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POP MICROBIOLOGIA

Preparao das lminas: Aps 48 horas em estufa microbiana, se houver crescimento bacteriano, sero montadas as lminas da seguinte forma: flambar a ala calibrada (10 ou 10) na chama azul do bico de Bunsen; esperar esfriar; pegar uma colnia isolada no gar sangue; colocar uma gota de soro fisiolgico em uma lmina; homogeneizar a colnia na lmina; flambar novamente a ala calibrada e colocar as lminas na estufa at secar o esfregao. Colorao de Gram: Aps secar, realizar a colorao de Gram, da seguinte forma: apoiar as lminas na grade da pia; cobri-las com soluo cristal violeta; lav-las com gua destilada; cobr-las com iodo de Gram; lav-las com gua destilada; descor-las durante 10 a 30 segundos com agitao suave com soluo de acetona (30 mL) e lcool (70 mL); lav-las com gua destilada; cobri-las com fucsina (soluo a 2,5% em lcool a 95%) durante 10 a 30 segundos; lav-las com gua destilada e coloc-las para secar em temperatura ambiente. Observar a morfologia das bactrias com o auxlio de um microscpio ptico, na objetiva 100X com leo de imerso.

Provas de identificao bacteriana: Bactrias cocos gram positivos CATALASE: flambar a ala calibrada; esperar esfriar; pegar uma colnia isolada; coloc-la em uma lmina; pipetar 25l do perxido de oxignio; coloc-lo em contato com a colnia; se for catalase positiva, ocorrer uma efervescncia rpida identificando uma bactria do gnero Staphylococcus; se for negativo, no ocorrer nada, identificando um Streptococcus.

CATALASE POSITIVA: Staphylococcus sp. COAGULASE: NOVOBIOCINA:

CATALASE NEGATIVA: Streptococcus sp. SEMEAR EM GAR SANGUE OBSERVAR A HEMLISE

OPTOQUINA: BACITRACINA: BILE ESCULINA E NACL: Enterococcus sp.

BACILOS GRAM POSITIVOS: TSI: SIM: CITRATO:

ANTIBIOGRAMA: Segundo a Clinical and Laboratory Standards Institute - CLSI, o meio padronizado utilizado para a realizao de antibiogramas o gar Mueller-Hinton. O inoculo utilizado uma suspenso direta das colnias padro 0,5 de McFarland. Essa suspenso obtida com o auxlio de um swab estril, pega-se colnias do gar BHI e dissolve-as em soro fisiolgico em um tubo estril, at esta se igualar turvao do tubo 0,5 da escala de MacFarland. Com o mesmo swab, inocula-se a placa de gar Mueller-Hinton. Faz-se uma estria ao redor da placa e estri-lo pelo menos quatro vezes sem deixar nenhum espao do meio sem inocular.

Esquema demonstrando a tcnica de semeadura do meio Mueller-Hinton para a realizao do antibiograma.

Aguardar por um perodo de dez minutos para que o meio absorva o inoculo. O mtodo realizado ser o de difuso em disco. Procedimentos: com o auxlio de uma pina estril, colocar os discos de antibiticos no meio com um espao entre eles de 15 mm, pressionando-os levemente cada disco para que fique aderido ao meio.

Esquema demonstrando o espaamento entre os discos de difuso com antibiticos. Logo depois, sero incubados em estufa microbiolgica com temperatura de 33 a 35C por 16 a 24 horas. Aps esse perodo, os halos de inibio formados sero medidos com rguas e comparados com os dados da tabela da Clinical and Laboratory Standards Institute CLSI.