UNIMONTES - Universidade Estadual de Montes Claros CCET- Centro de Cincias Exatas e Tecnolgicas DCA- Campus Janaba- MG Curso: Agronomia

Disciplina: Feijo e Soja Prof: Abner

Fixao Biolgica de Nitrognio na Cultura da Soja

Acadmicos: Rayane C. Santos Rubens G. Caires Leandro Natlia

Janaba, novembro de 2010.

Introduo O nitrognio (N) o nutriente requerido em maior quantidade pela cultura da soja (Glycine max). Estima-se que para produzir 1000 kg de gros so necessrios 80 kg de N. Basicamente, as fontes de N disponveis para a cultura da soja so os fertilizantes nitrogenados e a fixao biolgica do nitrognio (FBN). O sucesso da soja no Brasil se deve a um programa de melhoramento direcionado obteno de cultivares com alta produo sem adubao nitrogenada e ao desenvolvimento em paralelo de inoculantes contendo rizbios adaptados s condies e solos brasileiros. O avano da soja para os cerrados se deve, alm da identificao e soluo dos problemas de fertilidade, principalmente obteno de inoculantes novos capazes de competir com a microflora de um ecossistema perturbado aps a converso dos cerrados em terras de cultura. Maior eficincia FBN Soja ou Feijo? A soja mais eficiente pois a fixao de N2 em feijo tem problemas adicionais causados pela instabilidade gentica das estirpes de rizbios isoladas desta cultura, que causada pelo rearranjamento freqente do DNA (MARTNEZ et al, 1988), que ainda acelerado sob temperaturas elevadas (35 a 40C) que freqentemente ocorrem em nossos solos. Em muitos casos, tem-se observado baixa freqncia de resposta inoculao do feijoeiro em condies de campo, que tem sido atribuda susceptibilidade de ambos parceiros simbiticos a estresses ambientais, como deficincia hdrica e temperatura elevada do solo, ao ataque de pragas e doenas, ao ciclo curto da cultura e baixa competitividade das bactrias inoculadas em relao s estirpes de rizbio nativas dos solos. Fixao biolgica de nitrognio - FBN A FBN consiste, essencialmente, na transformao biolgica do nitrognio (N2) atmosfrico em amnia (NH3), sendo realizada principalmente por bactrias especializadas livres no ambiente ou em associao com plantas, em especial as leguminosas. Na associao com leguminosas, a bactria denominada comumente de rizbio, caracterizando-se pela capacidade de interao com o sistema radicular da planta hospedeira por meio do desenvolvimento de estruturas altamente especializadas - o ndulo radicular - onde se processa a FBN. Essa interao representa uma simbiose, ou mais especificamente, uma interao mutualstica, pois a bactria se beneficia do suprimento de fotossintatos ou carbono orgnico fornecidos pela planta hospedeira, enquanto a planta recebe o nitrognio fixado pelo rizbio microssimbionte na forma amoniacal, assimilado em composto nitrogenados que podem ser translocados para suas diferentes partes.

No que diz respeito aos aspectos ambientais, a FBN preenche os requisitos exigidos para uma agricultura sustentvel. Considerando a sustentabilidade da agricultura como sendo o manejo correto dos recursos que satisfaam as mudanas necessrias ao homem, aliado manuteno ou melhora da qualidade ambiental, nota-se que a FBN faz parte de um dos principais componentes dessa sustentabilidade: o processo no despende energia, no polui e enriquece o solo com nitrognio, o qual ser aproveitado pela cultura seguinte. O Rizbio (Microssimbionte) Atualmente so descritos quatro gneros principais de rizbios na famlia Rhizobiaceae: Rhizobium, Bradyrhizobium, Azorhizobium e Sinorhizobium, sendo o gnero Bradyrhizobium as espcies que nodulam a soja. As estirpes mais utilizadas na cultura da soja no Brasil so: SEMIA 587 e SEMIA 5019 (= 29 w) pertencentes espcie Bradyrizobium elkanii e SEMIA 5079 (=CPAC 15) e SEMIA 5080 (=CPAC 7) pertencentes espcie Bradyrizobium japonicum. De acordo com SMITH & HUME (1987) a associao do Bradyrhizobium japonicum com a soja (Glycine max L. Merrill) pode resultar numa fixao de nitrognio de at 102,9 kg de N.ha-1. O Processo de Nodulao A FBN em leguminosas consiste, essencialmente, de dois processos distintos e complementares: a nodulao (nod) e a fixao do nitrognio (fix) propriamente dita. A nodulao um processo complexo, que se inicia logo aps a germinao da semente, com presena do rizbio no solo ou aderido semente. O incio da nodulao na soja ocorre em V2 (emergncia do segundo triflio) atingindo o auge em R2 (pleno florescimento), depois decresce, onde inicia processo intenso de remobilizao do N das partes vegetativas para os rgos reprodutivos. Resumidamente, o processo envolve trs etapas principais: pr-infeco; infeco e desenvolvimento nodular; e ativao e funcionamento do ndulo. Os eventos que precedem a infeco (pr-infeco) caracterizam-se por uma complexa cadeia de sinais moleculares, desencadeados pela planta hospedeira. Durante a germinao, a plntula de soja promove uma intensa exsudao de compostos fenlicos, caracterizados como flavonas, flavononas, flavonides, isoflavonides e xantonas, que atuam na bactria ativando os genes especficos da nodulao (genes nod) presente no plasmdeo (pSym) do

rizbio da soja. Como resultado dessa ativao, o rizbio passa a produzir uma srie de compostos denominados fatores nod, caracterizados como lipo-oligosacarideos, que interagem com os plos radiculares das razes, modificando-lhes a estrutura e a morfologia, induzindo um curvamento e adequando-os para a adeso das clulas de rizbios. Aps essa adeso inicial, o rizbio dissolve a fina parede celular do plo absorvente modificado, conseguindo penetrar at as clulas corticais e formar uma estrutura especial denominada de cordo de infeco; no interior dessa estrutura, multiplicam-se as clulas do rizbio. As clulas corticais da planta hospedeira tambm respondem a essa infeco, produzindo uma srie de protenas especificas denominadas nodulinas. Dentre essas nodulinas, destaca-se a leg-hemoglobina (Lhb), que especificamente confere uma cor avermelhada ao interior dos ndulos radiculares. Aps essa srie de eventos complexos, a estrutura nodular est apta a funcionar como um verdadeiro rgo de fixao de nitrognio, na soja, a fixao j ocorre 15 a 20 dias aps a emergncia das plantas. Fixao do Nitrognio no Ndulo Na fixao biolgica, o N2 transformado em NH3 a custas de energia da planta (BURRIS, 1999; TAZ & ZIEGER, 2004). O complexo enzima nitrogenase formado por duas unidades proticas, a Ferro-protena (Fe-protena) e a Molibdnio-Ferro-protena (MoFeprotena) so responsveis pela fixao de nitrognio no ndulo (BURRIS, 1999; MYLONA et al., 1995; TAZ & ZIEGER, 2004). Para que ocorra a fixao biolgica de nitrognio necessrio que a nitrogenase se encontre em condies anaerbicas. Os ndulos possuem uma heme protena chamada de leghemoglobina que se liga ao oxignio e que est presente em altas concentraes nos ndulos. A planta produz a poro globina em resposta a infeco da bactria, tendo esta protena uma alta afinidade por O2. Tanto a leghemoglobina como a barreira de difuso de oxignio no ndulo so reguladores importantes na tenso de oxignio no ndulo protegendo o complexo enzima nitrogenase que irreversivelmente inativado pelo oxignio (MYLONA et al., 1995). De acordo com DENINSON & HARTER (1995) a leghemoglobina um importante transportador de oxignio para as clulas bacterianas, sendo capaz de armazenar O2 suficiente para a manuteno da respirao celular por alguns segundos. Os autores ainda ressaltam que o suprimento de nitrognio causa inibio da nitrogenase devido ao decrscimo da permeabilidade da membrana do ndulo ao oxignio e pela reduo afinidade da leghemoglobina pelo oxignio. Na reao de reduo do N2 a nitrogenase auxiliada por uma enzima transportadora de eltrons, a ferredoxina, originria

do fotossistema I da fase fotoqumica da fotossntese. Na fixao biolgica do nitrognio a Ferro-protena e a Molibidnio-Ferro-Protena comandam as reaes. A Ferro-protena freqentemente reduzida por um doador de eltrons, a ferredoxina reduzida (Fd). A Ferroprotena reduzida se liga com o magnsio ATP (Mg ATP) que recebe eltrons, estes so passados para outra enzima a molibdnio ATP (Mo ATP) e desta os eltrons so passados para o nitrognio, transformando o em NH3, este liberado por difuso do bacteride para o citosol da clula infectada (BURRIS, 1999; TAIZ & ZIEGER, 2004). Depois de formado, o NH3 em contato com o substrato aquoso do citoplasma dos bacterides transformado em NH4 (TAIZ & ZIEGER, 2004). O acmulo de NH4 inibe a fixao de nitrognio dentro dos bacterides, destaforma ele transportado para interior da clula hospedeira, no centro do ndulo. Como o NH4 tambm prejudicial a clula devido a diminuio na formao do ATP e do transporte de eltrons na cadeia respiratria, ele incorporado em molculas que no possuam efeito txico. As enzimas glutamina sintetase (GS) e a glutamato sintase (GOGAT) convertem o NH4 + em aminocidos. A atividade destas enzimas aumenta durante o desenvolvimento dos ndulos e com o aumento na disponibilidade de energia (ATP) no meio de reao (SILVA, 1998; BURRIS, 1999). O principal meio de transporte de nitrognio da soja dos ndulos para a parte area na forma de uredeos, alm da aspargina (KING & PURCELL, 2005). Adubao Nitrogenada e Nodulao Em leguminosas, a adio de adubos nitrogenados tem efeito adverso na fixao biolgica devido a diminuio de disponibilidade de oxignio na respirao nodular e a limitao de carboidratos ao metabolismo do ndulo. Resultados obtidos em todas as regies onde a soja cultivada mostram que a aplicao de fertilizante nitrogenado na semeadura ou em cobertura em qualquer estdio de desenvolvimento da planta, em sistemas de semeadura direta ou convencional, alm de reduzir a nodulao e a eficincia da FBN, no traz nenhum incremento de produtividade para a soja. No entanto, se as frmulas de adubo que contm nitrognio forem mais econmicas do que as frmulas sem nitrognio, elas podero ser utilizadas, desde que no sejam aplicados mais do que 20 kg de N/ha. Fatores Limitantes da FBN na Soja

Diferentes tipos de estresse constituem, para a grande maioria das culturas, uma caracterstica inevitvel e parte integral do seu ciclo de produo. A questo centraliza-se na avaliao da sua intensidade e de particularidade de cada cultura ou variedade. Os principais fatores determinantes da produtividade da soja, em grande parte de Minais Gerais, que interagem com a FBN so: acidez do solo; temperatura; deficincias nutricionais e fisiologia da planta em simbiose com estirpes nativas, dentre outros. Acidez do solo A acidez do solo afeta todos os aspectos e as etapas da nodulao e a fixao do nitrognio, desde a sobrevivncia e multiplicao do rizbio no solo at a infeco e eficincia de fixao do nitrognio. O efeito primrio da acidez do solo ocorre sobre a disponibilidade de determinados elementos ou compostos na soluo do solo. Em Minas Gerais, o problema particularmente importante, tendo em vista as extensas reas de cerrado, que se caracterizam por solos de pH menor que 5,5, principalmente latossolos. Esses vm sendo intensamente utilizados para a explorao agrcola. Assim, uma das prticas agrcolas com elevado impacto positivo no potencial de nodulao e fixao do nitrognio a calagem, pois, alm de beneficiar a disponibilidade de elementos-chave na nutrio da soja, como fsforo(P), destaca-se como importante fator de aumento e manuteno de populaes rizobianas em solos de cerrado. O alumnio solvel (Al3+) ou trocvel interfere negativamente na sobrevivncia do rizbio no solo. Recentes trabalhos tm mostrado que a ao negativa do alumnio se processa por meio da sua complexao com determinados componentes celulares, especialmente DNA, causando inibio do crescimento e morte celular. Temperatura A temperatura pode afetar a persistncia dos rizbios no prprio inoculante, bem como influenciar a sobrevivncia das clulas de rizbios inoculados no solo, limitando, assim, tanto a nodulao quanto a FBN. Os resultados, em termos da FBN, variam com a estirpe, o cultivar utilizado e suas interaes e as condies de umidade. Para a maioria das estirpes de rizbios isolados da soja a temperatura de 25C considerada ideal, enquanto temperaturas em torno de 15C causam diminuio da atividade ou at inibio em vrias raas de bactrias fixadoras.

Deficincias Nutricionais O fsforo tem influncia na iniciao, crescimento e funcionamento dos ndulos. A atividade da nitrogenase dependente de ATP. Este fator explica porque a cultura da soja responde mais a adubao fosfatada quando comparada com culturas no noduladas. O mangans tem papel fundamental na catlise de vrios processos enzimticos e de transferncia de eltrons. O Mn++ pode regular a fixao biolgica de N em condies de seca. Isso porque, a enzima amido hidrolase responsvel pela degradao de uredeos nas folhas dependente de Mn++, sendo assim, em condies de estresse hdrico o suprimento de mangans pode auxiliar na manuteno da fixao biolgica de nitrognio. O molibdnio um elemento importante no metabolismo do nitrognio por fazer parte do complexo enzima nitrogenase e redutase do nitrato. A produo de aminocidos e, conseqentemente, de protenas so afetados pela deficincia de molibdnio. A indicao tcnica atual desse nutriente so para aplicao de 12 a 30 g de Mo/ha via semente ou em pulverizao foliar, nos estdios de desenvolvimento V3-V5. O Cobalto faz parte de precursores da leghemoglobina portanto, tambm est associado a fixao biolgica de N. Recomenda-se a aplicao de 2 a 3 g de Co/ha via semente ou em pulverizao foliar, nos estdios de desenvolvimento V3-V5. O Inoculante Rizobiano O termo inoculante refere-se a um produto ou a uma formulao que contm determinados tipos de microrganismos viveis, como bactrias, esporos de fungos, leveduras, ou at mesmo vrus, utilizados com o objetivo de introduzir aumentar determinada populao microbiana em um ambiente. Na agricultura este termo refere-se, geralmente, ao produto utilizado para tratar as sementes de leguminosas com rizbios selecionados, visando estimular a FBN e, consequentemente, diminuir ou eliminar a adubao nitrogenada. O inoculante rizobiano pode ser encontrado em vrias formulaes contendo um veculo, slido (granular) ou lquido, adicionado cultura de rizbios previamente selecionados para elevada FBN. O veculo mais utilizado nas formulaes granulares a turfa, um substrato com elevado teor de matria orgnica, que, aps secagem e peneiramento, apresenta-se pulverizado e escuro. Apesar de a turfa ser o veculo predominante, outros materiais, como o composto orgnico de resduos vegetais, bagaos e tortas pulverizadas e,

at mesmo, materiais coloidais como alginatos, podem ser utilizados com eficincia comparvel. Geralmente, os inoculantes granulares so comercializados em embalagens plsticas de 250 g, apropriadas para inoculao de at 50 Kg de sementes de leguminosas, como soja e feijo. A utilizao do inoculante granular bastante simples, aplicado diretamente na semente ou no solo, no sulco de plantio. A inoculao direta na semente a mais comum, podendo ser realizada na forma simples ou como revestimento das sementes. Na inoculao simples, o inoculante misturado com gua potvel e isenta de cloro, at formar uma pasta homognea, que, a seguir, aplicada diretamente nas sementes na proporo de 100 g do inoculante para 25 Kg de sementes de leguminosas grandes, como o feijo, a soja, a ervilha, etc. No caso de sementes mdias (leucena, siratro), a proporo ideal 100 g do inoculante para 10 Kg de sementes. Para sementes pequenas de leguminosas forrageiras, devem-se utilizar 100 g do inoculante para 5 Kg de sementes. Alternativamente, podem-se preparar as sementes com uma mistura de 10-15% de gua e acar cristal, na proporo de 1 litro da mistura gua-acar para 50 Kg de sementes, e adicionar o inoculante em p diretamente nelas. Essa mistura tem a finalidade de fazer aderir maior quantidade de inoculante na superfcie da semente. Deve-se ressaltar que, em plantios sujeitos a elevado estresse hdrico, a utilizao dessa mistura no preparo da semente para a inoculao pode atrasar a germinao. Apesar de extremamente simples, o sucesso da inoculao das sementes depende de alguns cuidados especiais: a) Deve ser realizada sombra e as sementes devem ser plantadas no mesmo dia, visando garantir a viabilidade do rizbio, bem como impedir uma fermentao indesejada ou a germinao precoce das sementes inoculadas e estocadas. b) Todos os utenslios utilizados, como baldes, ps, rastelos, lonas plsticas, etc., devem estar limpos ou lavados com gua potvel isenta de cloro para evitar a contaminao com outros microrganismos e resduos de agrotxico. c) Pode-se aplicar o inoculante diretamente, com as mos limpas (no txico para pessoas), embora seja mais recomendvel a utilizao de tambores rotativos ou lonas de plstico para melhor homogeneizao. d) As sementes usadas no devem ser pr ou ps-tratadas com pesticidas ou fungicidas que tendam a reduzir a viabilidade dos rizbios inoculados. Caso haja necessidade da utilizao de fungicidas, deve-se verificar a sua compatibilidade com o rizbio e aplic-lo uma semana aps a emergncia.

e) Como todo produto biolgico, o inoculante tem prazo de vencimento e extrema susceptibilidade a variaes de regime de estocagem. Assim, a regra geral no utilizar inoculante vencido. Aps a aquisio, deve-se estoc-lo em local fresco e limpo. A inoculao com revestimento das sementes, tambm denominada peletizao, pode ser realizada misturando-se inicialmente 500 mL de um adesivo a 100 g de inoculante at formar uma pasta homognea, que deve ser, ento, aplicada s sementes, utilizando-se tambores rotativos ou mesmo uma betoneira previamente limpa. A seguir, adiciona-se calcrio pulverizado s sementes previamente tratadas, na proporo de 10 Kg de calcrio: 50 Kg de sementes. A mistura deve ser bem homogeneizada ou revirada para se conseguir boa separao das sementes. Os adesivos mais utilizados so a goma-arbica caseira ou natural, a 40%, ou a goma de amido, a 7%. A utilizao da goma-arbica comercial no recomendada, pois esse produto contm antimicrobianos que inibem o rizbio inoculado. A peletizao tem a vantagem de reter maior nmero de rizbios na superfcie da semente, alm de utilizar o calcrio que realiza uma microcalagem no solo adjacente semente em germinao. Ao calcrio tambm podem ser adicionados micronutrientes que favorecem o crescimento e desenvolvimento da planta. As formulaes lquidas incluem os inoculantes oleosos recentemente introduzidos no mercado. Esses inoculantes tm sido utilizados com bastante sucesso na soja e constam, basicamente, de leo vegetal como veiculo, ao qual se adiciona elevada concentrao de clulas de rizbios, que se mantm com alta viabilidade nesse meio. Sua principal vantagem em relao aos inoculantes granulares operacional, pois a sua aplicao direta na superfcie das sementes promove maior adeso natural das clulas por unidade superficial da semente, alm de facilitar a operao de plantios mecanizados. Os principais fornecedores de inoculantes, granulares ou oleosos, no Pas, bem como alguns laboratrios de pesquisa, esto relacionados no quadro 1. Quadro1. Principais produtores e fornecedores de inoculantes e estirpes de rizbios no Brasil. Produtor Bio Soja Inoculantes CENA- Centro de Energia Nuclear na Agricultura Embrapa-Centro Nacional Pesquisa em Agrobiologia Principais produtos Inoculantes para leguminosas e Fertilizantes orgnicos Banco de germoplasma de rizbio; produo de inoculantes para pesquisa; cursos e treinamento. de Venda de inoculante via postal.

Nitral Urbana

Inoculantes Bioinseticidas

para

gramneas

leguminosas;

Solofix Biotecnologia Agrcola Turfal Ind. Com. Produtos

Inoculantes granulares e oleosos para leguminosas. Produo de inoculantes para leguminosas e controle biolgico.

Biotecnalgicos

Os inoculantes granulares so bem mais eficientes quando se utiliza a turfa previamente corrigida e esterilizada ou desinfestada. Infelizmente, a legislao brasileira sobre inoculantes, Lei 6.894, de 16.12.1980, enfatiza apenas os limites mnimos de clulas viveis (10 9 clulas/g na indstria e 10 8 clulas/g inoculante no plantio), originando grande variabilidade de qualidade do produto final. Na VI Reunio de Laboratrios para Recomendao de Estirpes de Rhizobium e Bradyrhizobium, ficou acordado que, a partir da safra 1995/1996, toda turfa utilizada pela indstria dever ser desinfestada. Consideraes Finais Em razo da importncia econmica e social da cultura da soja no Brasil e da potencialidade e necessidade de incrementar sua produtividade, estudos visando a otimizao do processo de nodulao, e, conseqentemente, da fixao biolgica do N2(FBN), como forma de melhorar a disponibilidade de nutrientes s plantas, uma prtica de grande importncia e muito necessria, tendo em vista a reduo dos custos de produo para se obter altas produtividades.

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