Diagnóstico

laboratorial de
endoparasitismo

Profª: Msc. M.V. Charline

Godinho Padilha
DIAGNÓSTICO LABORATORIAL DE
ENDOPARASITISMO
DIAGNÓSTICO • Anamnese
• Informações epidemiológicas
CLINICO
• Sinais clínicos

DIAGNÓSTICO • Etiológico
• Demonstração do patógeno ou seus produtos
LABORATORIAL
• Imunológico
• Estudo de respostas imunes
DIAGNÓSTICO LABORATORIAL DE
ENDOPARASITISMO
• Importante identificar a forma como o parasito se
comporta:

• É parasita do TGI?
• Do sistema urinário?
• Sistema respiratório?
• Sistema vascular?

• A partir disso se escolhe o melhor material a ser

coletado.
COLETA DE URINA
• Micção voluntária
• Compreensão de bexiga
• Cistocentese
• Cateterismo

• Sedimentação
• Flutuação
EXAME DE FEZES

• Embora, atualmente, haja bastante interesse no uso de sorologia e

métodos moleculares como recurso ao diagnóstico de helmintoses, o
exame de fezes para a pesquisa quanto à presença de ovos ou larvas
de vermes permanece como o método auxiliar de rotina mais
comumente empregado para o diagnóstico.
COLETA DE FEZES
• Amostras de fezes devem ser coletadas, preferencialmente, do reto e
examinadas ainda frescas.

• Se houver dificuldade em coletar amostras do reto, então fezes frescas

podem ser coletadas do campo ou do chão.
• o ideal é que a coleta seja realizada apenas se foi observado o momento em
que o animal defecou.

• Uma luva de plástico é adequada para a coleta, e deve ser virada do

avesso para atuar como receptáculo.
COLETA DE FEZES
COLETA DE FEZES
• Amostras individuais são necessárias e, para ruminantes, devem ser
coletadas, no mínimo, 10 amostras por rebanho.

• A ampla variação na contagem de ovos nas fezes (COF) entre animais

que pastam juntos no mesmo piquete significa que o efeito da
amostragem aleatória tem impacto.

• O ideal é que aproximadamente 5 g de fezes sejam coletadas.

COLETA DE FEZES
• Para aves, amostras representativas de um número de animais devem
ser coletadas de áreas diferentes do galpão.

• Para animais de estimação menores, um termômetro ou bastão de

vidro podem ser usados, ou as fezes podem ser coletadas da gaiola ou
do espaço onde esses animais vivem.
COLETA DE FEZES
• Uma vez que os ovos se tornam embrionados rapidamente, as fezes
devem ser armazenadas em um refrigerador, a não ser que o exame
seja realizado no mesmo dia.

• Para amostras enviadas por correio, um sistema de armazenamento

anaeróbio em um recipiente a vácuo que contenha água da torneira
irá minimizar o desenvolvimento e a eclosão.
COLETA DE FEZES
COLETA DE FEZES
COLETA DE FEZES

–2a8C
MÉTODO DO ESFREGAÇO DIRETO
• Algumas gotas de água e uma quantidade equivalente de fezes são
misturadas a uma lâmina de microscópio.

• A inclinação da lâmina permite que os ovos, mais leves, flutuem para

longe das partículas mais pesadas.

• Uma lamínula é colocada sobre o líquido e a preparação é então

examinada microscopicamente. É possível detectar a maioria dos ovos
e larvas por esse método, mas em razão da pequena quantidade de
fezes usada, ela pode detectar apenas infecções relativamente intensas.
MÉTODO DO ESFREGAÇO DIRETO

x10 para ovos

MÉTODO DO ESFREGAÇO DIRETO

No mínimo x10 para ovos

MÉTODOS DE FLUTUAÇÃO
• A base para qualquer método de flutuação é que, quando os ovos dos
vermes são suspensos em um líquido com densidade maior que
aquela dos ovos, esses últimos flutuarão para a superfície.

• Os ovos dos nematódeos e cestódios flutuam em um líquido com

densidade de 1,10 a 1,20.

• Para os ovos de trematódeos, que são muito mais pesados, é

necessária uma densidade de 1,30 a 1,35.
MÉTODOS DE FLUTUAÇÃO
• As soluções de flutuação usadas para ovos de nematódeos e cestódios
consistem em:
• Cloreto de sódio (NaCl), sulfato de magnésio (MgSO4) ou solução de açúcar com
densidade de 1,20.

• Para ovos de trematódeos, soluções saturadas de:

• Cloreto de zinco (ZnCl2), sulfato de zinco (ZnSO4) ou solução mais cara e tóxica
de potássio, mercúrio e iodo.

• Qualquer que seja a solução utilizada, a densidade deve ser verificada

regularmente e a avaliação da solução que contém os ovos ou larvas
deve ser feita rapidamente, caso contrário, podem ocorrer distorções.
FLUTUAÇÃO DIRETA
• Uma pequena quantidade de fezes frescas (aprox. 2,0 g) é acrescentada a 10
mℓ de solução de flutuação;

• Após homogeneização vigorosa, a suspensão é colocada sobre um tubo teste e

mais solução de flutuação é acrescentada para preencher o tubo até a
superfície;

• Uma lamínula é então colocada sobre a superfície do líquido e ambos são

deixados de pé por 10 a 15 min;

• A lamínula é então removida, colocada sobre uma lâmina e examinada sob

microscópio.
FLUTUAÇÃO DIRETA
MÉTODO DE MCMASTER
MODIFICADO MELHORADO
• Essa técnica quantitativa é utilizada quando se deseja estimar a carga
parasitária por meio da contagem do número de ovos ou larvas por
grama de fezes.

• Uma versão abreviada dessa técnica consiste em homogeneizar 3 g de

fezes em 42 mℓ de solução com sal, peneirar e pipetar o filtrado
diretamente dentro da lâmina de McMaster.

• Embora seja um processo mais rápido, é mais difícil “ler” o conteúdo

da lâmina em razão da sua coloração mais escura.
MÉTODO DE MCMASTER
MODIFICADO MELHORADO
MÉTODO DE MCMASTER
MODIFICADO MELHORADO
MÉTODO DE MCMASTER
MODIFICADO MELHORADO
MÉTODO DE SEDIMENTAÇÃO
• É considerado o método universal.

• Hoffman.

• Sedimentação espontânea.

• Sedimentação por centrifugação.

MÉTODO DE SEDIMENTAÇÃO
IDENTIFICAÇÃO DE OVOS DE
NEMATÓDEOS
• A pesquisa de ovos de nematódeos nas fezes é um recurso útil para
diagnóstico de infecções por esses vermes.

• Ovos de estrôngilos têm, aproximadamente, 60 a 80 μm de

comprimento, formato oval, parede fina e não são diferenciados com
facilidade.

• Entretanto, ovos de Trichuris, Nematodirus spp. e Strongyloides

podem ser identificados, contados, e relacionados separadamente.
IDENTIFICAÇÃO DE OVOS DE
NEMATÓDEOS
IDENTIFICAÇÃO DE OVOS DE
NEMATÓDEOS
• É impossível calcular a partir da COF a população verdadeira de vermes no
hospedeiro, uma vez que muitos fatores influenciam a produção de ovos de
parasitas e o número de ovos também varia de acordo com a espécie.
• Ainda assim, em ruminantes, por exemplo, a contagem de ovos acima de 1.000
OPG, em geral, é considerada indicativa de infecções maciças e aquela acima de
500 OPG é considerada como infecção moderada.
• Entretanto, um OPG baixo não é necessariamente indicativo de infecções muito
baixas.
• Os ovos de algumas espécies, tais como determinados ascarídeos, Strongyloides,
Oxyuris, Trichuris e Capillaria, podem ser reconhecidos morfologicamente com
facilidade. Entretanto, com exceção de Nematodirus spp., é necessário mensurar os
ovos de tricostrongilídeos comuns para diferenciação
COPROCULTURA
• Robert & O’ Sullivan.

• Baermann.

• Cultura e identificação de larvas infectantes de terceiro estágio.

• O método padrão para identificação de ovos de nematódeos tricostrongilídeos nas

fezes é realizar cultura das fezes por 7 a 10 dias e então isolar as larvas de terceiro
estágio (L3) das fezes.

• As L3 podem então ser identificadas até gênero ou, em alguns casos, até a espécie.
COPROCULTURA
• Duas técnicas são amplamente utilizadas para a cultura de larvas
infectantes a partir de ovos de nematódeos.

• As fezes são armazenadas no escuro a temperatura de 21 a 24°C.

• Após 7 a 10 dias de incubação, é preenchida com água e deixada em

repouso por 2 a 3 h.

• As larvas irão migrar para a água, e em seguida são mortas utilizando

uma solução de lugol para posterior exame microscópico.
 Baermann.
COPROCULTURA
COPROCULTURA

Robert & O’ Sullivan.

COPROCULTURA
IDENTIFICAÇÃO DE OVOS DE
TREMATÓDEOS
• Para esses, um líquido de flutuação de densidade maior, tal como uma
solução saturada de sulfato de zinco (ZnSO4), precisa ser usado, ou um
método de sedimentação deve ser empregado.

• Ovos de trematódeos são grandes, ovais e apresentam um opérculo em

uma extremidade.

• Ovos de fascíolas hepáticas (Fasciola) têm coloração castanha e pode ser

necessário diferenciá-los de ovos de trematódeos ruminais
(Paramphistomum, Cotylophoron etc.), cujos ovos têm coloração muito
mais clara (Figura 4.3).
IDENTIFICAÇÃO DE OVOS DE
TREMATÓDEOS
• Método de flutuação do sulfato de zinco para contagem de ovos de
trematódeos:

• Ovos de fascíolas hepáticas não flutuarão em solução de NaCl saturada,

mas flutuarão em solução de ZnSO4 saturada, que apresenta densidade
maior.

• O procedimento é exatamente o mesmo daquele descrito para o

método de McMaster modificado melhorado, com ZnSO4 substituindo
NaCl.
OUTROS MÉTODOS
• NECRÓPSIA
• FITA GOMADA
• ELISA
• PCR
• Entre outros.
BOVINOS
BOVINOS
BOVINOS
EQUINOS
EQUINOS
SUÍNOS
SUÍNOS
CÃES E GATOS
CÃES E GATOS
AVES
AVES