ANTI IgG

(Soro de Coombs)
Soro
Anti Gamaglobulinas
Humanas

PROTHEMO
Produtos Hemoterpicos Ltda.

PARA TESTES EM
LMINA OU TUBO

SOMENTE PARA
USO DIAGNSTICO
IN VITRO

Conservar entre: 2 e 8C

No congelar

Conservante: Azida de Sdio 0,1 %

Responsvel Tcnico:
Janaina Martins
CRF: 30.331

PRINCPIO DO TESTE
O soro Anti-IgG (Soro de Coombs) Prothemo destina-se pesquisa de
anticorpos da frao gamaglobulina humana, quer estejam adsorvidos s
hemcias humanas in vivo (Teste de Coombs Direto), quer estejam
livres no plasma, o que se detecta aps adsoro in vitro (Teste de
Coombs Indireto).
Este reagente NO SE DESTINA a demonstrar anticorpos NO
GAMAGLOBULINAS HUMANAS os quais so detectados por sua
propriedade de fixar fraes do complemento s hemcias, tais como os
anticorpos dos Sistemas Kidd, Lewis, Etc. Para a pesquisa destes
anticorpos dever ser utilizado o soro Anti-Humano (Poliespecifico)
Prothemo que, alm de Anticorpos Anti-IgG contm anticorpos contra a
frao do complemento (C3d).
DESCRIO DO PRODUTO
O soro Anti-IgG (Soro de Coombs) Prothemo preparado a partir de
soro de coelhos e/ou cabras imunizados frao IgG (gamaglobulina)
do soro humano.
O diluente do reagente contm: Cloreto de Sdio, Albumina Bovina,
Tampo Fosfato, Potencializadores e Azida de Sdio 0,1%.
Os reagentes foram otimizados para serem usados como fornecidos
sem adies ou diluies.
O produto fornecido em frascos de 10 mL, acompanhados de contaGotas.
Cada gota equivale a 50 L.
SORO ANTI-IgG (SORO DE COOMBS)
PROTHEMO
Cdigo
Embalagem
1082
10 ml
1083
5x10 ml
MATERIAIS NECESSRIOS NO FORNECIDOS
Teste em Lmina: lminas de vidro, pipetas Pasteur e soluo salina
0,9%.
Teste em Tubo: tubos de vidro (0x75mm ou 12x 75mm), pipetas Pasteur,
Banho-Maria a 37C, centrfuga e soluo salina 0,9%.
ARMAZENAMENTO E PRECAUES
Conservar em geladeira entre 2 e 8C. No congelar ou expor o produto
a temperaturas elevadas. No utilizar aps o vencimento.
No utilizar o produto se observar ntida turvao, o que pode indicar
contaminao bacteriana ou deteriorao do produto.
Evitar a contaminao do reagente. No reutilizar os frascos vazios.
SOMENTE PARA USO DIAGNSTICO IN VITRO

Os materiais de origem biolgica devem ser considerados como se

fossem potencialmente infectantes. Devem ser estabelecidos mtodos
adequados para o manuseio e descarte equivalente aos utilizados para
as amostras de sangue.
O no seguimento das instrues de uso pode resultar na diminuio da
performance tima do produto.
COLETA DA AMOSTRA
O sangue deve ser coletado por procedimento assptico aprovado, com
ou sem adio de anticoagulante.
As hemcias obtidas de cogulo podem ser utilizadas em at 5 dias aps
sangria. As amostras coletadas em EDTA ou Heparina devem ser
utilizadas em at 48 horas. Se a demora para a execuo do teste for
inevitvel, hemcias de sangue coagulado e as colhidas em EDTA ou
Heparina devem ser separadas do soro/plasma, lavadas e
ressuspendidas em soluo preservativa de glbulos. Estocar a 2 a 8
C, por no mximo, 20 dias.
O sangue coletado em anticoagulante ACD, CPD e CPDA-1 pode ser
utilizado at a data de expirao, se armazenado entre 2 e 8C.
O armazenamento prolongado de hemcias antes da execuo do teste
pode causar deteriorao de antgenos e resultar em reaes mais
fracas.
PROCEDIMENTO DO TESTE
TESTE DE COOMBS DIRETO OU TESTE DA ANTIGLOBULINA
DIRETO
Este teste empregado na pesquisa de anticorpos (gamaglobulinas) j
fixados s hemcias, como ocorre na Doena Hemoltica do RecmNascido, Anemia Hemoltica Adquirida e em pacientes que tenham
recebido transfuses incompatveis.
1.
Colocar em um tubo de hemlise uma gota de suspenso de
hemcias do paciente a 5%, previamente preparadas em soluo salina
0,9%.
2.
Lavar as hemcias do tubo por trs vezes com soluo salina
0,9%. Desprezar o sobrenadante, secando as bordas do tubo na ltima
lavagem para retirar toda a soluo.
3.
Acrescentar duas gotas do Soro Anti-IgG (Soro de Coombs)
PROTHEMO. Misturar bem.
4.
Centrifugar a 3 400 rpm por 15 segundos.
5. Agitar suavemente o tubo para pesquisar a presena ou no de
aglutinao.

TESTE DE COOMBS INDIRETO OU TESTE DA ANTIGLOBULINA

INDIRETO
Este teste utilizado na pesquisa de anticorpos bloqueadores
(incompletos), os quais se fixam s hemcias in vitro mas no as
aglutinam.
Para que a reao seja observada necessria adio do Soro AntiIgG (Soro de Coombs) PROTHEMO ao teste.
O teste de Coombs Indireto realizado nas pesquisas de anticorpos
bloqueadores, nas pesquisas de antgenos (usando o soro classificador
apropriado) e nas provas de compatibilidade, desde que tais reaes no
dependam de complemento para a sua deteco.
Nos casos em que a reao pode ser mais bem detectada pela fixao
de complemento, deve-se usar o Soro Anti-Humano (Anti-IgG e AntiC3d) Poliespecfico PROTHEMO.
PROCEDIMENTO DO TESTE
1.
Colocar em um tubo de hemlise uma gota de suspenso de
hemcias a 5% escolhidas para o teste, previamente preparadas em
soluo salina 0,9%.
2.
Adicionar duas gotas de soro a ser testado.
3.
Acrescentar duas gotas de Albumina Bovina a 22%
PROTHEMO.
4.
Incubar o tubo em Banho-Maria durante 15-30 minutos a 37C.
5.
Lavar as hemcias do tubo por trs vezes com soluo salina
0,9%, secando as bordas do tubo na ltima lavagem para retirar toda a
soluo.
6.
Acrescentar duas gotas do Soro Anti-IgG (Soro de Coombs)
PROTHEMO. Misturar bem.
7.
Centrifugar a 3 400 rpm por 15 segundos.
8.
Agitar suavemente o tubo para pesquisar aglutinao
INTERPRETAO:
POSITIVO: (Presena de aglutinao): Presena de anticorpos livres
no soro do paciente, os quais correspondem a um ou mais antgenos
presentes nas hemcias usadas no teste.

CONTROLE POSITIVO E CONTROLE NEGATIVO PARA O TESTE DE

COOMBS INDIRETO
1.
Na execuo do teste de Coombs Indireto de primordial
importncia realizar em paralelo os controles positivo e negativo.
2.
Colocar em dois tubos de hemlise uma gota de suspenso a 5%
de hemcias O Rh Positivo, previamente preparadas em soluo salina
0,9%. Identific-los.

3.
Adicionar ao tubo controle negativo uma gota de soluo salina
0,9% e ao tubo controle positivo uma gota de reagente Anti-D
PROTHEMO.
4.
Executar o mesmo procedimento tcnico descrito para o teste de
Coombs Indireto a partir do item no 3.
TCNICAS PARA PESQUISA DAS FORMAS FRACAS DO ANTGENO
D (DU )
O antgeno Du uma variante do antgeno D e embora se comporte de
maneira diferente nas tcnicas rotineiras de determinao do antgeno D
to antignico quanto este. O indivduo portador do antgeno Du deve
ser, para todos os efeitos, considerado como Rh Positivo.
1.
Colocar em um tubo de hemlise uma gota de reagente Anti-D
PROTHEMO. Identific-lo e em um segundo tubo, colocar uma gota
de Controle Rh PROTHEMO como controle negativo.
2.
A cada tubo acrescentar uma gota de suspenso de hemcias a
5% previamente preparadas em soluo salina 0,9%. Misturar bem.
3.
Incubar os dois tubos a 37C durante 15 a 30 minutos
4.
Centrifugar a 3 400 rpm por 15 segundos.
5.
Agitar suavemente os dois tubos para pesquisar a presena ou
no de aglutinao.
6.
Lavar as hemcias dos dois tubos por trs vezes com soluo
fisiolgica. Aps a ltima lavagem, desprezar o sobrenadante, secando
as bordas do tubo para retirar toda soluo fisiolgica.
7.
A cada tubo adicionar duas gotas de Soro Anti-IgG (Soro de
Coombs) PROTHEMO. Misturar bem.
8.
Centrifugar a 3.400 rpm por 15 segundos.
9.
Agitar suavemente os tubos para pesquisar a presena ou no de
aglutinao.
INTERPRETAO DOS RESULTADOS
Se no houver aglutinao em nenhum dos tubos, o sangue deve ser
classificado como Rh negativo.
Se houver aglutinao apenas no tubo que recebeu o reagente Anti-D
PROTHEMO o sangue portador do Fator Du e deve ser considerado
como Rh positivo.
Se houver aglutinao em ambos os tubos, a determinao do Fator Du
fica prejudicada e portanto, estaremos diante de hemcias j
sensibilizadas por algum anticorpo. Se o sangue for de um doador, o
mesmo no poder ser usado para fins transfusionais.
LIMITAES DO PROCEDIMENTO TCNICO
I - Resultados FALSO-NEGATIVOS podem ocorrer:
1. Quando as hemcias no forem apropriadamente lavadas ou
globulinas humanas estiverem presentes na vidraria, resultando
numa neutralizao das antiglobulinas humanas.
2. Quando os anticorpos se eluem das hemcias durante incubao

inadequada, no permitindo uma apropriada sensibilizao dos

glbulos.
3. Quando hemcias e/ou reagente no so adequadamente
conservados na temperatura indicada, perdendo a reatividade.
4. Quando o Soro Anti-IgG (Soro de Coombs) foi omitido durante o
teste.

II - Resultados FALSO-POSITIVOS podem ocorrer:

1. Quando hemcias com teste de Coombs Direto positivo so
usadas durante o procedimento tcnico do teste de Coombs Indireto.
2. Quando so utilizadas amostras de sangue contaminado.
3. Quando for realizada uma centrifugao excessiva.
4. Quando o soro, as hemcias e o Soro Anti-IgG(Soro de Coombs)
estiverem excessivamente frios, detectando a presena de
aglutininas frias.
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
1-Walker Rh, ed. Technical Manual. 11th Edition. Bethesda: AABB, 1993.
2-Race R.R and Sanger R. Blood Groups in Man, 6th Edition Oxford
Blackwell Scientific Publishers,1975.
3-Mollison PL. Blood Transfusion in Clinical Medicine. 7th Edition. Oxford
Blackwell Scientific, 1983.
4-Guidelines for the Blood Transfusion Service H.M.S.O.
GARANTIA
Este produto garantido por Prothemo Produtos Hemoterpicos Ltda
durante o prazo de validade indicado no rtulo se conservado e utilizado
segundo as instrues recomendadas.
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Data da edio: Nov/2009