho de faixa de 37,8 ± 3–55,2 ± 9 nm ( ​Fig. 1​ e ​Tabela 5 ​). Não
houve alteração nas composições elementares das nanopartículas de conchas
de ​berbigão​ obtidas após a síntese de BS-12. Isso reflete o papel do
surfactante da BS-12 na quebra das hastes de aragonita de tamanho maior em
barras esféricas menores.
3.2 . Caracterização de andaimes
A Fig. 2 ​mostra os andaimes desenvolvidos em diferentes composições de
gelatina, ​dextrano​ e ​dextrina​e ACN. Os andaimes formados foram
encontrados em estrutura rígida. A brancura dos andaimes varia com base na
percentagem do ACN. Quanto maior for a percentagem de pó do ACN, o
andaime mais branco aparecerá. Os andaimes também foram encontrados para
ser duro o suficiente para suportar a compressão física manual no estado seco,
o que permite que seja simplesmente manipulado e cortado em tamanhos
desejados para estudos posteriores.

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Fig. 2 . A fotografia mostra os andaimes após a secagem na máquina de liofilização, que
pode ser usada para estudar a caracterização dos andaimes.

3.2.1 . Estudo de Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV)

Os scaffolds que foram preparados pelo método de liofilização deram origem

a estruturas que consistiram em redes abertas de poros, com ​tamanhos de
poros​ que variaram de 8,97 a 526 µm ( ​Tabela 1​ ). Os poros mostraram um
alto grau de interconexão, que é muito crucial para a semeadura e crescimento
de células. Com este método foi possível controlar a porcentagem de
porosidade e o tamanho dos poros. A análise SEM mostrou excelentes
estruturas de micro poros com tamanhos variando de 9 a 526 µm. No entanto,
os suportes 5400 e 7101 mostraram uma estrutura de poro extremamente larga
variando de 11,7 a 478 µm e 16,8 a 526 µm respectivamente ( ​Fig. 3​ , ​Fig.
4​ , ​Fig. 5​ , ​Fig. 6​e​Tabela 1​ ) Os poros eram redondos em estrutura com
diâmetros variando entre 56,84 e 108,22 µm. No entanto, o grupo de
scaffolds que possuem maior concentração de ACN apresentou maior
quantidade de cristalitos de carbonato de cálcio depositados na superfície do
polímero de gelatina, dextrana e dextrina. ​A Tabela 1​ mostra o resumo da
faixa de diâmetro dos poros e o tamanho médio dos poros de cada
arcabouço. Vale ressaltar que houve uma relação negativa entre o tamanho do
poro e o percentual de ACN, com exceção do andaime 7101.
Tabela 1​ . Resumo dos ​diâmetros​ dos ​poros​ de cada arcabouço, (Faixa µm), (Média ±
EP), (a *) significa diferença significativa entre os arcabouços a p <0,05.
Nome do Faixa de diâmetro dos Média do diâmetro dos
andaime poros poros

Andaime 5211 8,97–337 µm 71,27 µm ± 3 b

Andaime 5400 11,7 a 478 µm 77,27 µm ± 7 b

Andaime 6211 16,5 a 435 µm 94,71 µm ± 2 c

Andaime 6300 12,4 a 358 µm 92,32 µm ± 6 b

Andaime 7101 16,8 a 526 µm 108,22 µm ± 8 d

Andaime 7200 15,5 a 348 µm 56,84 µm ± 3 a *

Andaime 8100 16,9 a 225 µm 59,89 µm ± 2 a *

Os meios com letras semelhantes não são significativamente diferentes.

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Fig. 3 . Fotografias (A, B, C, D, E, F e G) mostram a estrutura superficial de andaimes
(5211, 5400, 6211, 6300, 7101, 7200 e 8100) usando Microscópio ​Eletrônico de
Varredura​ . A, B, C, D e E, 200x e F e G, 100x.

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Fig. 4 . Fotografias (A, B, C, D, E, F e G) mostram a estrutura interna dos andaimes
(5211, 5400, 6211, 6300, 7101, 7200 e 8100) usando microscópio ​eletrônico de
varredura​ . A, C, E e G, seção longitudinal, B, D e F, seção transversal. A, B, C, D e E
100x, F e G, 200x.
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Fig. 5 . As fotografias (A, B, C, D, E, F e G) mostram a estrutura interna e
o ​diâmetro​ dos ​poros​ dos andaimes (5211, 5400, 6211, 6300, 7101, 7200 e 8100)
usando o Microscópio ​Eletrônico de Varredura​ . A, C, D, E e G, seção transversal,
seção longitudinal B e F. 50x

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Fig. 6 . As fotografias (A, B, C, D, E, F, G) mostram a estrutura interna e os poros dos
andaimes (5211, 5400, 6211, 6300, 7101, 7200 e 8100) usando Microscópio ​Eletrônico
de Varredura ​. A, B, E, F e G, corte longitudinal, C e D, corte longitudinal. Ampliação
 de 1000x mostrando a presença de conchas de ​berbigão em​nanopartículas de
cristalizados de pó depositados na matriz interna.

3.2.2 . Estudo de porosidade

Andaimes de diferentes composições apresentaram diferenças significativas a

p <0,05 na porcentagem de porosidade entre 33% e 97% ( ​Fig. 7​ ). Os
resultados também mostraram que quanto maior o percentual de pó de ACN,
em um andaime, maior a porcentagem de porosidade.

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Fig. 7 . A média da porcentagem de porosidade dos andaimes testados através do
método de deslocamento de líquido. * Diferença significativa foi observada entre os
andaimes em p <0,05.

3.2.3 . Estudo inchaço

A Fig. 8​ mostra a percentagem de absorção média de cada suporte num

determinado período, obtida por alterações manipulativas no peso do
suporte. O andaime 5400 apresentou a menor capacidade de absorção de
solução de PBS a 34,92 ± 3% nos primeiros 10 min, enquanto os andaimes de
andaime 7200 mostraram a maior capacidade de absorção a 65,54 ± 8%. O
andaime 6211 apresentou a menor capacidade de absorção de solução de PBS
a 23,49 ± 2% no segundo 10 min, enquanto o scaffold 6300 apresentou a
maior capacidade de absorção a 42,62 ± 2%. Verificou-se que a capacidade da
solução de PBS dos sete suportes varia entre 35% e 66% nos primeiros
10 minutos e entre 23% e 43% nos segundos 10 minutos, com diferenças
significativas entre os andaimes nos primeiros 10 minutos. min em p
<0,05. Não foram observadas diferenças significativas entre os andaimes para
o segundo 10 min em p> 0,05.
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A Fig. 8 . A média da percentagem de absorção média e a média da percentagem
de ​absorção​ de ​água​ (primeiro e segundo 10 min) e a média da percentagem de
degradação utilizando ​Lisozima​ . * Diferença significativa foi observada entre os
andaimes em p <0,05.

3.2.4 . Estudo de absorção de água

A Fig. 8 ​mostra o resultado do teste de ​absorção​ de ​água​para diferentes

composições de andaimes. Após os primeiros 10 min, o andaime 7101 e 8100
foram mais resistentes do que os outros andaimes. Os segundos 10 min
de ​imersão​ foram feitos após os andaimes serem deixados a secar. A
percentagem de absorção de água diminuiu nos andaimes 7101 e 8100. Todos
os tipos de andaimes mostraram diferenças significativas entre os andaimes
durante o primeiro e o segundo 10 min com p <0,05.

3.2.5 . Estudo de Degradação

O estudo de degradação dos scaffolds foi realizado de maneira enzimática e

dois métodos semi-quantitativos por um período de 14 dias. Os resultados
mostram que o andaime 6211 apresentou uma taxa de degradação superior a
67% e o suporte 5211 apresentou uma taxa de degradação menor a 15% em
comparação com outros suportes ( ​Fig. 8​ ). A taxa de degradação dos
andaimes foi diferente de um para outro, o andaime 5400 foi de 24%, 6300 foi
de 28,6% e 7200 foi degradado 28,7% no dia 4 do teste, enquanto andaime
7101 e 8100 mostraram 31% e 19,5% de degradação percentagem,
respectivamente, que se degradou no dia 6 do teste, e o andaime 6211 mostrou
uma degradação maior a 67% no dia 7 do teste. Considerando que, o suporte
5211 mostrou menor degradação a 15% no dia 10 do teste, respectivamente
( ​Fig. 8​ e​Tabela 2​ ) Verificou-se que o desenvolvimento de degradação
apresentado pelos andaimes estava associado à concentração de pó de ACN,
bem como à concentração de gelatina dentro do mesmo suporte. O baixo teor
de gelatina apresentou maior taxa de degradação, com exceção do scaffold
6211 que apresentou maior degradação com alta concentração de gelatina
( ​Fig. 8​ , ​Fig. 9​ , ​Fig. 10​ e ​Tabela 2​ ). Além disso, não houve diferenças
significativas na porcentagem de degradação de todos os scaffolds estudados
em p> 0,05.
Tabela 2​ . Resumo do período de degradação de cada andaime durante o modo de
degradação.
Degradação usando Degradação Degradação
O andaime
Lisozima usando PBS usando DW

Andaime
10 dias 6 dias 14 dias
5211

Andaime
4 dias 5 dias 7 dias
5400

Andaime
7 dias 5 dias 8 dias
6211

Andaime
4 dias 5 dias 8 dias
6300

Andaime
6 dias 4 dias 7 dias
7101

Andaime
4 dias 4 dias 6 dias
7200

Andaime
6 dias 4 dias 7 dias
8100
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Fig. 9 . As fotografias mostram o modo de degradação de cada arcabouço
utilizando ​Lisozima​ após 24 h.
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Fig. 10 . As fotografias mostram o modo de degradação de cada estrutura utilizando
a ​lisozima​ após 7 dias.
A Tabela 2 ​mostra o resumo dos períodos de degradação de 6 réplicas de cada
estrutura utilizando a solução PBS. Os resultados dos períodos de degradação
do scaffold mostraram diferentes modelos de degradação, como observado ao
longo dos estudos de ​degradação enzimática​ com scaffolds consistindo em
maior concentração de pó de ACN apresentando maior taxa de degradação. Os
andaimes 7101, 7200 e 8100 mostraram uma quebra mais rápida da estrutura
do andaime no dia 2 e perderam completamente a sua estrutura no dia 4.
Comparativamente, os andaimes 5400, 6211 e 6300 mostraram uma
abordagem moderada de degradação com pequenos defeitos superficiais e
fissura ligeira no dia 6. ​Fig. 11​ , ​Fig. 12​ mostram as imagens fotogricas dos
andaimes desintegrantes capturados em dois intervalos.
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Fig. 11 . As fotografias mostram a maneira de degradação de cada estrutura utilizando
PBS após 24 h.
1. Baixe imagem de alta resolução (675KB)
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Fig. 12 . As fotografias mostram o modo de degradação de cada estrutura utilizando
PBS após 3 dias.

3.2.6 . Alterações de pH durante o estudo de degradação

A Tabela 3​ mostra as mudanças no pH durante o período experimental. Houve

mudanças significativas no pH dentro dos grupos de suporte, além disso,
mudanças significativas entre os grupos foram observadas após 24, 288 e
336 h, com p <0,05. Não foram observadas alterações significativas entre os
grupos após 72 e 168 h em p> 0,05. Houve um aumento significativo no pH
no suporte 5211 em comparação com outros suportes no final do período de
estudo em p <0,05. Um pH aumentado para uma condição básica foi
observável dentro de todas as concentrações de pó de ACN com um pH
máximo de 9,09 no andaime 5211. Andaimes 5400 e 6211 atingiram um pH
máximo de 8,45 e 8,72 correspondentemente, enquanto o andaime 6300
apresentou um aumento máximo nos valores de pH de 8,34, e os suportes
7101 e 7200 mostraram o mesmo aumento mimo no valor de pH de 8,39, e o
suporte 8100 apresentou um aumento mimo nos valores de pH de 8,25.
Tabela 3​ . A média do pH durante o período de degradação usando PBS. (a *) significa
diferença significativa entre os andaimes em p <0,05.
 Depois
O Depois de Depois de Depois de Depois de
de
andaime 24 horas 72 horas 168 horas 288 horas
336 h

Andaime 7,27 ± 0,2 7,29 ± 0,2 a 9,09 ±

7,16 ± 0,3 7,13 ± 0,1
5211 b * 0,1 b

Andaime 6,96 ± 0,1 7,33 ± 0,01 8,45 ±

7,14 ± 0,1 7,02 ± 0,1
5400 a* a* 0,1 a *

Andaime 7,06 ± 0,1 8,72 ±

7,22 ± 0,1 7,19 ± 0,2 8,29 ± 0,2 b
6211 b 0,2 b

Andaime 6,97 ± 0,01 7,17 ± 0,02 8,34 ±

7,25 ± 0,4 7,15 ± 0,1
6300 a* a* 0,02 a *

Andaime 7,54 ± 0,02 7,37 ± 0,1 a 8,39 ±

7,27 ± 0,1 7,20 ± 0,1
7101 b * 0,03 a *

Andaime 7,47 ± 0,03 7,23 ± 0,1 a 8,39 ±

7,33 ± 0,1 7,25 ± 0,1
7200 b * 0,01 a *

Andaime 8,11 ± 0,01 7,50 ± 0,1 a 8,25 ±

7,86 ± 0,1 7,15 ± 0,2
8100 c * 0,1 a *

Os meios com letras semelhantes não são significativamente diferentes.

3.2.7 . Estudo de força mecânica

A rigidez e o rendimento foram determinados a partir do teste de

compressão. ​A Fig. 13 ​mostra a resistência à compressão e ​o
Módulo​ de ​Young​ dos andaimes testados sob uma carga de 10 kN. As forças
de compressão do andaime 5211 e 5400 foram de 20,31 ± 4 MPa e 18,54 ±
6 MPa, respectivamente, e foram significativamente mais altas em
comparação com os outros suportes, com p <0,05. O andaime 8100
apresentou a menor resistência à compressão a 3,55 ± 0,3 MPa, apesar de
uma notável tendência de aumento na resistência à compressão com a
composição de pó de ACN e aumento na composição de gelatina. O Módulo
de Young do andaime 5211 e 6211 era 270.635 ± 63 MPa e 240,208 ± 103,
respectivamente, e encontraram-se maiores em comparação com os outros
arcabouços. O andaime 7200 exibiu o menor módulo de Young a 103,52 ±
30 MPa. Andaimes de diferentes composições mostraram diferenças
significativas na resistência à compressão a p <0,05 e não houve diferenças
significativas no Módulo de Young em p> 0,05.
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Fig. 13 . A média da resistência à compressão (MPa) e ​módulo de jovens​ (Mpa). *
Diferença significativa foi observada entre os andaimes em p <0,05.

3.2.8 . Análise de Infravermelho de Transformada de Fourier (FTIR)

Os espectros de FTIR dos scaffolds foram mostrados na ​Fig. 14​ . Em todos os

scaffolds, um padrão similar de espectros foi observado com ligeira diferença
no scaffold 8100. As principais bandas dos espectros de FTIR da análise
foram observadas na ​Tabela 4​ . As bandas representam alguns grupos
principais que representam o estiramento de bandas de hidroxilo, carboxilo,
amida e amina. A presença de grupos CH e grupos CO das bandas de gelatina,
dextrano, dextrina e aragonito de pó de ACN também é relatada.
1. Baixe imagem de alta resolução (260KB)
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Fig. 14 . Espectros de FTIR de andaimes.
Tabela 4​ . Resumo das principais bandas e picos intensos observados nos espectros de
FTIR (média). (a *) significa diferença significativa entre os andaimes em p <0,05.
Andaime 5211 Andaime 6211 Andaime 7101 Andaime 8100

3303 3268 3301 3293

2919 2918 2923 2924

1657 1642 1646 1646

1481 1459 1459 1454

1013 a * 1016 a * 1018 b 1022 b

854 854 853 854

567 536 531 -

Os meios com letras semelhantes não são significativamente diferentes.

3.2.9 . Análise de Difração de Raios-X em Pó (PXRD)

O padrão de XRD dos andaimes preparados é mostrado na ​Fig. 15 ​. A análise

de ​difração de raios X por pó​ é um teste sensível usado para o reconhecimento
de fases cristalinas de compostos inorgânicos (difractômetro de pó Shimadzu
XRD-6000 usando CuKα (λ = 1,540562 Å) a 40 kV e 30 mA). Os pós de
andaimes foram enviados para o Laboratório de Ciência de Materiais,
Departamento de Química, Faculdade de Ciências (FOS), Universiti Putra
Malásia para análise de XRD. O difractómetro de raios X é um ​método
analítico​ muito útil que se baseia no princípio de que os raios X do
comprimento de onda que é conhecido passam através de uma amostra para
serem reconhecidos na identificação da configuração do cristal. A ​rede de
cristais​ difractar a natureza ondulatória dos Raios-X, dando uma forma
excepcional de picos de "reflexões" em diferentes pontos de vista e de força
diversa, uma vez que a luz pode ser defletida por meio de formas rugosas
adequadamente espaçadas. De acordo com o princípio de Bragg, os raios
desviados dos átomos nos planos seguintes são cancelados, exceto quando
estão em fase. A preparação de amostras para DRX implica o empacotamento
de cerca de 2 g de pó de suporte no suporte através da utilização de uma
técnica de enchimento de retorno adequada apropriadamente para que não caia
ao longo do teste de inclinação de 90 °. As fases de cristalinidade foram
determinadas com ângulos de difração de 20 ° a 70 ° a 37 ° C. ​Fig. 15​mostra
que os picos de absorção de XRD nos pós de andaimes coincidiam entre
si. Isto significa que a qualidade cristalina das nanopartículas de CaCO3 da
aragonite nestes pós é mantida durante todo o processo de produção dos
andaimes. Os picos de absorção de XRD no ANC coincidiam entre si. Dois
picos proeminentes foram encontrados em espectros ANC. O primeiro
conjunto de picos estava dentro de 2θ = 26,2 ° a 26,5 ° enquanto o segundo
conjunto estava dentro de 2θ = 33,1 ° a 33,2 ° e o terceiro conjunto estava
dentro de 2θ = 45,8 ° a 46,1 °. Isso significa que a qualidade cristalina da
CAN é mantida durante todo o processo de produção.Sociedade de ​Difração
de Pó​ (JCPDS) file no. 00-041-1475. A investigação da DRX realizada
mostrou informações essenciais sobre a fase mineral dos materiais existentes
nos andaimes. A informação obtida a partir dos espectros estabeleceu a
presença dos distintos picos de aragonite. Os métodos de​ difração de raios
X​ (PXRD) e​microscopia eletrônica de transmissão​(TEM) foram utilizados
para investigar a configuração de fase, a morfologia e o tamanho do pó de
CaCO3. Os picos de difração isolados e ideais de alta resistência, a saber,
(26.2), (26.3), (26.5), (33.1), (33.2), (45.8), (45.9), e (46.1) foram
selecionados para estimar os parâmetros nanoestruturais através vários
modelos usando a fórmula de Scherrer (​Tabela 5​).
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Fig. 15 . ​Análise de difração de raios X​ e os três picos mais fortes.
Tabela 5​ . Briefing do estrutural do caco3 em diferentes percentuais na composição dos
scaffolds.
2θ ± FWHM ±
O andaime d (nm) D ​XRD​(nm) D ​TEM​(nm)
0,001 0,001

33.954
26,2245 0,21550 37,9
9

Andaime 5211 27.027 37,75 ±

33.1189 0,23790 34,8
(50%) 1 3

19,772
45,8562 0,22290 38,7
8
 34,022
26.1714 0,23380 34,9
6

Andaime 6211 27.063 47,89 ±

33,0731 0,2240 37,4
(60%) 5 8

19,795
45,8004 0,26280 32,8
6

33,636
26,4774 0,24100 33,9
3

Andaime 7101 28.144 48,56 ±

33.8732 0,2350 35,9
(70%) 3 6

19,676
46,09260 0,22190 38,9
9

33,924
26,2486 0,19070 42,8
3

Andaime 8100 27,006 55,22 ±

33.1444 0,20880 39,7
(80%) 9 9

19,766
45,8725 0,20760 41,6
1

Os padrões de ​PXRD​ de pós de andaimes são comparáveis ​e exibem

numerosos pontos de difração que poderiam ser distribuídos para a estrutura
cristalina em forma de esfera. Além disso, os pontos de difração são
distintamente mais largos, significando que as partículas de pó preparado
estavam em nanossala. A difração de raios-X em pó (PXRD) foi utilizada para
limitar a composição e pureza das nanopartículas de CaCO3 produzidas. Os
padrões de PXRD de pós de andaimes revelaram picos típicos com alta
densidade entre 2θ de 26 ° e 46 °.

3.2.10 . Análise de Calorimetria Exploratória Diferencial (DSC)

As características térmicas dos andaimes foram analisadas usando varreduras
DSC como mostrado na ​Fig. 16 ​. Não houve pico de ​cristalização​ durante a
primeira execução, assim a percentagem de cristalinidade foi calculada apenas
com o Heat of fusion H ​f​ . Em primeiro lugar, o aquecimento sobe da
temperatura ambiente de 25 ° C a 250 ° C a 10 ° C / min. Durante este
aumento, o material exibe informações sobre sua real condição física e
morfológica. Este aumento foi utilizado para avaliar o calor de fusão, (H f​ ​ ) e
temperatura de fusão, (T m​ ​) dos materiais. Enquanto, o segundo aumento de
aquecimento foi usado para calcular a ​temperatura de transição vítrea​ , (T ​g)​
que investigue o comprimento da cadeia polimérica e, assim, a degradação do
polímero. A curva DSC para o andaime 5211 mostrou um ponto de ​transição
vítrea​ para a amostra não reticulada a 232,58 ° C. O aquecimento dos
andaimes resulta numa perda da estrutura do composto, e a temperatura na
qual ocorre o procedimento de fusão foi uma ferramenta útil para diferenciar
estas preparações de pós, e esta transição pode ser observada por DSC. As
reações endotérmicas começam entre 62,41 ° C e 75,51 ° C, dependendo do
recurso, processamento e pH dos pós. Pode ver-se que a marca térmica da
mistura em pó tinha um pico de fusão mínimo a cerca de 62,41, 63,04, 65,48 e
75,51. ° C para os andaimes 8100, 7101, 6211 e 5211 correspondentemente e
o segundo pico mínimo de transição vítrea estava entre 230,69 e 232,58 ° C.
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Fig. 16 . Os gráficos mostram o pico endotérmico de DSC (desnaturação) dos materiais
de suporte (gelatina, ​dextrano​ , ​dextrina​ e pó de ACN).
4 . Discussão
Este estudo teve como objetivo avaliar a gelatina, ​dextrina ​, ​dextrana​ e ACN,
como materiais de suporte para aplicações de restauração de tecido ósseo,
além de melhorar o uso de nanopartículas no design de andaimes. As técnicas
de desenvolvimento e caracterização de um material são fatores
pré-determinantes vitais vitais para sua confiabilidade em outras
avaliações​ [32] ​. O dextrano foi escolhido para este estudo devido à sua
conhecida resistência à ​adsorção de proteínas ​e ​à adesão celular​ . A
quantidade de dextrano usada no andaime é um determinante da sua
porosidade e interconectividade​ [32]​ . Mais ainda; é adequado para trabalhar
com um andaime que tenha sites explícitos para reconhecimento de
células ​[37]​ ,​[38] ​. Em nosso estudo, o método de ​liofilização​ produziu
suportes com porosidade brilhante ​[39]​ . O aquecimento foi o principal meio
de evaporao da ua neste estudo que tornou a mistura concentrada e densa o
suficiente para reter as bolhas de ar, aumentando assim a porosidade ap a
secagem da mistura. Resultados semelhantes foram relatados
por ​[39]​ , ​[40]​ , ​[41]​ , ​[32]​ , ​[42]​ .
A investigação SEM dos andaimes desenvolvidos revelou que micro-poros
com vários tamanhos. A estrutura física desta micro-porosidade dos andaimes
foi atribuída principalmente às cavidades de ar. Estes espaços fornecidos para
acomodar o efeito de inchaço nos andaimes. Esta observação foi semelhante
às de ​[41]​, ​[32]​ , ​[30]​ , ​[33]​ . Observou-se que os andaimes têm menos de 50%
de porosidade via método de deslocamento de líquido usando etanol. No
entanto, scaffolds com maior concentração de ACN mostraram uma
porosidade relativamente maior com a composição máxima de ACN (andaime
8100). Similarmente, ​[35]​ , ​[43]​, ​[30]​ , ​[33]​relataram os mesmos
resultados. Isto pode ser devido à evaporação da água durante o processo de
liofilização. A evaporação criou estruturas porosas nos andaimes devido ao
descolamento do pó de nanopartículas nas matrizes de gelatina, dextrina e
dextrana durante o congelamento. Quanto mais alto o conteúdo de pó de
ACN, maior a quantidade de agregados destacados nas matrizes de gelatina,
dextrina e dextrana ​[30]​ , ​[32]​ , ​[33]​ .
Um aspecto vital que está negativamente relacionado à porosidade são as
características mecânicas do andaime. A porosidade de um andaime afeta
adversamente a sua força mecânica. Qualquer aumento na porosidade ocorre
frequentemente como diminuição na resistência mecânica do andaime. Esta
falha ou fenômeno indesejado está aparecendo freqüentemente em andaimes
baseados em polímeros, como desenvolvido neste estudo. Muitos estudos têm
sido relatados sobre o aumento das características mecânicas de andaimes por
integração de substâncias biológicas inorgânicas ​[44]​ , ​[45]​ , ​[46]​ , ​[47]​. A
gelatina, a dextrina e o dextrano são polímeros naturais conhecidos que
formam um hidrogel frágil como os andaimes. A mistura de pó de ACN com
gelatina, dextrina e dextrano resultou em avançado andaime nanocompósito
com características mecânicas tremendamente melhoradas. Os resultados
deste estudo sugerem um aumento significativo tanto nas características
mecânicas quanto ​no Módulo de Young​dos andaimes que foram combinados
com o ACN. Observou-se que as propriedades mecânicas dos scaffolds
estavam positivamente relacionadas com a concentração de gelatina e
conteúdo de dextrina nas composições de andaimes. Esta relação foi óbvia nos
andaimes 7101, 7200 e 8100 que mostraram uma diminuição na sua
resistência mecânica e módulo, independentemente de terem o maior teor de
ACN e menor teor de gelatina e dextrina. Isto é possivelmente devido ao
aumento da porosidade do andaime 7101, 7200 e 8100 que eventualmente
resultaram na diminuição de suas propriedades mecânicas.
Poros esféricos têm boa tendência para resistir a cargas de compressão mais
elevadas ​[43]​ , ​[44] ​. Alguns dos fatores que os scaffolds devem ter para
controlar suas propriedades mecânicas são o ​tamanho dos poros​ e sua
interconectividade ​[30]​ , ​[32]​ , ​[33]​ , ​[43]​ , ​[48] ​. Neste estudo, o andaime
5211 demonstrou uma boa propriedade mecânica que variou entre
a ​estrutura​ do ​osso​ duro de 271 ± 63 MPa com uma resistência à compressão
de 20,3 MPa, fazendo desta combinação as condições mais adequadas de
propriedades mecânicas, como relatado anteriormente por ​[44]​ , ​[17
]​ , ​[47]​. Acredita-se que a resistência mecânica dos scaffolds de
nanocompósitos seja adicionada à forte interação iônica que ocorre entre íons
em uma substância composta ​[12]​, ​[30]​ , ​[33]​ , ​[49]​ . Em nosso estudo, a
interação de íons de cálcio fornecidos pelo pó de ACN com os grupos
carboxila na gelatina é possivelmente o fator contribuinte. Estes resultados
foram muito óbvios e interpretáveis ​através da análise FTIR.
O desempenho do inchamento de um andaime melhora seu tamanho de
poro ​[30]​ , ​[32]​ , ​[33]​ , ​[47] ​. O desempenho do inchaço é um fator adicional
que um andaime pode fornecer. Tem um uso prático no apoio à fixação e
crescimento de células e a subsequente nova ​regeneração de
tecidos​ ​[44]​ , ​[50]​ . A taxa de intumescimento dos suportes é uma média
ligeiramente superior a 50% da capacidade de absorção média durante os
primeiros 10 min. Neste estudo observou-se que os suportes 6211 e 7200 têm
essa relação, enquanto os andaimes 5211, 5400, 6300, 7101 e 8100 mostraram
a menor capacidade de absorção média numa média inferior a 50%. Estes
resultados estavam em desacordo com os do estudo anterior por ​[35],​ que
relataram que as taxas mais elevadas de inchaço estão positivamente
relacionadas com a maior porosidade de um andaime. No
entanto, ​[36]​relataram que a taxa de inchamento diminuiu quando o andaime
foi projetado como estrutura de nanocompósito semelhante àquela fabricada
neste estudo. Uma provável interpretação para essa redução pode ser atribuída
ao aumento da área superficial de interação do NAC com as redes de gelatina,
dextrina e dextrana e suas propriedades de ligação
aumentadas. Inesperadamente, as investigações neste estudo mostraram que a
taxa de intumescimento foi significativamente aumentada com a quantidade
de gelatina, dextrina e dextrano usados ​na mistura de combinações. Além
disso, a porcentagem de porosidade foi significativamente aumentada com o
aumento do conteúdo de pó de ACN.
O comportamento de degradação dos andaimes baseados em polímeros é
outro aspecto essencial na área de engenharia de tecidos. ​A
biodegradabilidade​ é primariamente iniciada pela ​hidrólise da ​cadeia posterior
do polímero e, em menor grau, via ​atividade enzimática​ ​[6] ​. A ​perda de peso
do scaffold ​aumenta de puro para alto conteúdo durante o ​período de
incubação​[51]​ ,​ [52]​ . Estudos sobre a degradação dos scaffolds mostraram
desenvolvimento comparável com relação à taxa de
intumescimento​ [30]​ ,​ [32]​ ,​ [33]​ . A relação positiva foi investigada entre o
desempenho do inchamento e a taxa de degradação para o andaime 6211,
6300 e 7200​[30]​ , ​[32]​ , ​[33] ​. A última mostrou a maior taxa de
degradação. No entanto, o suporte 5211 mostrou a menor taxa de degradação
durante o estudo de ​degradação enzimática​ e o estudo
semiquantitativo ​[30]​ , ​[32]​ , ​[33]​ . Todos os scaffolds estudados, exceto 6211,
apresentaram resultados intermediários quando comparados com o scaffold
5211 sendo mais vantajoso para aplicações de engenharia de tecido
ósseo ​[30]​ , ​[32]​ , ​[33] ​. Neste estudo, a investigação da degradação
enzimática foi apresentada como uma observação de curto prazo baseada na
natureza das enzimas da ​lisozima​ . Enzimas de lisozima quebrar
o​grupos​ de ​ligação​ da rede de gelatina, dextrana e dextrina ​[6]​ . A expericia de
degradao enzimica mostrou que a quebra de ligaes entre a rede de gelatina,
dextrano e dextrina foi acelerada como resultado directo do aumento na
absoro de fluido. Portanto, a perda de estrutura de rede foi iniciada dentro de
poucos dias de imersão. Houve uma relação positiva entre o tempo de
degradação e a cisão da cadeia que resulta na diminuição dos valores do
módulo​ [52]​. A confiabilidade estrutural, a constância e a alta concentração de
gelatina levaram à compensação da degradação até 14 dias do período
experimental. Uma característica comum dos andaimes pode ser uma taxa de
degradação que é equilibrada, em outras palavras, nem muito rápida nem
muito lenta para que se torne prática. Muitos fatores que afetam o tempo de
degradação incluem cristalinidade do polímero, histórico térmico, peso
molecular, porosidade, concentração de monômero, localização do implante e
geometria ​[6]​ .
O ​osteoblasto​ é uma célula que é vulnerável a mudanças de pH e à ​acidez​ do
meio ambiente. Além disso, o pH é um fator significativo que afeta as cargas
elétricas da solução de incubação ​[29] ​. A degradação dos polímeros de
gelatina, dextrana e dextrina resulta em declínio nos valores de pH. Essa
mudança de pH tem sido relatada para reduzir significativamente a atividade
dos osteoblastos, atividade de ALP e ​síntese de colágeno​ ​[6] ​. Nós teorizamos
que a ​lixiviação​O pó de ACN das matrizes de gelatina, dextrano e dextrina ao
longo do tempo de degradação resulta num aumento do valor de pH primário
da solução para um ambiente mais alcalino. Tal situação pode estar associada
ou relacionada com a concentração de pó de ACN nos andaimes. Este efeito
alcalinizante e neutralizante do pó de ACN para a ​acidificação ​potencial (pH
baixo) da solução durante a degradação da gelatina, dextrano e dextrina cria
uma mistura ideal para as funções de enxerto ósseo. Além disso, estudos
prévios relataram um aumento na atividade dos osteoblastos e velocidade de
cicatrização de fraturas via alcalose metabólica e / ou acidose ​[6]​ . Isso explica
o lado positivo do pH elevado de todos os andaimes degradados no estudo.
Interação química​A investigação das substâncias no nanocompósito do
andaime é um aspecto vital que pode auxiliar no ajuste e melhoria das
propriedades do andaime. Estudos como FTIR, XRD e DSC são meios úteis
para compreender as propriedades físico-químicas das substâncias, bem como
as interações químicas. Neste estudo, o estudo dos espectros de FTIR dos
suportes foi óbvio que os suportes 5211, 6211, 7101 e 8100 apresentaram um
padrão de espectros similar. Isto é devido à existência de mesmas substâncias
em composição variada. A diferença pode ser atribuída à nitidez e amplitude
dos picos formados. Essas mudanças ou diferenças foram relacionadas ao
aumento da quantidade de pó de ACN nos andaimes. Além
disso,​[27]​ , ​[29]​ , ​[30]​ , ​[33]​ , ​[35]​ , ​[53]​ . De fato, essa interação iônica é o
fator que atribui a muitas características do andaime, tais como propriedades
mecânicas e comportamentos de degradação.
A análise de XRD revelou informações importantes sobre a fase mineral dos
componentes dos andaimes. Os espectros obtidos revelaram picos
característicos de aragonite. Estudos anteriores
de ​[54]​ , ​[55]​ , ​[53]​ , ​[56]​ , ​[30]​ , ​[33] ​também relataram a existência de picos
dominantes característicos de aragonita em 26,5 e 46,1, semelhantes aos
observados neste estudo. Parece que todos os andaimes que possuem pó de
ACN também têm a forma de aragonita de ​carbonato​ de ​cálcio​. This aragonite
form was presented as the only mineral phase presented in the scaffolds with
no impurities or other substance created through the development procedure.
On the other hand, the intensity of the peaks well matched ACN contained in
all scaffold.
A avaliação do DSC dos andaimes desenvolvidos revelou informações
essenciais relativas às características dos andaimes ideais que serviram como
diretriz para a seleção da melhor composição para estudos avançados. O DSC
foi utilizado para investigar as transformações físicas ou ​transições​ de ​fase​ dos
scaffolds nanocompósitos. As ​temperaturas​ de fusão ou ​transição de ​vidro da
substância foram assim determinadas. Este último, desde uma indicação da
natureza física desses andaimes. A temperatura de fusão (T ​m​ ) é ótima quando
as substâncias utilizadas são cristalinas ou semi-cristalinas​ [32] ​. Quando um
estado vítreo e o estágio da ​transição​ de ​vidro​são seguidos por uma redução
significativa no gráfico sem outros picos presentes, uma temperatura média de
transição vítrea (T g​ ​ ) pode ser determinada ​[52]​ . Através do seu derretimento,
a mistura de substâncias mostrou dois picos próximos uns dos outros. O pico
encontrado em 62,41-75,51 ° C foi atribuído à fusão de gelatina, dextrina e
dextrana. Estas temperaturas são próximas daquelas usadas para extrudar a
mistura. Além disso, há picos menores, aproximadamente, em
230,69-232,58 ° C, possivelmente correlacionados à temperatura de transição
vítrea ( T​ g​ ). Quando a temperatura aumenta, a amostra atinge finalmente a sua
temperatura de fusão (T m​ ​). O método de fusão resulta em um pico
endotérmico na curva DSC. A capacidade de concluir temperaturas de
transição e ​entalpias​ (termodinâmica e química) torna a DSC uma ferramenta
importante na produção de diagramas de fases para diferentes sistemas
químicos. Os resultados do DSC deste estudo estavam de acordo com os
resultados de ​[30]​ , ​[33]​ , ​[48]​ , ​[52]​ , ​[53]​ , ​[57]​ , ​[58]​ . Transições de vidro
Temperatura (T ​g)​ pode acontecer quando a temperatura de um sólido amorfo
é aumentada. Essas transições surgiram como um passo na linha de base do
indicador DSC gravado. É um resultado da capacidade de troca de calor da
amostra e nenhuma fase formal da transformação aconteceu. À medida que a
temperatura aumenta, um sólido amorfo fica menos pastoso. Essa transição
acontece apenas com polímeros e os torna únicos. A poro amorfa sofre apenas
a transio vrea e a poro cristalina sofre apenas fus.
5 . Conclusão
Este estudo concluiu que o uso de uma mistura inovadora
de ​carbonato​ de ​cálcio ​na forma de conchas nanocockle de aragonita em pó e
gelatina, ​dextrina ​e ​dextrano ​é a composição mais adequada que pode garantir
a realização dos fins de andaimes desenvolvidos no verdadeiro sistema
biológico. Esta mistura inovadora também foi essencial para alcançar a
estrutura porosa dos andaimes que determinaram suas características
sucessivas. De tudo, o andaime 5211 atingiu um ponto de inflexão em termos
de morfologia ideal, propriedades físico-químicas ótimas e grande resistência
mecânica. Além disso, esperava muito boa ​adesão celular​ , distribuição e​ taxa
de crescimento​em comparação com os outros andaimes desenvolvidos neste
estudo. Análises de anexos celulares foram feitas e o trabalho de pesquisa
submetido para publicação e avaliações in vivo está sendo realizado em nosso
laboratório para atender todas as principais necessidades a serem consideradas
como substituto ósseo.
Contribuição dos autores
Todos os autores leram e aprovaram o manuscrito final.

Outra aplicação de PCO em biomateriais foi comprovada com o seu uso na forma
nanoparticulada, contendo CaCO​3 no polimorfo aragonita, que por conta da sua
biocompatibilidade e porosidade apresentou bom desempenho na a fabricação de
scaffold biocompósitos com possibilidade de uso em regeneração óssea.

Até à data, alguns estudos sobre a formação de biocompósitos derivados de materiais

residuais foram feitos usando resíduos de conchas de berbigão.