ROTEIRO DE AULA PRTICA

Preparo e Esterilizao de Meios de Cultura

INTRODUO
Os meios de cultura so utilizados para o cultivo laboratorial de microrganismos,
fornecendo todos os nutrientes indispensveis aos seu crescimento. Exigncias
nutricionais esto relacionadas a fontes de carbono, nitrognio e micronutrientes (sais
minerais). Muitas vezes, microrganismos necessitam de outros nutrientes que so
conhecidos como fatores de crescimento. Estes fatores de crescimento podem ser
vitaminas ou aminocidos especficos e sua demanda depende de cada microrganismo.

MATERIAL
gar Nutriente
Caldo EC
NaCl
1 Erlenmeyer 125 mL
4 Placas de Petri
Dois tubos de diluio
Dois tubos de ensaio
1 pipeta 10 mL
1 proveta de 250 mL
1 becker de 250 mL
Algodo

PROCEDIMENTOS
1) Preparo de gar Nutriente
- preparar os tampes para erlenmeyer
- pesar a quantidade necessria do meio de cultura em papel alumnio e transferir
para o erlenmeyer
- medir em proveta a quantidade necessria de gua destilada
- verter sobre o papel um pequena quantidade de gua destilada para arrastar todo o
p
- adicionar o restante de gua destilada no erlenmeyer
- colocar o tampo de algodo e o papel pardo
- autoclavar por 15 min a 121 C



2) Preparo do Caldo Lactosado
- preparar os tampes para tubos de ensaio
- pesar a quantidade necessria do meio de cultura em papel alumnio e transferir
para o bcker
- medir em proveta a quantidade necessria de gua destilada
- verter sobre o papel um pequena quantidade de gua destilada para arrastar todo o
p
- adicionar o restante de gua destilada no erlenmeyer
- dissolver completamente o meio de cultura
- transferir 10 mL do caldo para os tubos de ensaio
- colocar em cada tubo 1 tubo de Durhan invertido
- colocar o tampo de algodo e o papel pardo
- autoclavar por 15 min a 121 C

3) Preparo de tubos para diluies (soluo salina 0,9 %)
- preparar os tampes para tubos de diluioo
- pesar a quantidade necessria de NaCl para preparar uma soluo 0,9 % e
transferir para o bcker
- medir em proveta a quantidade necessria de gua destilada
- verter sobre o papel um pequena quantidade de gua destilada para arrastar todo o
p
- adicionar o restante de gua destilada no erlenmeyer
- dissolver completamente o NaCl
- transferir 9 mL da soluo para os tubos de ensaio
- colocar o tampo de algodo e o papel pardo
- autoclavar por 15 min a 121 C


4) Preparo das placas para plaqueamento em superfcie
- retirar o gar da autoclave e transferi-lo para banho-maria a 45 C
- destampar o erlenmeyer em zona estril
- verter aproximadamente 20 mL do gar fundido em placas de Petri estreis
utilizando tcnica assptica
- deixar em posio horizontal at completa solidificao


- armazenar as placas na geladeira em posio invertida

UTILIZANDO A AUTOCLAVE
Abrir a tampa e verificar o nvel de gua. Caso necessrio adicione gua at cobrir a
resistncia.
Coloque o material a ser autoclavado na cesta e feche a tampa da equipamento rodando
as chaves sempre diagonalmente.
Abra a vlvula e ligue a autoclave no MAX.
Espere at o vapor comear a sair e feche a vlvula.
Quando a temperatura atingir 121 C, diminua a temperatura para MED.
Marque 15 min.
Aps 15 min, desligue o equipamento e espere o resfriamento. Aps resfriamento, abra a
vlvula
Abra as chaves sempre diagonalmente.
Retire o material.

RELATRIO
Preparar relatrio contendo
1) introduo sucinta sobre meios de cultura
2) descrio dos procedimentos realizados
3) resultados e respostas das seguintes questes
a) A esterilizao do material foi realizada a 121 C por 15 min. Esta esterilizao
poderia ter sido feita a 100 C? Justifique.
b) Por que o todo o material tampado antes da esterilizao?