Sociedade Brasileira de Química (SBQ)

Estudos sobre os parâmetros cinéticos da reação da enzima

Acetilcolinesterase imobilizada sobre nanotubos de carbono
Érica M. Kataoka* (IC), Lívia S. Florio (PG), Murilo F. Cabral (PQ), Marcos R. V. Lanza (PQ), Sergio A.
S. Machado (PQ)
Instituto de Química de São Carlos (IQSC). Universidade de São Paulo (USP). *kataoka.erica@gmail.com

Palavras Chave: Acetilcolinesterase, Nanotubos de Carbono, UV-Vís, Carbaril

Introdução (B) MWCNT+AChE na presença do substrato e na
presença de carbaril.
Acetilcolinesterase (AChE) hidrolisa o Os dados obtidos a partir do ajuste linear das
neurotransmissor acetilcolina após as sinapses curvas (1/v0 = (KM+Vmax)1/[S] + 1/Vmax) para a Fig1A
colinérgicas no sistema nervoso central e periférico, mostram que os valores de KM e Vmax foram iguais a
‒4 ‒6 ‒1 ‒1
e assim é uma enzima-alvo para vários agentes 1,92 10 M e 7,26 10 M s ,
farmacológicos e pesticidas utilizados em muitas respectivamente. Já na presença de carbaril, os
1
culturas . valores de KM e Vmax sofrem influência do parâmetro
Visando a aplicação desta enzima em alfa ( ) que aumenta a inclinação das retas obtidas.
‒7
biossensores, um dos grandes desafios é garantir a Uma vez que = 2 ([Carbaril] = 5 10 M), os
‒4
estabilidade da enzima após a etapa de valores de KM e Vmax se tornam iguais a 3,84 x 10
‒6 ‒1 ‒1
imobilização sobre o elemento transdutor. Neste M e 7,21 x 10 M s , respectivamente. Os
caso, os nanotubos de carbono (MWCNT) e valores de Vmax praticamente não se alteraram, mas
materiais derivados vêm sendo bastante os valores de KM são diferentes. A análise desses
2
empregados . A etapa de imobilização pode ocorrer dados aponta para um mecanismo de inibição
via interação eletrostática ou via reações de competitiva, porém ainda não pode se afirmar se
acoplamento, sendo que no caso das reações de esta inibição é reversível. Para a Fig1B, após a
acoplamento pode-se evitar a lixiviação da enzima enzima imobilizada sobre os MWCNTs os valores
‒4
3
do transdutor . de KM e Vmax foram iguais a 4,11 10 M e 17,7
‒6 ‒1 ‒1
Um aspecto importante nos estudos com enzimas 10 M s , respectivamente. Esses valores são
são seus parâmetros cinéticos, embora pouco bastante diferentes em relação aos observados para
enzima livre. Assim, os valores de KM e Vmax
abordados em estudos com biossensores. Estes ‒7 ‒2
([Carbaril] = 1 10 M) foram iguais a 2,29 x 10
parâmetros podem fornecer informações ‒ 10 ‒1 ‒1
M e 5,78 x 10 M s , respectivamente. Os
interessantes, principalmente, no caso de estudos
valores são maiores do que os observados
com inibidores. Assim, o objetivo deste trabalho é
anteriormente, pois a enzima encontra-se
trazer novos entendimentos sobre os mecanismos imobilizada.
relacionados à inibição enzimática para posteriores
aplicações dos biossensores. Conclusões
Resultados e Discussão Esses resultados indicam que o processo de
acoplamento da AChE sobre os MWCNTs, altera a
O acoplamento da enzima sobre MWCNT foi
estrutura da enzima. Assim, os parâmetros cinéticos
realizado por meio de uma reação de acoplamento
apresentaram valores diferentes daqueles
utilizando-se EDC e NHS. Os estudos cinéticos
observados para enzima livre. A presença do
foram realizados utilizando o protocolo estabelecido
4
para a AChE . O inibidor escolhido para estes transdutor interfere no desempenho da catálise
estudos foi o carbaril. Para obtenção dos enzimática e podendo, por sua vez alterar os
parâmetros cinéticos foram construídos gráficos de mecanismos de reação da enzima na presença de
Lineweaver-Burk como mostrados na Figura 1. inibidores.

A B
Figura 1. Gráficos de Lineweaver-Burk para (A)
enzima AChE em solução na presença do substrato
(cloreto de acetiltiocolina) e na presença de carbaril.
Agradecimentos
Os autores agradecem ao CNPq, CAPES/PNPD e
a FAPESP.
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1
Tai, K.; Shen, T. Y.; Henchman, R. H.; Bourne, Y.; Marchot, P.;
McCammon, J. A. J. Am. Chem. Soc., 2002, 124, 6153. 2 Felhofer, J. L.;
3
Caranto, J. D.; Garcia, C. D. Langmuir. 2010, 26, 17178. Liu, G.; Lin,
Y. Anal. Chem. 2006, 78, 835. 4 Gambi, N.; Pasteris, A.; Fabbri, E.
Comp. Biochem. Physiol., Part C: Toxicol. Pharmacol. 2007, 145, 678.

34a Reunião Anual da Sociedade Brasileira de Química