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Slo Paulo
1999
COMISSO JULGADORA
--------------------------------------------\-~-~1---------------------------------------------
Orientadora presidente
So Paulo, 26 de maro de 1
'o~eU!WJaJep
e we6eJoo ep
0ldwaxa olad a o!ode aJueJsuoo 'o~eJUapo eu apepapas 'o~~!pap 'apez!we elad
01U!d !loaJpUV snsar ap equ!zaJa.L JelnJ!.l elOJd 'fi
Profl ora Ugia Maria Moreira Campos, responsvel pela disciplina de Controle d
Qualidade Fsico-Qumico do Departamento de Produtos Farmacuticos da Faculdade d
Farmcia da Universidade Federal de Minas Gerais, pela orientao relacionada com
aplicao do mtodo de cromatografia liquida de alta eficincia.
s Profls oras. Mitsuko Taba Ohara e TeIma Mary Sakuda pela amizade e contribuies n
desenvolvimento deste trabalho.
Aos Profs. Titular Joo Fernandes Magalhes e Dr. Jorge Luiz S. Martins pelo constan
estmulo e interesse demonstrado.
Aos colegas lrene Satiko Kikuchi, Maria Si/vana Alves, Alson da Luz Andr de Arajo, Mar
da Penha Henriques do Amaral, Vaneida Maria Meurer, Lourdes Kiyomi Oshiro e Jos d
Jesus Ribeiro de Pinho pela inestimvel amizade e apoio.
atravs
de
mtodos
fsico-qu
3. OBJETiVOS.........................................
4. MATERIAL E MTODOS..................
4.1. MATERIAL
4.1.1. Substncias qumicas de referncia
4.1.2. Amostras de especialidades farmacuticas
4.1.3. Microrganismo-teste como revelador biolgico
4.1.4. Equipamentos e material auxiliar...
4.2. MTODOS
4.2.1. Amostragem
4.2.2. Determinao do peso mdio das cpsulas de gelatina dura e drgeas
4.2.3. Descrio do material de embalagem primria
4.2.4. Aparncia das amostras
10
10
10
10
Construo
da
curva
4-epianidrotetraciclina
de
calibrao
do
c1oridrato
11
4.2.12.4. Comparao dos resultados de teor obtidos atravs dos mtodos cromatogrfi
e microbiolgico empregando o teste-L.
11
12
12
13
13
5.14. Estudo da alterao da eficincia (N) da coluna aps vrias injees das solu
testes e fase mvel.
5.15. Recursos do programa MILLENIUM'" para anlise dos cromatogramas
5.16. Anlise estatstica
6. DiSCUSSO
7. CONCLUSES
8. REFERNCIAS BIBLIOGRFiCAS
9. RESUMO
10. SUMMARy
FIGURA 10
FIGURA 11
FIGURA 12
FIGURA 13
FIGURA 14
FIGURA 15
FIGURA 16
FIGURA 17
FIGURA 18
FIGURA 19
FIGURA 20
FIGURA 21
FIGURA 22
FIGURA 23
FIGURA 24
FIGURA 25
FIGURA 26
FIGURA 27
FIGURA 28
FIGURA 29
QUADRO 1
TABELA 1
TABELA 2
TABELA 3
TABELA 4
TABELA 5
TABELA 6
TABELA 7
TABELA 8
TABELA 9
TABELA 10
TABELA 11
TABELA 12
TABELA 13
TABELA 14
TABELA 15
"
TABELA 28
TABELA 29
TABELA 30
TABELA 31
TABELA 32
TABELA 33
TABELA 34
TABELA 35
TABELA 36
TABELA 37
TABELA 38
TABELA 39
TABELA 40
TABELA 41
ov~naO~.lNI
adequados
relacionados
com
produo,
contro
FARMOQuMICA
MYERS-
BRASMDICA
SQUIBB
BUNKER
ARISTON
DOVALE
FARIA
ELOFAR
CAZI
CALBOA
CIBRAN
EUROFARMA
HERALD'S DO
UNIO QUMICA
BRASIL
INFABRA
NEOQuMICA
NEOVITA
WINSDON
PROPOTTI
DELTA
GILTON
MEDIC
LUPER
ENDOTERPICA
USMED
wnJ."~3J.ll
"0 O"SIJ\3~
-
2.1.1. Histrico
o primeiro
2.1.2 Sintese
BIBliOTECA
Faculdade de Cincias Farrr.;,cuticas
Universidade de So Paulo
lIiIi;,;,;""
R3
R2
o
~
-:/'
H
I
N(CH )
,
3 2
H
,
--
~
-
II
OH
OH
UH
.OH
COtJ-~R
11
Frmaco
R1
R2
Ra
Ra
Tetraciclina
CH 3
OH
Oxitetraciclina
OH
CH 3
OH
Doxiciclina
OH
CH 3
Clortetraciclina
CH 3
Cf
OH
Tem frmula molecular C22 H24N 20a HP03.% NaP03 e peso molecular
molecular 512,9. A sua potncia situa-se na faixa de 800 a 920 Ilg de doxicic
por mg90206 ou de 880 menos que 940 Ilg por mg, sendo na base anidra e l
das alteraes radiolgicas dos pulmes. A doxiciclina duas vezes mais pote
candidase a mais comum OO,144. Assim, a vulvovaginite 144 por Candida e aque
tolerada por via oral. Doses administradas a adultos por via intravenosa, quand
acima de 19 por dia, podem decorrer em bito do pacienteoo. Na inje
pode ser de 12 a 108 horas quando h falha renal oo. Em relao aos derivados,
facilmente nos tecidos e fludos corpreos, mas sua passagem para o flud
2.3. Estabilidade
de
4-epitetraciclina,
anidrotetraciclina,
4-epianidrotetraciclina
tetraciclina
.J, H+
anidrotetraciclina
epitetraciclina
.J,w
~
epianidrotetraciclina
de 50C foi de 10 anos, enquanto que para 20C foi de 50 anos, podendo
extrapolado para 350 anos46 ,124.
dessecadores contendo
soluo
de cloreto
de clcio
o ensaio
de
dissoluo
foi
realizado
por
SCHAFER
de
degradao
4-epianidrotetraciclina,
4-epitetracicli
como in vivo devem ser realizados. Apesar de existirem estudos bem sucedi
frmaco 1E. Por outro lado, permite obter informaes sobre a prov
SELLASSIE
slida mas tambm da intacta. No trabalho dos autores citados, ficou evide
que a velocidade de dissoluo podia ser relacionada com a absoro
1976,
foram
regulamentados
os
requisitos
de
dissoluo.
For
dissoluo das cpsulas. Para MATOS e colaboradores 144 na primeira fase oco
cpsula conhecido como tempo lag e, nesta fase, a prpria cpsula de gela
Para CARTWRIGHr:E,
cpsula
de gelatina,
propiciando
a formao
de
gel.
DIGENIS
insolvel em gua, durante o teste de dissolu 0 47,183. Esta pelcula cria restr
liberao do frmaco.
formar
aglomerados,
conforme
descrito
por
REES 1n.
MATOS
,,'
,n.
primrias
"
JUNG
cpsulas. A dissoluo foi nula para a mistura composta por fosfato de clci
minutos,
teve
uma
desintegrao
incompleta
apresentara
i.
7. Este resultado foi coerente com a solubilidade deste sal, que influencia
vifro
que por este mtodo, comprimidos e cpsulas eram submetidos a menor abras
Isto pode ser devido saturao do meio de dissoluo, tanto com o ingredie
litro de gua a 37 oCo Foi aplicada agitao uniforme s peneiras. Aps interv
do
meio
de dissoluo foram
retiradas
e quantificadas
POSTI e SALONEN
mantidas constantes,
os trs aparel
Foi
constatado
que
para
cpsula
de oxitetraciclina,
quanto a natureza e a composio dos materiais submetidos a anlise. Sabeentretanto, que um certo grau de variabilidade est atrelado a todas
avaliaes. Portanto, um dos objetivos de garantia de qualidade manter
patamar mnimo esta variabilidade.
(BPF) exigidas pela Food and Orug Administration (FOA) dos Estados Unidos
A preciso,
exatido,
sensibilidade
simplicidade
baixo
risco
ocupacional
devem
ser
tamb
considerados.
outra
de erro para o ensaio. A calibrao deve ser peridica, de acordo com o tipo
freqncia de utilizao.
As farmacopias USP XXI I1200 e Japonesa, 13a edio 113 fazem refernc
obtidos
em
diferentes
laboratrios4,81,113.2CE.
Portanto,
que est relacionada com a eficincia (N), seletividade (a) e fator de capacid
o nmero de
mais retida na fase estacionria e demorou mais para ser eluda l50. Mto
microbiolgico,
por
apresentar
caractersticas
como
sensibilidade
ressaltou,
em
1942,
desvantagem
do
mt
exige cerca de 18 horas para sua execuo. Foram empregados 0,2 a 0,9 mL
amostra para o teste, com teor de penicilina de cerca de 0,0039 unidades Flo
cerca de 18 horas. Este foi substitudo por mtodo rpido desenvolvido por RA
hemlise; este procedimento forneceu ponto final mais definido. Outra altera
foi proposta, tambm por FlEMINGoo, que empregou tubo capilar, evitando
trabalho de preparao das lminas. O meio de cultura constou de mistura
crescimento foi feita pela cor, sendo que onde o crescimento foi ausente, o m
a penicilina, eram mais ativas em meio cido, e que substncias alcalinas, com
o qual foi usado a seguir por REID e BREWER 181 para ensaios quantitativos
penicilina e estreptomicina.
sua atividade biolgica. Para isto, suspenso com cerca de 800.000 UFC/mL
Bacillus
adhaerans,
devido
ao
seu
rpido
crescimento
esvaziar por suco a clula onde feita a leitura foi desenvolvido para agiliza
mtodo de diluio seriada foi mais rpido que os anteriores, porm requeren
Streptococcus haemoliticus.
o logaritmo
ensaio foi determinado como sendo aquele que inibe o crescimento microb
em 50 % em relao ao tubo controle.
destacando as
suas
vantagen
segundo PLATT e colaboradores 166 apresenta limitao por ter seu uso re
turbidimtrico
automtico
semelhante
desenvolvido
solidificao rpida do meio de cultura. Por sua vez, como envolve germina
e VINCENT211
SHERWOOD,
colaboradores 189 e
BEE
muitas
respectivamente
em
publicaes,
1944
SCHIMIDT
1945,
MOYER188 e
descreveram
HA
detalhadamen
para estudar a influncia das variaes tcnicas dos ensaios. Estudaram o tem
estabelecida
foi
possvel,
embora
com
exatido
reduzida,
colaboradores 46
descreveram
mtodo
microbiolg
14
antibioticos
com
mesmo.
As
placas
com
Baci
foram facilmente medidos a olho n. O autor comparou este novo mtodo com
Para isto, cada lote, antes de sua liberao ao mercado, foi submetido a srie
Assim,
foram
considerados
sensibilidade
de forma antagnica,
aminoglicosdeos apresentam co
pontos mais baixo (L) e mais alto (H) desta reta, empregando os valore
foi feita atravs da extrapolao da resposta obtida para a amostra nesta ret
calibrao.
Escherichia co/i e Bacillus cereus ATCC 9634. O estudo foi realizado por m
turbidimtrico
automtico
para
a tetraciclina
em
mistura.
dificul
transferido para cada tudo foi estabelecido para 9 mL, sendo 1 mL da amo
valores sugeridos so aqueles recomendados pela FDA, que adotou por sua
nica ou rplicas de duas e trs placas, com o mtodo convencional foi reali
atBtfOTEC/.l
Faculdade de Cincias Fai'''acb!ticas
UniverSidade de So PaUlo
~gltubo
e 0,24
~g/tubo
da quantid
sendo met
pontos mais baixo (L) e mais alto (H) desta reta, conforme descrito no CF
passou a ser de 0,2 a 0,6 %. Nas edies da USP XVIll 202 e XIX203, indicou-s
padronizao da suspenso microbiana atravs do espectrofotmetro a 580
0,015 a 0,04 Ul/mL, com incubao dos tubos entre 35 e 37 C por 3 a 4 horas.
Bacillus pumilus ATCC 14884 e NCTC 8241 e Bacillus cereus ATCC 117
edio63,
emprega
como
microrganismo-teste
Sarcina
se
lutea,
~g/mL
e 5 e 20
~g1mL,
e tcnicas da cu
~g1mL
fo
porm
descreve os
procedimentos
gerais para os
ensa
0,25 a 4 J,tg/mL e in6culo de Bacillus cereus e varo mycoides ATCC 9634 for
0,04; 0,03 e 0,02 ou de 0,08 a 0,015 J,tg/mL para curva padro de cinco ponto
0,08; 0,04 e 0,03 J,tg/mL para a amostra, com in6culo de Staphylococcus aur
ATCC 6538-P foram sugeridos.
%.
tinha
como
microrganismo-teste
Staphylococcus
aure
que a forma farmacutica drgea no foi descrita nas edies desta Farmacopi
J.1g1mL foi
estabelecida,
da
mesma forma
que a
suspenso
Farmacopias
InternacionaI 107,108,
Europia55.57
Brasileirall3
cromatogrficos
em
camada
delgada
foram
inicialme
comerciais,
principalmente
devido
interferncia
com zonas bem definidas, podendo ser aplicado para determinar impurezas
amnio 0,1 % e de soluo de clorofrmio saturado com EDTA 0,1 M com clor
sido preferida dentre todos os mtodos, como pode ser constatado pelo gran
em
1974,
relataram
trabalho
relacionado
com
eluio gradiente. A leitura aps a eluio foi a 280 nm, sendo empregado com
em menos que 30 minutos, embora tenha ocorrido resoluo pobre entre os pic
da
tetraciclina
4-epitetraciclina
entre
anidrotetraciclina
de slica, mantendo a monitorao com UV a 280 nm. A fase mvel com flu
durante o ensaio. Foi empregado sistema formado por coluna contendo octilsila
(Ca), detector UV a 280 nm e fase mvel preparada com fosfato monobsico
coeficiente de variao obtidos com seis ensaios foi de no mximo 7,60 % para
clortetraciclina,
anidrotetraciclina,
4-epianidrotetraciclina
4-epitetracicli
JURAND 126
empregaram,
para
determinao
a primeiro foi aOS-slica, tratado com grupos trialquilsilil para substituir grupos
silanis residuais. a segundo foi uma amostra de slica gel, que teve a m
formas epi e normal foi pobre. Ao trabalhar com cromatografia de partio lquid
lquido, empregando CORASIL com PEG 400, foi obtido pico com melhor simet
gua e ficar fortemente adsorvida. Esta reteno, mesmo que pequena, prod
Os resultados
inter~ias
intra~ia
C1
176
ac,
volume de injeo de 1
J,1L, e coluna 00
(5 J,1m) com dimenses de 250 x 4,6 mm. A fase mvel composta por oxalato
o mtodo microbiolgico foi de 0,96. A rplica dos seis valores para cada amos
apresentou coeficiente de correlao menor que 4 %, com exceo
clortetraciclina, em que foi de 7 %. A temperatura da coluna foi mantida a 40
para evitar a possvel precipitao do tampo oxalato e melhorar a resoluo
sensvel, tambm seletivo, sendo duas vezes mais sensvel que a deteco p
experincias,
mtodo
CLAE
com
deteco
OOS, foi estudado por HOU e WANG 104, os quais verificaram que o aumen
capacidade
das tetraciclinas
concentrao de acetonitrila,
apresentavam
forte
dependncia
adapt
publicados 114,142.1&>.
lUN 142
reuniu
vrios
procedimen
de alta eficincia com sistema isocrtico usando fase mvel contendo meta
das
tetraciclinas
em
preparaes
farmacuticas
meio de coluna C111 com fase mvel composta por tampo fosfato dibsico
deteco foi de 0,1 a 1,0 ngllll e a recuperao foi de 99,1 a 100,4 % para to
as amostras. No foi observada interferncia de excipientes presentes
Os
coeficientes
de
correlao
obtidos
para
tetracicli
0,999. Quando a amostra foi analisada seis vezes no mesmo dia, o coeficiente
variao foi quatro vezes menor que quando analisada em sete dias diferentes
dias, o coeficiente de variao para a doxiciclina foi de 0,6 %. A vida til da colu
foi superior a seis meses devido a boa estabilidade sob condies extremas
pH.
0,1
de
cido
trifluoractico
(1)
e o
segundo,
conte
sistema isocrtico e fase mvel contendo metanol e gua (40:60) com 0,1 %
cido trifluoractico (3) foi usada. A minociclina foi separada de seus precurso
nas condies cromatogrficas (3). Este mtodo foi adequado para separa
de preparaes em semi-micro ou micro escala. A recuperao foi de 75 a 90
comerciais
de
oxitetraciclina
possuem
como
impurezas,
II
:b
,
III
SOAI.l3raO
98
tambm,
estudo
MATERIAL E MTODOS
empregados
foram
de
grau
analtico,
espectrofotomtrico
de
oxitetraciclina
(Terramicina),
potncia
901
~gl
~glmg,
fornec
rllcUldadeBIBLtOiel"'tt
de C
lenc/as Faro':);{ceuf
UrJ/versldade de S - p
ao dUJo
o
..
- Aparelho
de
ultrafiltrao
TW
SYSTEM da MILLlPORE
MILLI-Q
PLUS-ULTRA-PURE
WA
TW
- Aparelho de banho de gua ultrassnico da marca BRANSON 2210R- Dispositivo de filtrao HPLC GELMAN SCIENCES
TW
4.2. MTODOS
4.2.1. Amostragem
microrganismo-teste,
Staphylococcus
aureus,
foi
semanalm
N estril,
completando ao
volume
com
mesma
soluo.
No dia do ensaio, alquotas de 1, mL de cada diluio das soluesda substncia qumica de referncia e da amostra foram transferidas para
de
cloridrato
4-epianidrotetraciclina
de
acordo
com
~gJmg,
~g1m
(~g/mL):
completado para 100 mL com o mesmo diluente. A soluo obtida foi filtrada
solues nas concentraes de 25 e 100
segundo o item 4.2.7.1.2.
~g/mL
~-Bondapak
C18
Americana:
soa
4.2.7.3.
Estudo
de
adequao
dos
parmetros
do
TABELA 1
Concentrao (molar)
Concentra
relativa (%
Oxalato de amnio
Fosfato dibsico de
amnio
0,1
0,2
100
Fase mvel I
0,095
0,19
95
Fase mvel 11
0,09
0,18
90
0,08
0,16
80
Concentrao (%)
TABELA 2
Composio da fase
mvel
com
aumento
da
proporo
Fase mvel
Proporlo (mL)
Volume adi
(mLl
Oxalato de
amnio 0,1 M
Dimetilformamida
Fosfato dibsico
de amnio 0,2 M
Sem alterao
680
270
50
IV
670
280
45
10
667,5
295
37,5
25
VI
655
320
25
50
~g1mL,
Dimetilform
trs rplicas de 20
~L
fo
a diferentes velocidade do fluxo da fase mvel: 0,8, 1,0 e 1,2 mL. O temp
Proporlo (mL)
Oxalato de
amnio
Volume adicion
Dimetilformamida
Fosfato
dibscio de
amnio
0,18 M 0,2M
Dimetilforma
Fase mvel
O,09M
0,1 M
Sem
alterao
680
270
50
VII
630
320
50
50
VIII
639
320
47
50
5,0; 10,0; 25,0; 50,0; 100,0; 100,0; 200,0; 250,0 e 500,0 IlglmL foram realiz
Procedeu-se
de rea
do
pico
~glmL
obten
~g/mL
~g/mL
~glmL.
Em seguid
~glmL
conjunto
de solues
do
padro
e da
amostra
injet
padro e amostra. Nos dois ensaios anteriores, o teor foi calculado considera
definido como aquele que produz uma resposta soluo do padro duas ve
maior que o rudo observado no cromatograma.
5.0
5,0
50,0
10.0
5,0
50,0
quantidade
porcentagem
de
recuperao
para
Quantidade recuperada
% de recuperao
= OIS
% F =01Sx100
F
determinao
da
resoluo
dos
picos
(R)
V1
qumica
de
referncia
de
cJoridrato
mesmo balo volumtrico com solvente diluente (item 4.2.7.1.1.) para obt
Fator assimetria
bo,(5
2 x ao,OS
ao,os
(2
~glmL
foram empregados
para cada
concentrao foram
obtidas para
determinao.
O fator de capacidade indica a reteno da amostra pela coluna
Fator de capacidade
K'
= V1 -
VQ
Vo
(15
~.5h
de tetraciclina
e c1oridrato
tomando-se
para
tanto
alquota
de
1,O
mL
diluin
4.2.9.
Estudo
para
detenninaAo
de
cloridrato
4~pianidrotetraciclina
Para esta etapa do trabalho, uma soluo com 500 llg/ml foi prepa
com a finalidade de obter a menor concentrao que pode ser detectada por
preparadas, sendo de 50 e 100 Ilg/mL e tambm outras com 0,1; 0,25 e 0,5 Il
de c1oridrato de 4-epianidrotetraciclina.
Os
cromatogramas
foram
obtidos
os
clculos
IW
de
O teo
O teor em porcentagem
laboratrios f
A diferena entre as mdias dos teores dos dois mtodos foi determi
atravs do clculo do valor f, que foi comparado com a tabela de f (p < 0,001 )6
BIBLIOTECA
SOa"1.1nS3~
In
TABELA 5
Laboratrio
Substncia ativa
Lote
Caractersticas de destaque
Cloridrato de
oxitetracilina
1,2,3
Cloridrato de
tetraciclina
Idem ao anterior
2
3
Cpsulas impregnadas de p.
Idem ao anterior
3
E
Idem ao anterior
Idem ao anterior
Idem ao anterior
1,2,3,4
tetraciclina
Cpsula
Idem ao anterior
individualmente embaladas.
1
2,3
Idem ao anterior
3
E
Idem ao anterior
1,2,3,4
Idem ao anterior
Idem ao anterior
1,2
3
H
Idem ao anterior
1,2,3,4
Idem ao anterior
1,2
4 u
4 u
4 u
4 u
4 u
Idem ao anterior
Idem ao anterior
1,2
3
L
Fosfato de
tetraciclina
CE!ula
1,2,3,4
Cloridrato de
tetraciclina
Cpsula
1
2
3
547,2
538,4
581,4
5,8
3,1
3,8
10
Zero
Zero
Idem ao anterior
1
2
3
557,0
516,0
520,5
1,9
3,1
1,7
Zero
Zero
Zero
Idem ao anterior
1
2
3
513,1
468,6
544,4
6,8
2,2
3,5
20
Zero
Zero
Idem ao anterior
1
2
3
4
544,5
551,7
560,2
548,2
1,4
3,0
5,4
5,7
Zero
Zero
Zero
18
Idem ao anterior
547,3
2,9
Zero
Idem ao anterior
1
2
3
527,4
513,8
530,8
3,9
2,3
6,6
8,3
Zero
10
Idem ao anterior
1
2
3
4
526,78
525,24
529,0
542,1
2,1
3,2
3,5
4,5
Zero
Zero
Zero
10
Idem ao anterior
1
2
3
507,8
512,2
522,3
3,8
4,4
5,8
Zero
5
18
Idem ao anterior
526,8
1,2
Zero
Idem ao anterior
1
2
3
519.17
487,9
530,3
2,7
4,6
3,1
Zero
10
Zero
Fosfato de
tetraciclina
Cpsula
1
2
3
4
668,7
654,3
665,1
686,2
2,0
1,2
1,8
2,0
Zero
Zero
Zero
Zero
CV
=Coeficiente de variao
1; 2; 3
6; 0;6
1; 2; 3; 4
o; 0;0;0
95,3
5,2
1; 2; 3
O; 0;0
1; 2; 3; 4
o; O; O
1; 2; 3
0;0;0
94,6
4,7
1; 2; 3
o; O; O
1; 2; 3
O;
o; O
TABELA
Laboratrio
= Cpsulas
de fosfato de tetraciclina; CV
= Coeficie
Teor(%)
Reteste
CV(%)
Nmero de unidades com
teor abaixo do valor Q - 15 %
Mdia do
teor (0.4)
(E2)
Aa
91,8
7,0
93,2
1; 2
106,9; 107,4
o; O
8,0; 3,0
98,4; 103,7
1; 3
43,9; 56,5
12; 12
4,4; 3,4
44,0; 57,0
Estgio do
ensaio
Nmero de cpsulas
testadas
E,
Critrio de aceitao
=12
E2
6 (E 1) + 6
E3
12 (E 1 + E2) + 12
=24
ao
E3
12 (E 1 + E2) + 12 = 24
Estgio do
ensaio
Nmero de cpsula
testado
E1
E2
6 (E 1) + 6 = 12
E3
12 (E 1 + Eu + 12 = 24
Critrio de aceitao
ensaio
descrito
na
Farmacopia
Britnica:D
sistema.
Aplicou-se
aumentos
sucessivos
da
velocidade
de
:;
0.0600
0.0400
0.0200
::!
iC
o 0000 I
Cloridrato de 4-epianidrotetrack:lina
...
11'jP--r1SY
-0.020
-0.040
-0.060
-0.0&0
10.00
20.00
Minutos
FIGURA 2 Cromatograma
referente
ao
padro
de
cloridrato
0.400-.1
Cloridrato de tetraciclillll
o
...o
0.200-
N
N
:/\
~
o
O.ooo--t-i
I
I'r
-0.20~
--r
/ -
"-
_--_Co~T
/
0
, ,
,
I
10.00
20.00
.unutas
FIGURA 3
~gJmL
~L
(psi)
0,8
1788
0,9
2071
2400
2682
2918
3200
1,0
1,1
1,2
1,3
1,4
1,5
1,6
3435
3694
Ultrapassou 4000
(Mxima)
Velocidade de fluxo da
fase mvel (mUminuto)
Presso
Tempo de reteno
(psi)
(minuto)
Mdia
(minuto
13,0
0,8
1989
13,3
13,0
13,1
9,0
1,0
2400
9,1
9,0
9,0
8,2
1,2
2941
7,7
7,8
7,6
1929
15,2
1929
15,2
1929
15,2
2471
12,2
2471
11,7
2988
11,6
1988
10,1
2988
10,1
2988
10,4
1906
15,3
1906
13,6
1859
13,4
2400
2376
2400
10,7
10,7
10,7
10,5
2918
2918
2918
8,9
8,9
8,9
8,9
1,2
1859
1859
1859
14,2
14,2
14,1
14,2
0,8
2424
2424
2424
11,4
11,4
11,4
11,3
2918
2941
2918
9,5
9,5
9,5
9,5
1,2
0,8
1,2
0,8
11
11I
15,2
11,8
10,2
14,2
Fase
mvel
IV
VI
Velocidade de fluxo
da fase mvel
(mUminuto)
Presso (psi)
Tempo de reteno
(minuto)
0,8
2188
2188
2141
14,5
14,2
14,1
14
1,0
2729
2706
2682
11,3
11,2
11,2
11
1,2
3082
3129
3224
9,0
9,1
9,3
9,1
0,8
2329
2353
2353
13,4
12,7
12,7
13
3012
3012
3012
10,3
10,3
10,3
10
1,2
3647
3647
3647
8,6
8,6
8,6
8,
Precipitou
temperatura
ambiente
Md
(min
Fase mvel
Pressa (Psi)
VII
Precipitou temperatura
ambiente inferior a 25C
VIII
2988
9,1
2988
9,1
2988
9,1
2988
9,1
2988
9,0
foi
estabelecida
para
os
ensaios,
aps
obteno
os
cromatogramas
com
os
picos
do
cloridrato
Concentrao
Fator de anlise
CV(%)
0,5
13159
26318
1,3
28681
28681
6,7
139345
27869
0,5
10
308720
30872
3,5
25
698908
27996
0,5
50
1414984
28300
0,3
100
2846615
28466
0,4
200
5601890
28009
0,5
250
7072055
28288
0,1
500
14280021
28560
0,2
(~gJmL)
--
3,9
CV (%)
0,9999
Solulo-teste
Concentralo (J.1gJmL)
Area do
pico
1
Fator de
anlise
10
284384
283083
291190
297034
287324
28438
28308
29119
29703
28732
2,0
50
1495636
1493340
1495793
1481510
1500698
29913
29867
29916
29630
30014
0,6
100
3020806
3023581
3020723
3028728
3015510
30208
30236
30207
30287
30155
0,2
CV(%)
2,3
CV(%)
Reprodutlbilidade entre
colunas CV (%)
CV
=Coeficiente de va
.
Fator de anlise:
\li
0.(00-
'ii
~ I.n
0.300-
~
o
0.200-
~
-8
.1:
0.100-
,-1
'.'00 l
T
2.00
~.
6.00
4.00
M:LDutoa
FIGURA 4
5,3
minutos.
Condies
do
sistema
208
cromatogrfico
--,
I
1..,
-1
0.600-1
..t.
o
0.400
...
~
0.200,
0.000
on
on
'
4.00
2.00
FIGURA 5
..
...
...on
T '
/.::-
6.00
Minuta.
8.00
...-:. _ _ -
-'-
!
10.00
J.1g/mL,
nas
condies
do
sistema
cromatogrfico
- - - - - - - - - - -- - - - --- - - -- - - - - - - - - - - - - - -- --- - - - -
1.400.+07
~
I
-~
I
- --- - - - - -
1.200. .07
----------------------~-----------------------~-~------I
I
I
I
- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -: - - - - - - - - - - - - - - - - - / - - - - -,- - - - - - - - - I
1.000. .07
I
I
,
I
.9.000.+06
- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - I - - - - - - - - -
&
I
-
-1-
I
I
I
! 6.000. .06
-----------------------~
4.000"06
---------------------~--------I
I
I
_______________
JI
1I
I
I
-------r--------------~-----------------------~-------I
I
2.000. .06
I
I
I
I
----------------------~-----------------------~---------
0.000"00
0.20
0.40
AIIlount
FIGURA 6
As
solu6es-teste
dos
picos
determinadas
nas
injetadas
~g/mL
representara
de tetraciclina e
condies
do
sistem
6.000.-+05
I
I
-----,---------I
5.000.-+05
-- -- - -- -
_________ -i-
____
__
3.000e+05
----
-----
-,-
-..-..
t- -
I
I
- -- r- _ _
_ _ _ _ I:
-----
-:- - - - - - - - - - - -;- - - - - - - - - I
~-----------~-----------
I
-
-- -
2.000e+05
1.000.-+05
~/
-:- - - - _ :
I
.4.000.-+05
-1- -
-, -
-. -
-1- -
-,- -
I
I
I
I
I
0.000.-+00
-,- -
0.005
I
-
-,- -
0.010
0.015
0.020
Amo\mt
FIGURA 7
p
(
0.08000.06000.0400-='
0.0200-='
O.OOOO-
.....
1/.._..\..
S.OO
1.0.00
Minutoe
FIGURA 8
diferentes nmeros de lote foi verificada atravs do ensaio com trs colun
padro, bem como do conjunto de ensaios para cada coluna e para o conju
total de respostas, obtidos atravs dos valores de fator de resposta.
~gl
100 ~glmL
Teor (mg/cpsula)
Soluo-teste da amostra (J.1g/mL)
25
100
465,7
463,1
462,0
461,0
460,4
454,1
453,6
453,6
453,5
453,0
CV(%)
0,5
0,1
Mdia (J.1QIrnL)
Mdia (%)
462,4
453,5
92,5
90,7
Repetibilidade do ensaio
CV~
CV = Coeficiente de variao
A correlao (R) para a cUlVa de calibrao foi de 0,9999
1,1
~glmL,
Teor (mg/cpsula)
CV(%)
Repetibilidade do ensaio
CV(%)
CV
25
25,50
25,50 e 100
525,3
526,5
527,0
526,9
527,7
513,0
514,2
514,7
514,5
514,4
517,7
519,0
519,4
519,3
520,1
0,2
0,2
0,2
1,0
=Coeficiente de variao
Ensaio
CV (%)
Repetibilidade
ou CV (%)
Ensaio
2
Ensaio
1
Ensaio
2
Ensaio
1
498,7
501,8
530,2
531,2
501,4
497,8
501,8
530,5
530,3
501,7
50
50
497,3
501,4
530,2
529,6
497,6
501,6
530,3
529,5
501,4
501,4
50
50
498,0
503,0
530,3
529,6
501,3
50
0,1
0,9
0,0
0,2
0,0
0,4
En
0,1
0,9
=Coeficiente de variao
Ensaio 1 =Soluo da amostra na concentrao de 50 J.lQ/mL
Ensaio 2 =Solues da amostra nas concentraes de 50 e 100 J.1QImL
CV
5.5.4.
Construo
da
curva
de
calibrao
do
cloridrato
4-epianidrotetraciclina
0,005
No detectado
0,01
5,1
828
82500
3,1
0,025
5,1
1277
51080
4,2
0,05
5,1
2534
50680
9,5
0,10
5,1
5195
51950
1,1
0,25
5,1
12083
48332
1,7
0,50
5,1
24972
49944
1,8
1,00
5,1
50086
50086
0,8
2,50
5,1
124450
49780
0,8
5,00
5,1
527837
51567
0,8
10,00
5,1
498139
49813
0,3
25,00
5,1
1218594
48744
0,2
50,00
5,1
2487736
49755
0,6
R
CV = Coeficiente de variao
R = Valor da correlao da curva de calibrao
0,9999
2.600.+06 -+
- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -, - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - I
2.400.+06
---------------------------------------------T--------I
2.200.+06
----------------------~-----------------------.----~---,
I
I
2.000.+06
----------------------------------------------~--------I
I
1.800.+06
----------------------~------------------~---~---------
1.600.+06
----------------------~---------------------~-------I
I
.1.400.+06
----------------------,--------- -------------T---------
~1.200.+06
I
I
----------------------~---I
-----------------r---------
1.000.+06
----------------------~----------------------~--------I
I
8.000.+05
------------------~---~-----------------------T------- -I
6.000.+05
-------------~--------------------------------~--------
4.000.+05
________
2.000.+05
~-------------~---------------
---~------------------I-----------------------T--------I
0.000.+00
----------------------------------------------.--------I
0.00
20.00
40.00
AIDl:nmt
FIGURA 9
-f
-""
-
0.'00l -
-1)-
:tz
-a,
'"
ao
0.300
'"c
:..
II
~
&:
6
~
c
'O
0.2001)-
1i
...
.
1
0.1001)-
l_
-. -
"!
...-c.
.....
0.000J-
20.00
10.00
Minuto.
FIGURA 10
cloridrato
de
4-epianidrotetracilina
nas
condies
sist
4-epianidrotetraciclina.
Os
cromatogramas
do
c1oridrato
de
tetrac
0.0012-
0.0010-
0.0008-
0.0006-
0.0004-
.!
~~
il
~!
8.51
1i
0.0002-
0.0000_'V-~"---_~~_~~
-0.0002-
0.'00
. 1.'00
. 2.'00
3.'00 '
4.'00 '
5.'00 '
,6
Minutos
FIGURA 11
referentes
ao
cloridrato
I'
~.!
-0.00004-
-0.00006-
~
-0.00008-
!/\~
1\ i
.}~ ~\I.\
.1' \JV\I
I
('J\~' /\11\~l:
i ~
., VI.Jv I1 ~\ ~ I
.
-o. 00012-11
.,
I.
\/
I
fI
.i1
I~
I I\
J'
~(
li
I:
V!
I~
V' V\]J V~
tI
\.
-0.00010-
',
l'l \,
J
\rrJV\
I,
-0.00014-
-0.000160.'00
1.'00 .
. 2.'00
. 3.'00
. 4.'00
5.'00
Minut~s
FIGURA 12
referentes
ao
cloridrato
TABELA 24
Princpio ativo
Lote
Teor-mglunidade (%)
Cloridrato de
doxiciclina
106,9 (106,9)
107,0 (107,0)
107,5 (107,5)
515,0 (103,0)
547,2 (109,4)
534,1 (106,8)
Cloridrato de
oxitetraciclina
Cloridrato de
tetraciclina
Cloridrato de
tetraciclina
Cloridrato de
tetraciclina
Cloridrato de
tetraciclina
Cloridrato de
tetracclina
Cloridrato de
tetraciclina
CV
=Coeficiente de variao
547,2 (109,4)
0.4
594,9 (119,0)
548,2 (109,6)
1.9
557,8 (11,6)
507,7 (101,5)
1.5
561,0 (112,6)
501,5 (100,3)
0.3
520,6 (104,1)
243,6 (48,7)
3.1
277,6 (55,5)
460,1 (92,0)
3.9
525,5 (105,1)
317,0 (63,4)
3.4
347,7 (68,7)
486,4 (97,3)
0.5
533,2 (106,6)
479,3 (95,9)
3.1
518,2 (103,6)
517,6 (103,5)
2,3
571,3 (114,6)
479,1 (95,8)
0,8
510,4 (102,1)
514,0 (102,8)
1,0
556,3 (111,2)
520,9 (104,1)
1,7
594,2 (118,8)
524,0 (104,8)
2,3
569,2 (113,8)
507,5 (101,5)
0,3
521,8 (104,4)
526,5 (105,3)
0,5
562,3 (112,5)
513,6 (102,7)
1,9
571,1 (114,2)
517,6 (103,5)
1,2
566,8 (113,4)
531,0 (106,2)
2,9
563,6 (112,7)
Cloridrato de
tetraciclina
Cloridrato de
tetraciclina
Fosfato de
tetraciclina
504,3 (100,9)
2,7
546,2 (109,2)
511,6 (102,3)
2,1
585,9 (117,2)
466,9 (93,4)
4,0
506,5 (101,3)
513,2 (102,6)
4,6
588,1 (117,6)
485,3 (97,1)
1,4
554,3 (110,9)
487,2 (97,4)
2,0
555,4 (111,1)
498,5 (99,7)
0,7
553,5 (110,7)
516,5 (98,2)
5,3
582,9 (116,6)
498,3 (99,7)
2,4
553,4 (110,7)
483,8 (96,8)
1,6
524,8 (105,0)
CV = Coeficiente de variao
apl
amostra, nas Tabelas 27, 28, 29, 30 e 31. O coeficiente de correlao empre
~g1mL.
A exatido e especificidad
~g1mg
~g1mg,
531,2
530,8
529,6
530,2
530,5
530,2
530,3
530,3
501,6
501,5
501,7
502,7
503,6
0,2
546,6
545,0
548,0
545,9
548,0
0,2
453,3
451,6
451,9
451,4
456,4
0,5
519,1
518,7
519,7
520,1
518,0
0,2
0,0
=Coeficiente de variao
5,2
507,9
507,6
59,03
508,4
512,8
512,9
513,0
510,5
510,7
0,3
493,0
490,4
491,5
492,0
495,8
0,4
517,6
515,5
517,1
516,2
518,6
517,3
516,9
0,2
1,9
CV = Coeficiente de variao
529,0
528,5
528,6
429,7
513,2
512,6
511,7
512,2
513,0
0,1
496,9
496,5
495,9
497,6
498,3
0,2
516,4
515,8
515,1
513,9
515,3
0,2
511,4
509,8
509,9
509,9
510,6
0,1
1,9
CV
=Coeficiente de variao
534,0
532,2
538,6
530,4
534,4
0,6
511,6
513,0
511,4
511,8
512,6
0,1
504,4
504,2
503,7
504,8
505,7
0,1
536,4
535,0
535,0
534,1
535,0
0,2
2,5
CV = Coeficiente de variao
538,3
537,1
2
541,6
543,7
544,6
544,0
543,5
0,2
548,7
547,7
547,3
547,6
547,2
0,1
508,2
507,7
508,0
508,8
508,7
0,1
516,7
516,7
517,5
516,4
517,6
0,1
=Coeficiente de variao
2,8
30,4
50,4
98,5
101,4
100,8
98,
29,7
50,8
101,0
98,8
101,7
101
30,7
51,0
101,5
102,3
102,0
101
30,6
51,4
98,6
102,0
102,7
98,
30,8
50,0
101,1
102,7
100,2
101
29,5
50,2
100,3
98,2
100,3
100
30,1
49,7
100,4
100,3
99,4
100
29,2
49,20
99,4
97,3
98,4
99,
29,3
50,4
100,5
97,7
100,8
100
10
28,7
48,2
97,9
95,5
96,5
97,
Ensaio
CV(%)
Teor
(~/mg)
(%)
2,2
2,3
2,0
2,2
0,2
0,2
0,2
0,2
5,8
2,2
2,3
2,2
2,0
2,2
0,2
0,2
0,2
0,2
0,2
5,4
2,4
2,5
2,5
2,6
2,4
2,4
0,2
0,2
0,3
0,3
0,2
0,2
3,2
2,6
2,4
2,5
2,4
2,6
2,4
0,3
0,2
0,2
0,2
0,3
0,2
3,1
Mdia
2,3
0,2
CV(%)
Repetibilidade entre os ensaios
8,0
CV
=Coeficiente de variao
lote de amostra.
c1oridrato
de
tetraciclina
100
~g1mL,
que
mostra
os
picos
(R) foi
calculada atravs
(mg)
(%)
1,7
0,3
1,9
0,4
0,9
0,2
1,4
0,3
1,2
0,2
0,9
0,2
1,4
0,3
0,8
0,2
1,4
0,5
1,7
0,3
1,5
0,3
1,2
0,2
1,7
0,3
1,9
0,3
1,5
0,3
1,9
0,4
1,3
0,2
CV
=Coeficiente de variao
1,7
0,3
9,1
1,6
0,3
2,7
2,0
0,4
1,9
2,3
0,4
3,1
1,9
0,4
1,0
1,9
0,4
2,2
4,0
0,7
2,5
1,6
0,3
3,3
1,8
0,4
2,0
1,1
0,2
1,3
1,8
0,3
4,6
2,0
0,8
0,1
2,9
0,1
1,0
0,1
13,2
0,1
6,0
2
0,8
3
0,9
4
CV = Coeficiente de variao
:>
o(
t!
0.0018-1
II
0.0016-1
II
0.0014~1
II
0.0012-1
I I
0. 0010
I I
.3
..,.~
C>
"c::I
C
O
0.0008-
0.0006-
0.0004-
0.0002- ~~
0.0000-
-0.0002-
-0.0004-
0.'50
1.'00
1.'50
2.'00
2.'50
3.'00
3.'50
4.'00
4.'50
5.'
Minuto..
FIGURA 13
100
1,5
R = Resoluo
Figura 14.
Cromatograma
Resoluo (R )
Seletividade (a)
1
3
4
5
3,67
3,67
3,67
3,4
3,9
1,5
1,5
1,5
1,5
1,5
Mdia
3,7
1,5
R = Resoluo
a = Seletividade
0.0600
Jt-
...
o
1ft
0.0400
~
~. I~~
1
~
0.0200
Ao
'~y
0.0000
!t \
I
..
:
~/) :..
.\ " ,
./
1 - - - - - - -""
2.00
4.00
6.00
Minutos
FIGURA 14
de
tetraciclina
12,5
J,LglmL
do
cloridrato
de
fase
mvel:
oxalato
de
amnio
0,09
TABELA 38 Valores
de assimetria
do
pico
(T),
calculados
parti
~gJmL.
Cromatrograma
1,1
1,2
1,1
1,0
1,0
Mdia
1,1
2
3
4
T = Assimetria do pico
Utilizao da
coluna
100
50
K'
K'
Incio
3,4
3,4
3,34
3,4
3,4
6630
6898
5852
5281
5814
3,4
3,4
3,4
3,4
3,4
6122
5238
5501
5786
6457
3,4
6095
3,4
5582
Final
2,7
2,6
2,7
2,7
2,7
2977
2869
2783
2659
2309
2,7
2,7
2,7
2,7
3032
3059
3816
2816
2816
2,7
2877
2,7
2951
N = Eficincia
0.20-
0.18-
0.16::>
rc(
0.14-
I~
0.12-
0.10-
O.
as-
'\
!\
0.06-
lr (
~'l
0.04-
tIll/L .
0.02-
0.00-
2.'00
4.'00
6.'00
8.'00
10:00
12:
MinutlOS
'C
.,g
U
0.10-1
I
1
I
I
-I
:>
cC
0.08-
0.06-
0.04-
0.02-
O.OO-r
0.00
. . . - . .!~
_.
1.'00
2.'00
3.'00
4.'00
5.'00
Minut~
FIGURA 16
J.lg/m
0.045-
f
i
0.040-
~
0.035-
.~
6I
~
(\)
0.030-1
"'t:l
'c
..9
0.025-
U
0.020-
0.015-
0.010-
0.005-
0.000-
'4.'00'
'4.'50'
'5.'00'
'5.'50'
'6.'00'
'6.'50'
'7.'00'
'7.'
Minutos
FIGURA 17 Sobreposio
dos
cromatogramas
obtidos
de
solues
Cs-250 x 4,6 mm
.~
Q)
"O
:2
Q.
Q)
0.10-1
Q)
"O
:g
.s
~
:g
.2
;;:
0.08-
0.06-
0.04-
j
I
0.02-
L\
0.00-1
0.'00
'1.'00'
'2.'00'
'3.'00'
's .'00'
'4.'00'
'6.'00'
'7.'00'
Minutos
FIGURA 18
0.0020O.OOlS-
.S
]
0.0016-
f!
0.0014-
.~
.~
0.0012-
-8
O
.s
0.0010-
'C
..2
O.OOOS-
/~~
0.00060.00040.0002-0.0000_ _o
_ _ _ _- - - -
_ _- - - - - -
_ _ ---.-
-0.0002-0.0004-0.0006. 4.'20
4.'40
4.'60
4.'SO
5.'00
5.'20
5.'4
MinutGs
FIGURA 19
Sobreposio de cromatogramas
de
uma
soluo
padro
0.0006-
0.0004-
0.0002'- -
4.'00 '
. 4.'20'
. 4.'40
, 4 .'60'
. 4 .'8 O.
. 5.'0 O'
. 5 .'20
. 5.'40
--
--.
--
. 5.'60'
Minutos
FIGURA 20
Sobreposio
de
cromatogramas
da
soluo
padro
fI
-~
~
1c!
o. 0020~1
0.0015-
0.0010-
/j
tl/
)'~
0.0005-
_,
V \,j '--V~/\
.~
/
//
\1
'LJ
4.'40
4.'60
4.'80
5.'00
5.'20
5.
Minut03
FIGURA 21
Laboratrio
Ensaio
Mdia do
teor
DP
Minimo
Mximo
B
B
C
C
Cromatogrtico
Microbiolgico
Cromatogrfico
Microbiolgico
Cromatogrfico
Microbiolgico
Cromatogrfico
Microbiolgico
Cromatogrfico
Microbiolgico
Cromatogrfico
Microbiolgico
Cromatogrfico
Microbiolgico
Cromatogrfico
Microbiolgico
Cromatogrfico
Microbiolgico
Cromatogrfico
Microbiolgico
Cromatogrtico
Microbiolgico
60
14
34
19
40
30
53
20
8
4
54
13
71
26
53
12
23
3
45
36
78
14
535,6
592,8
513,1
544,9
337,9
390,4
492,4
551,9
515,1
548,9
521,2
560,7
520,4
573,0
504,7
563,7
466,5
516,4
499,5
566,0
504,5
554,7
12,7
23,6
21,6
25,7
89,7
122,5
17,3
28,6
4,9
9,6
11,7
35,5
12,1
26,1
11,5
33,8
10,1
0,0
16,8
33,1
24,0
21,8
507,7
558,8
486,2
474,2
237,1
264,6
468,3
503,5
508,4
538,4
503,7
506,8
495,9
528,0
487,6
532,4
445,0
516,4
470,6
519,5
451,4
510,9
549,5
637,1
558,4
574,6
472,6
555,2
523,1
592,6
519,5
560,4
538,6
642,1
552,9
624,9
527,0
646,2
479,9
516,4
530,1
651,9
548,0
586,9
O
O
E
E
F
F
G
G
H
H
I
I
J
J
K
K
L
L
DP = Desvio padro
U 25
"3
li)
a.
'CU
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20
15
o
o
10
'lU
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C)
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C,
o
E
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-10
-15
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o -20
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-25
B
laboratriolLotelData
FIGURA 22
o
-30
-20
-10
10
20
Figura 23
LEi LECi
=
=
FIGURA 24
LECs LEs
LECi
LECs
0.16% I
, : : :
I 24%
0.14%
21%
ars.
18%
Q; ~ 0.12%
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~ 0.10%
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FIGURA 25
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10
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+- Alvo
+-
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LEi
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200
Laboratrio/Lote/Data
=
=
=
FIGURA 26
Na
27
Figura
foram
representados
os
resultados
das
anlis
cromatogrficos
microbiolgicos,
representando
os
valo
obtidos pelo mtodo microbiolgico foram superiores aos obtidos pelo mto
:5
(/)
o-
-tU
(,)
>
450
-S
o
C1>
r-
Laboratrio/Lote/Data
FIGURA 27
200 ,
200
~
I
~
I
~
I
300
400
500
600
700
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200
300
400
500
600
700
F
G
H
I
O
O
O
O
J
K
L
8
54
71
53
23
45
78
0,0
0,0
0,0
0,0
4,4
0,0
0,0
O
O
Anlise microbiolgica: abaixo do limite inferior
Laboratrio
Pontos abaixo
0,4
B
C
O
E
F
G
H
I
O
O
14
19
30
20
4
13
0,0
0,0
60,0
0,0
0,0
0,0
0,0
0,0
0,0
0,0
0,0
18
O
O
O
O
O
O
J
K
O
O
L
Anlise microbiolgica: acima
Laboratrio
Pontos acima
1
B
C
O
O
O
O
E
F
O
G
1
H
O
26
12
3
36
14
do limite superior
n
14
19
30
20
4
13
26
12
3
K
L
36
14
0,4
7,14
0,00
0,00
0,00
0,00
7,69
0,00
8,33
0,00
5,56
0,00
Microbiolgico (Li)
i;::::
.~
Q.
70%
Microbiolgico (Ls)
(/)
Q)
...
60%
40%
(/)
Q)
"O
.2
50%
30%
(/)
Q)
.~
20%
;(ij
o~
10%
0%
B
Laboratrios
FIGURA 29
o"ssn~sla
161
fundamentais,
devendo
ser
implantados
de
maneira
planejad
ser vulnervel ao fluido digestivo para que seu contedo seja liberado
fundamental diz respeito ao peso mdio, tendo sido portanto incluso no pre
trabalho sua determinao. O peso mdio das amostras foi obtido
princpio ativo, sendo o tamanho das cpsulas igual as outras amostras, deixan
resultados do teste e reteste, quando o teor encontrado foi menor que o valo
conduzindo
a aprovao.
As
duas amostras
reprova
foi maior (14,2 %) tendo os teores variando de 75,9 a 115,4 % para o lote 2
uma unidade com teor inferior a 85 % no teste, sendo portanto realizado o ret
com mais seis unidades. A mdia dos valores de teor obtidos das 12 unida
testadas foi de 93,2 % como apresentado na Tabela 8. Sendo que nenhuma
clordrico, foi empregado neste trabalho, o cido clordrico 0,1 N como meio
dissoluo por se tratar de uma preparao na forma de drgea. Contudo,
para este ensaio ocorreu a dissoluo rpida deste frmaco no meio cido. D
se considerar que mesmo sendo menos solvel em meio cido, seu emp
preparaes farmacuticas empregando uma matriz, que foi testada nas mes
condies das amostras, e que foram empregadas, como neste trabalho, ape
para evitar a flutuao, como o uso de ncoras, nas quais as cpsulas de gela
podem ser aderidas, ocasionando o contato irregular das cpsulas com o meio
Staphylococcus aureus ATCC 29737. Nas Tabelas 24, 25 e 26, esto coloca
os valores de potncia em miligramas, obtidos por cpsula ou drgea.
A exce
padro
de
c1oridrato
de
tetraciclina
cloridrato
1,6 mUminuto (Tabela 13). A vida til da coluna, entre outros fatore
fase mvel quando o sal foi reduzido em 10 % (Tabela 15). A menor concentra
13 %, empregando fluxo constante. Aps este estudo, a fase mvel foi defi
Como foi
observado
no estudo anterior,
aumento do
volume
caracterizando
um ensaio demorado.
A otimizao
na
fase
mvel,
pH
JO
temperatura
da
coluna.
~-Bonda
500 J,lg/ml com coeficiente de correlao (R) de 0,9999, que pode ser obser
realizao dos clculos. Desta maneira, foi analisada a variao dos resulta
~glmL,
~glmL,
o coeficie
~g/mL,
~g/mL
~glmL.
~g/mL
~glmL,
baixos, e todos semelhantes entre si, como pode ser observado na Tabela 21
Farmacopia
Americana208
recomenda
concentrao
10
vezes
supe
facilmente
colaboradores
49
obtidos,
pela
mudana
na
fase
mvel.
DIHUIDI
Para este fator de variao, o mtodo mostrou ser reprodutvel. Segundo aut
duas substncias neste trabalho foi de 0,2 ng, que indicou uma gra
sensibilidade do mtodo empregado.
com
mtodo
cromatogrfico
estabelecido
os
resulta
Tabelas 27 a 31. Para cada amostra foram efetuadas de quatro a seis repeti
21,5 minutos (Figura 10). A altura deste pico corresponde a apenas cerca
ensaio, foi necessrio tempo maior para a eluio deste pico, de forma a elim
Para isto, foi empregado cromatograma obtido desta soluo de resoluo com
descreveu um
vitro de preparaes
estudo
colaborativo
do
ensaio
slidas,
empregando
mtodo
deve ser realizado e estratgias devem ser definidas com a finalidade de redu
1S4
os custos, sem no entanto comprometer a qualidade do produto .
pelo
emprego
ao material
Pelos resultados da Tabela 39, verifica-se que ocorreu uma perda de eficincia
3000 injees foram efetuadas sem a mudana nos resultados, sendo o vol
de injeo de 14 Ill, indicando a possibilidade do emprego da coluna.
rlCuldade de Cj~l1c;as ~. ~
Uruysrsidad3 df.
----
...
---=----~
S;~
.-,
PdU
dos
cromatogramas
de
cloridrato
de
tetraciclina
c1oridrato
de
na
cor
preta).
O outro,
de
uma
soluo
de
c1oridrato
de
com traado na cor azul). Observa-se a sobreposio exata dos picos da soluo
semelhana dos picos desta substncia com o pico da tetraciclina com a mesma
pode-se verificar o
a preciso dos
mtodos
microbiolgico
dos erros em tomo do zero. Para determinar o efeito do erro da anlise, com
com
os
resultados
obtidos
dos
mtodos
microbiolgico
obtida nos resultados, entre os dois mtodos, foi explicada pela diferena
atividades das impurezas que no foram quantificadas pelo mtodo CLAE.
Tendo em vista esta diferena entre os resultados obtidos pelas
metodologias, e com a meta de obter informaes quanto correlao
ambas, aplicou-se o emprego do teste
dos dados obtidos. Ainda conforme pode ser observado na Tabela 41, alm
laboratrio O, o laboratrio J apresentou 4,4 % dos ensaios individuais com
mesmo
anteriormente
exigncias
amplas
de
ensaios
produtos farmacuticos disponveis ao consumo pela populao. Somandoesta providncia das inspees peridicas nas empresas quanto a adoo
BPF, certamente se poder contar, em breve, com a dispensao
medicamentos que possam incorporar as caractersticas indispensveis
qualidade.
S3snl~NO~
61,
7.2.
7.3.
7.4.
7.9.
S"~I:I"~~OI1818 S"I~N3~3:13~
I
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216
Oll\lnS3~
amostras, conforme o mtodo recomendado pela USP XXIII. Das amostras, dua
mtodo de cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE) foi realizado. Para isto
dibsico de amnio 0.18 M (64:32:4.7) com pH entre 7,6 e 7.7. Os resultados par
A~VlNlNnS
8tl
only t'NO of samples were rejected and ali the others approved without restrictio
except four of them, wich required a retest. The evaluation of the individual val
obtained in the assay of dissolution in each sample was significant, with a varia
potency of 55.5 % and 68.7 % below the specified limit from 90 % to 125 %
labeled value. A comparative study of this method and the HPLC one was t
performed. The USP XXIII method was chosen after a preliminary assay, follow
by the determination of its validation parameters and system suitability.
established
chromatographic
method
employed
reversed
phase
colu
Tlot
maximum of 0.5 % was found, below the limit of 3% specified in the USP X
one,
and
the
difference
between
the
averages
of