UNIVERSIDADE FEDERAL DE VIOSA

DEPARTAMENTO DE FITOPATOLOGIA DEPARTAMENTO DE FITOPATOLOGIA

LABORATRIO DE BACTERIOLOGIA DE PLANTAS LABORATRIO DE BACTERIOLOGIA DE PLANTAS

Reginaldo da Silva Romeiro Professor Titular da UFV

! Bactrias so microrganismos muito pequenos (1 a 2)

ESPCIE BACTERIANA LARGURA () COMPRIMENTO () Francisella tularensis 0,20 0,3 - 0,7 Escherichia coli 0,4 - 0,7 1,0 - 3,0 Pseudomonas syringae 0,7 - 1,2 1,5 Xanthomonas campestris 0,4 - 0,7 0,7 - 1,8

Atualidade do conhecimento

a) Passado Razes tcnicas e histricas Pouca nfase em anatomia e fisiologia b) Dcada de 50 M.E. + Novas tcnicas c) Fitobactrias no-fastidiosas Tpico: 1.Bastonete 2.Pleomorfismo restrito a certos grupos 3.No esporognicas

X.campestris pv. campestris, colorao para visualizar flagelos

X.campestris pv. manihotis, colorao negativa com tinta nanquim

Ao microscpio eletrnico as coisas ficam mais fceis...

CLULA BACTERIANA: FORMA E ARRANJAMENTO MAIS COMUNS

Monococus

Cocus

Diplococus Sarcina

Bastonete
Estafilococus

Espiral Espiral em hlice

Estreptococus

Estreptobacilus Estafilobacilus

GLICOPROTENAS CAPSULARES

MEMBRANA CITOPLASMTICA

CPSULA

CITOPLASMA

PAREDE CELULAR

INCLUSO

FLAGELO CROMOSSOMA PLASMDEO

DNA

SEPTO

MESOSOMA

Membrana Plsmica Parede Celular Espao Periplsmico Membrana Externa

CONSIDERAES
Cpsula ou Substncia Limosa Exoplolmero # Comparao # Geralmente polissacardeo # Raramente polipeptdeos (Bacillus spp.) Camada mais externa da clula - EPS, No essencial vida Possveis funes biolgicas: # Aderncia # Proteo # Receptor de fagos # Patogenicidade # Reconhecimento bactria - planta # Resistncia fagocitose # Toxina

EXEMPLO

Evedenciao de cpsula em Acetinobacter sp., pela colorao negativa com tinta Nankin e visualizao com contraste de fase

Streptococcus pneumoniae em ratos

LISA

VIRULENTO

Capsulado
RUGOSA

AVIRULENTO
No capsulado

O fenmeno da fagocitose

+
BACTRIA ENGULFAMENTO DIGESTO

MACRFAGO

Parece haver correlao em alguns casos, mas no em todos: " R. solanacearum (KELMAN, A. Phytopath., 44:693-695, 1954) " E. amylovora (GOODMAN, R. N. Science, 83: 1081-1082, 1976 " X. c. pv. manihotis (ATHAYDE & ROMEIRO. FB, 9: 283-290, 1983

Meio contendo CTT (Cloreto de trifenil-tetrazolium)

No-capsulada, avirulenta Capsulada, virulenta

INOCULAO

SADIA

SADIA

INOCULAO

SADIA

MURCHA

EXEMPLO E. amylovora & Rosceas Virulncia = f (Quantidade de EPS)

Isol. E9 101b 60b AA3 Virulncia Virulento Mod. Virulento Mod. Virulento Avirulento EPS (mg/1012 cel.) 14,5 9,3 7,8 0,0

AYERS et alii. Appl. Envir. Microbiol., 34(4): 659-666, 1979

O EPS capsular como toxina

a) EPS de Erwinia amylovora purificado b) Especificidade de hospediro, inclusive c) Denominaram toxina amilovorina

EPS Galho jovem 1mg / ml

15-20 min.

EPS Murcha

GOODMAN et alii. Science, 83: 1081-1082, 1979

Bactria

Sintomas Microscopia eletrnica

Inspeo visual Desordens histolgicas Desordens citolgicas Desordens ultracitolgicas

EPS

SEMELHANTES !

PAREDE CELULAR
Envoltrio rgido, 20% do peso da clula Peptdeo-glicano - Principal componente, s presente em procariotas Impermevel apenas a grandes molculas (Imagine uma bucha de banho) Estrutura e composio diferentes em Gram-positivas e Gram-negativas

-G (+)

G (-)

Micoplasmas

Malha de peptdeo-glicano

ESTRUTURA QUMICA E ESPACIAL DO PEPTDEO-GLICANO

PAREDE CELULAR DE BACTRIAS GRAM-NEGATIVAS

CAMADA EXTERNA

CAMADA INTERNA (PEPTDEO-GLICANO)

MEMBRANA CELULAR ESPAO PERIPLSMICO

1.CAMADA EXTERNA

LPS

Ction divalente

Molcula de protenas

Camada dupla de fosfolipdeos

PAREDE CELULAR DE BACTRIAS GRAM-POSITIVAS Peptdeo-glicano o componente majoritrio (40-90% em peso) Espessa (10-90nm) Aparncia uniforme cidos teicicos - componentes tpicos em G(+), com funo de toxinas, transporte, etc.

Sutherland, I. W. (1977). Surface Carbohydrates of The Prokaryotic Cell. Academic Press, London. 472 p
Fosfatidilglicopeptdeo EPS PAREDE Cedeia de cido lipoteicico

Protenas

MEMBRANA CELULAR

BACTRIA GRAM-NEGATIVA PC MC CIT EPS

BACTRIA GRAM-POSITIVA CIT PC MC EPS

A parece celular (PC) possui, nesse caso, 3 camadas. A mais interna de peptdeo-glicano

A parece celular (PC) possui uma s camada, espessa e contnua

FONTE: Stanier et alii, The Microbial World. 1986

Membrana G(+) Camada Interna Camada Externa Cpsula Membrana G(-) Parede

Cpsula

GLICOPROTENA OLIGOSSACARDEO PROTENA INTEGRAL

PROTENAS PERIFRICAS

GLICOLIPDEO

PROTENA INTEGRAL

PROTENAS PERIFRICAS

Darnell, J., Lodish, H. & Baltimore, D. (1990). Molecular Cell Biology. 2 Ed. Scientific American Books, 1105 p.

SINGER, S. J. & NICHOLSON, A. L. The fluid membrane model of the structure of cell membrane. Science, 175: 720-731, 1975

Molculas de Protenas

Camada Dupla de Fosfolipdeos

10-20% da protena da clula Sntese da Parede Replicao do DNA

Permeabilidade Seletiva Gnese dos Mesosomas

Ambiente da Parede Celular

Cabea Hidroflica

Cauda Hidrofbica
Ambiente do Citoplasma

1.Permeabilidade 2.Sntese da parede 3.Gerao de ATP (Mesosomas) 4.Replicao do Cromossoma

Atrquia

Monotrquia

Lofotrquia

Peritrquia

Atrquia

Anfitrquia

Monotrquia

Peritrquia

Lofotrquia

Visualizao Difcil Motilidade Importncia Sistemtica Atividade imunognica

ESTRUTURA E COMPOSIO DOS FLAGELOS

Exemplo: Salmonella typhimurum Dimetro: 14nm Flagelina: Sub-unidade de 4.104 daltons

PILI
Exemplo: Escherichia coli Dimetro: 7 nm Flagelina: Sub-unidade de 1,7.104 daltons

O CITOPLASMA E SUAS INCLUSES

Citoplasma: Denso, viscoso, granuloso, com afinidade por diversos tipos de corantes Incluses: - Pouco comuns em procariotas (N) - Mais comuns so (C) - Amido, glicognio, etc. - PHB - Pseudomonas sp. P

CH3 O CH3 O CH3 O || || || || || || HO - CH - CH2 - C - O - CH - CH2 - C - O - CH - CH2 - C - O -

30S 50S

40S 60S

CLULA EUCARIOTA Reativo de Fleuglen

CLULA BACTERIANA

Cainrs, J. The chromosome of E. coli. Quant. Biol., 28: 43- 46, 1963

E. coli

Meio com T* (Marcada)

+ Detergentes
Lisosima Ruptura

Suspenso de Clulas

Radioautografia

Descobertos na dcada de 50 Pequenos fios de DNA Idnticos em estrutura ao cromossoma, sendo as diferenas: # Tamanho # Essencialidade # Tipo de gens Podem ser perdidos ou transferidos

Auto-replicao Auto-transferncia Resistncia a antibiticos Resistncia a metais pesados Resistncia a drogas Produo de alguns pigmentos Sntese de toxinas (algumas) Metabolismo de certos compostos Resistncia / sensibilidade a fagos Sntese de antibiticos Produo de bacteriocinas Alguns casos de fitopatognicidade

Fio: Circular nico Hlice dupla 1 mm!

INFECO

Transferncia
CLULA NORMAL CLULA TRANSFORMADA

Ri

INFECO

Exemplo

INFECO

P. syringae pv. savastanoi Sntese de AIA por gens do plasmdeo

NDULOS

Acmulo nos stios de infeco

pPG1

Gens que codificam para a sntese de CORONATINA Presente em vrios patovares de P. syringae Interferncia com fotossntese

Clorose