1 CRESCIMENTO MICROBIANO 1.1 Fatores Fsicos Incluem temperatura, pH e presso osmtica. Influncia dos fatores fsicos 1.

Classificar os microrganismos em cinco grupos com base na faixa de temperatura tima para seu crescimento. Identificar os mecanismos que controlam as aria!"es de pH no meio de cultura $xplicar a import%ncia da presso osmtica para o crescimento microbiano. 1.1.1 Temperatura & maioria dos microrganismos cresce bem nas temperaturas ideais para os seres 'umanos. (o entanto, certas bact)rias so capa*es de crescer em temperaturas extremas, onde a maioria dos organismos eucariticos no sobre i eria. +s microrganismos so classificados em trs grupos prim,rios considerando as aria!"es na temperatura de crescimento- psicrfilos .crescem em baixas temperaturas/, mesfilos .crescem em temperaturas moderadas/ e termfilos .crescem em altas temperaturas/. & maioria dos microrganismos cresce dentro de aria!"es limitadas de temperatura, sendo que a temperatura m,xima e mnima de crescimento pode0se distanciar somente em #12C. 1.1.2 pH + pH foi definido como a acide* ou a alcalinidade de uma solu!o. & maioria das bact)rias cresce mel'or dentro das aria!"es pequenas de pH sempre perto da neutralidade, entre pH 3,4 e 5,4. 6oucas bact)rias so capa*es de crescer em pH ,cido como pH 7,1. 8m tipo de bact)ria quimioautotrfica encontrada em ,guas de drenagem de minas de car o, oxidando enxofre para formar ,cido sulf9rico, pode sobre i er em alores de pH 1,1. +s fungos filamentosos e as le eduras podem crescer em aria!"es de pH maiores que as bact)rias, sendo, no entanto, os alores timos de pH para fungos geralmente inferior, entre pH 4 e 3. 1.1.3 Press o Osm!tica +s microrganismos retiram da ,gua, presente no seu meio ambiente, a maioria dos seus nutrientes sol9 eis. & ,gua presente dentro da c)lula pode ser remo ida por ele a!"es na presso osmtica. :uando uma c)lula microbiana se encontrar em uma solu!o contendo uma

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concentra!o de sais superior ;quela do interior da c)lula ocorrer, a passagem da ,gua de dentro da c)lula, atra )s da membrana plasm,tica, para o meio extracelular. & perda de ,gua por osmose causa a plasmlise ou diminui!o da membrana plasm,tica da c)lula. & import%ncia deste fen<meno est, na inibi!o do crescimento no momento em que a membrana plasm,tica se separa da parede celular. &ssim, a adi!o de sais em uma solu!o, com conseq=ente aumento da presso osmtica, pode ser utili*ada na preser a!o dos alimentos, pois a alta concentra!o de sal ou de a!9car remo e a ,gua do interior da c)lula microbiana impedindo seu crescimento. 1.2 Fatores "umicos >o necess,rios ,gua, fontes de carbono e nitrognio, minerais, oxignio e fatores org%nicos de crescimento. Influncias dos fatores qumicos1. ?eterminar o uso de cada um dos quatro elementos .carbono, nitrognio, enxofre e fsforo/ necess,rios para o crescimento microbiano. $xplicar como ocorre a classifica!o dos microrganismos usando como referncia as necessidades de oxignio. Identificar os mecanismos utili*ados pelos microrganismos para e itar os efeitos txicos da formas de oxignio. 1.2.1 Car#o$o + carbono, @unto com a ,gua, ) um dos elementos mais importantes para o crescimento microbiano. + carbono ) essencial para a sntese de todos os compostos org%nicos necess,rios para a iabilidade celular sendo considerado o elemento estrutural b,sico para os seres i os. 1.2.2 Nitro%&$io' E$(o)re e F!s)oro +s organismos utili*am nitrognio inicialmente para sinteti*ar os grupos amino que esto presentes nos amino,cidos fa*endo parte das protenas. Auitas bact)rias obtm estes compostos nitrogenados sinteti*ados pela c)lula. +utras bact)rias utili*am nitrognio a partir de ons. + enxofre ) utili*ado a sntese dos amino,cidos contendo enxofre e de itaminas como a tiamina e biotina. &s fontes naturais de enxofre importantes incluem o on sulfato, sulfito de 'idrognio e amino,cidos que contm enxofre na sua estrutura. + fsforo ) essencial para a sntese dos ,cidos nucl)icos e para os fosfolipdios componentes da membrana celular. +

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pot,ssio, o magn)sio e o c,lcio tamb)m so elementos necess,rios para os microrganismos frequentemente como co0fatores para rea!"es en*im,ticas. 1.2.3 O(i%&$io Brande dos organismos i os, de ido ao seu metabolismo, atualmente necessita de oxignio para sua respira!o aerbica. +s microrganismos capa*es de utili*ar oxignio molecular so capa*es de produ*ir mais energia a partir do uso de nutrientes que organismos que no usam o oxignio .anaerbicos/. +s aerbicos obrigatrios possuem uma des antagem em rela!o aos outros organismos, pois o oxignio no ) capa* de dissol er0se eficientemente na ,gua do seu meio ambiente apresentando, portanto baixos n eis de oxignio dissol ido. $m fun!o disso muitas bact)rias aerbicas desen ol eram a capacidade de continuar seu crescimento na ausncia de oxignio. 1.2.* +%ua $ssencial a qualquer microrganismo, embora as necessidades se@am ariadas. C o sol ente uni ersal, mas sua disponibilidade ) ari, el .solu!"es com a!9cares ou sais tm menos ,gua dispon el/. &w- presso do apor em equilbrio com a solu!oD p da ,gua, ariando de 1 a 1. +s organismos que i em em ambientes onde a disponibilidade de ,gua ) baixa desen ol em mecanismos para extrair ,gua do ambiente, pelo aumento da concentra!o de solutos internos, se@a bombeando ons para o interior ou sinteti*ando ou concentrando solutos org%nicos .solutos compat eis/, que podem ser a!ucares, ,lcoois ou amino,cidos .prolina, betaine, glicerol/. 1.2., Fatores Or%-$icos .e Crescime$to >o aqueles compostos org%nicos essenciais que o organismo no ) capa* de sinteti*ar necessitando retir,0los do meio ambiente. &s itaminas so os fatores org%nicos de crescimento para os 'omens. Auitas itaminas tm a fun!o de coen*imas necess,rias para suas ati idades en*im,ticas sendo independentes de fontes extracelulares. (o entanto, em algumas bact)rias certas itaminas so consideradas como fatores org%nicos de crescimento de ido ; ausncia de en*imas que participam das rotas metablicas de sua sntese. +utros fatores org%nicos de crescimento necess,rios para algumas bact)rias podem ser amino,cidos purinas e pirimidinas. 2 CRESCIMENTO /AS C01T0RAS BACTERIANAS 2.1 /i2is o #acteria$a

Como mencionado no incio do captulo, o crescimento bacteriano ) considerado o aumento do n9mero de indi duos e no o aumento de taman'o de uma determinada c)lula. &s bact)rias normalmente se reprodu*em por fisso bin,ria. (a primeira etapa da di iso .1/ ocorre o alongamento da c)lula e replica!o do ?(& cromossomal. +corre depois o .2/ incio da in agina!o da parede celular e da membrana plasm,tica no local entre os dois ?(&s cromossomais. $m determinado momento .#/ as duas se!"es da parede celular se encontram formando uma parede atra )s da c)lula, sendo, finalmente, .7/ produ*idas duas c)lulas indi iduais idnticas ; c)lula parental. 6oucas esp)cies bacterianas podem0se reprodu*ir por brotamento, formando uma pequena regio que inicia um crescimento .um broto/ que quando atinge o taman'o aproximado da c)lula parental se separa. &lgumas bact)rias filamentosas .certos actinomicetos/ se reprodu*em atra )s de uma cadeia de esporos que so mantidos externamente nas pontas dos filamentos. 6oucas esp)cies bacterianas filamentosas simplesmente se fragmentam e estes fragmentos iniciam o crescimento de uma no a c)lula. 2.2 Tempo .e 3era4 o 6ara o c,lculo do tempo de gera!o bacteriana consideraremos somente o tipo de di iso por fisso bin,ria, pois ) o m)todo de reprodu!o mais comumente encontrado. + tempo necess,rio para uma c)lula se di idir .e sua popula!o dobrar de taman'o/ ) denominado tempo de gera!o. $ste tempo pode sofrer aria!"es entre os organismos e dependem das condi!"es ambientais, como temperatura. & maioria das bact)rias apresenta um tempo de gera!o de 1 a # 'oras, mais algumas bact)rias podem necessitar de mais de 27 'oras para cada gera!o. .&s informa!"es necess,rias para o c,lculo do tempo de gera!o so apresentadas o apndice./ 8m grande n9mero de c)lulas ser, produ*ido quando o processo de fisso bin,ria ocorrer na ausncia de controle. 8ma c)lula com tempo de duplica!o de 21 minutos 0 como exemplo temos a bact)ria $.coli crescendo em condi!"es ideais de culti o aumentar, seu n9mero aps 21 gera!"es, para aproximadamente 1 mil'o de c)lulas. $ste aumento ocorrer, em aproximadamente 5 'oras. &ps #1 gera!"es, ou 11 'oras, a popula!o ser, de 1 bil'o e em 27 'oras sero um n9mero contendo 21 *eros. & representa!o gr,fica de popula!"es to grandes, utili*ando numera!o aritm)tica, torna0se bastante dificultada. 6ortanto so utili*adas normalmente escalas logartmicas para representar graficamente o crescimento bacteriano. + entendimento das representa!"es logartmicas das popula!"es bacterianas necessita da utili*a!o da matem,tica sendo fundamental para os microbiologistas. 2.3 Fases .e Crescime$to 2.3.1 Fase 1a% ?urante certo perodo de tempo o n9mero de c)lulas sofre pequenas aria!"es, pois as bact)rias no se reprodu*em imediatamente quando so colocadas em um no o meio de

cultura. $ste perodo em que ocorre pouca ou ausncia de di iso celular ) denominado fase Eag podendo0se estender0se por uma 'ora at) ,rios dias. ?urante este tempo as c)lulas se encontram em um estado de latncia. $st, ocorrendo nesta popula!o um perodo de intensa ati idade metablica, principalmente sntese de ?(& e de en*imas. 2.3.2 Fase 1o% & partir de um determinado momento as c)lulas iniciam seu processo de di iso entrando no perodo de crescimento ou aumento logartmico denominado fase log ou fase de crescimento exponencial. ?urante este perodo a reprodu!o celular encontra0se extremamente ati a onde o tempo de gera!o atinge um alor constante. + gr,fico logartmico dessa fase de crescimento ) uma lin'a reta de ido a este tempo de gera!o constante. $sta fase log ) o perodo de maior ati idade metablica da c)lula sendo o est,gio preferido para fins industriais, pois o produto necess,rio seria produ*ido eficientemente. (o entanto, nesta fase de crescimento log os microorganismos so particularmente sens eis as mudan!as ambientais. &s radia!"es ou mesmo muitos dos compostos antimicrobianos F o antibitico ampicilina, por exemplo F afetam fases importantes do desen ol imento celular sendo, portanto extremamente danosos nesta fase de crescimento. 2.3.3 Fase Estacio$5ria (esta fase, os nutrientes esto escasseando e os produtos txicos esto tornando0se mais abundantes. (esta etapa no ', um crescimento lquido da popula!o, ou se@a, o n9mero de c)lulas que se di ide ) equi alente ao n9mero de c)lulas que morrem. (a fase estacion,ria que so sinteti*ados ,rios metablitos secund,rios, que incluem antibiticos e algumas en*imas. (esta etapa ocorre tamb)m a esporula!o das bact)rias. Goram detectados alguns genes .sur/ que so necess,rios ; sobre i ncia das c)lulas na fase estacion,ria. &l)m destes, existem outros genes .fatores s alternati os da H(& polimerase, protenas protetoras contra dano oxidati o/. 2.3.* Fase .e /ec6$io ou Morte Ce6u6ar & maioria das c)lulas est, em processo de morte, embora outras ainda este@am se di idindo. & contagem total permanece relati amente constante, enquanto a de i, eis cai lentamente. $m alguns casos ', a lise celular. Culturas descontnuas tendem a sofrer muta!"es que podem repercutir na popula!o como um todo. &s prprias condi!"es ambientais tendem a promo er aria!"es de car,ter fenotpico .re ers el/ nas culturas. $m geral temos o gr,fico que indica as fases-

2. * Crescime$to em cu6turas co$t$uas I)cnica muito usada nos processos industriais de obten!o de produtos microbiolgicos. (estes casos, tem0se o interesse em manter as c)lulas em fase log ou estacion,ria. 8tili*am0 se fermentadores ou quimiostatos, que permitem um crescimento em equilbrio din%minco, 'a endo assim um controle da densidade populacional e da taxa de crescimento. $stes so respecti amente controlados pela concetra!o do nutriente limitante .fonte de C ou (/ e pela taxa de fluxo .taxa de dilui!o/. $m baixas concentra!"es do nutriente limitante, a taxa de crescimento ) proporcional ; concentra!o do nutriente .que ) irtualmente *ero/. 2., Crescime$to Si$cro$i7a.o Inicialmente obtido por processos que retarda am a sntese de ?(&. &tualmente, utili*a0se m)todos de separa!o mec%nica das c)lulas menores, rec)m0di ididas. 6ode ser feita pela filtra!o em ,rios pap)is de filtro, que ret)m c)lulas maiores, em fase de di iso. REFER8NCIAS I+HI+H&, BJ G8(K$, LJ C&>$, CJ Microbiologia 3M. $d. >o 6aulo &rtmed 211# p. 1470151 CH$>CIA$(I+ AICH+LI&(+ F Cur2a .e Crescime$to ?ispon el emN 'ttp-DD sites.unb.brDibDcelDmicrobiologiaDcrescimentoDcrescimento.'tmlO