PREPARAÇÃO E DISTRIBUIÇÃO DOS MEIOS DE CULTURA

PARA ENSAIOS MICROBIOLÓGICOS

Departamento: Controle de Qualidade Tipo: Instrução de Trabalho Número: IT – 04.002/I Página: 01/04
Setor: Controle Microbiológico Revisão: 08 Data da Aprovação: 26/05/2018
ORIGINAL EM VERMELHO
1. OBJETIVO
Estabelecer o procedimento para a preparação e distribuição em recipiente adequado, dos meios
de cultura empregados nos diversos ensaios microbiológicos realizados pelo Controle
Microbiológico, de forma a assegurar as condições de identificação e preservação dos mesmos.

2. RESPONSABILIDADE
 Analista de Controle Microbiológico

3. DISTRIBUIÇÃO
 Controle Microbiológico
 Garantia da Qualidade

4. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
 USP 37
 Conforme estabelecido pelo fabricante

5. PERIODICIDADE
 Preparação: Sempre que for necessário

6. PROCEDIMENTO
Nota: As instruções para o preparo dos meios de cultura seguem o estabelecido pelo fabricante.
6.1. Precauções:
 Certificar-se de que todo material empregado na preparação dos meios de cultura (becker,
balão de fundo chato ou similar, tubo de ensaio, espátula) está limpo e seco.
 Usar somente água para processo para fazer a dissolução do meio de cultura.
Nota: Coletar água para processo, no sistema de tratamento de água, após o filtro de 0,22 µ (filtro
microbiológico).

6.2. Pesagem:
 Calcular a quantidade de produto a ser pesado, levando em consideração as instruções
estabelecidas pelo fabricante, conforme descrito na tabela I.
 Fazer a pesagem do meio de cultura, em balança eletrônica, operando-a como indicado no
Manual de Operação de Equipamentos do Controle Microbiológico.
 Transferir o meio de cultura pesado para o recipiente de preparo, de forma suave, tendo
cuidado para não levantar o pó.

Elaborado por: Supervisão do Controle de Qualidade Visto: _________________ Aprovação Inicial:

Aprovado por: Coordenação da Garantia da Qualidade Visto: _________________ 05/07/2002
 ORIGINAL EM VERMELHO
Número: IT – 04.002/I Revisão: 08 Página: 02/04

TABELA I
QUANTIDADE VOLUME A
MEIO DE CULTURA OBSERVAÇÃO
A PESAR (g) PREPARAR (mL)
Aquecer; esterilizar
Ágar Mac Conkey (Ágar H) 50 1.000
121ºC/15 minutos
Adicionar 10 mL de
glicerina por litro de meio.
Ágar Cetrimide (Ágar N) 45,3 1.000
Aquecer e esterilizar
121ºC/15 minutos
Ágar XLD (Agar K) 55 1.000 Não autoclavar
Aquecer; esterilizar
121ºC/15 minutos.
Agar Baird Parker (Ágar O) 63 950 Adicionar 50 mL de
emulsão de gema de ovo
telurita.
Aquecer; esterilizar
Ágar Verde Brilhante (Ágar L) 58 1.000
121ºC/15 minutos
Ágar Sabouraud Aquecer; esterilizar
65 1.000
Dextrose – SAB (Ágar C) 121ºC/15 minutos
Ágar VRB
41,5 1.000 Não autoclavar
(Cristal Violeta) – (Ágar F)
Caldo Caseína Soja –TSB Aquecer; esterilizar
30 1.000
(Caldo A) 121ºC/15 minutos
Base de Caldo Tetrationato Adicionar 2 mL de iodo
46 1.000
(Caldo I) Não autoclavar
Caldo Mossel E E Colocar em banho-maria
45 1.000
(Caldo E) por 30 minutos
Ágar Caseína Soja (Ágar TSA) Aquecer; esterilizar
40 1.000
(Ágar B) 121ºC/15 minutos
Aquecer; esterilizar
Caldo Lactose (Caldo D) 13 1.000
121ºC/15 minutos
Aquecer; esterilizar
Caldo Mac Conkey (Caldo G) 35 1.000
121ºC/15 minutos
Agar Triplo Açúcar Ferro Aquecer; esterilizar 121º
65 1.000
(Ágar M) C / 15 minutos
Aquecer; esterilizar
Ágar Eosina (Ágar EMB) 36 1.000
121ºC/15 minutos
Aquecer; esterilizar
Ágar Columbia (Ágar P) 43 1.000
121ºC/15 minutos
Caldo Reforçado para Aquecer; esterilizar
38 1.000
Clostridium (Caldo Q) 121ºC/15 minutos

6.3. Preparação:
 Adicionar uma parte da quantidade recomendada de água purificada ao recipiente contendo o
meio de cultura pesado.
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 Mexer bem, com o auxílio de uma espátula, até que o pó forme uma massa homogênea. Aos
poucos, adicionar o restante da água purificada reservada, até que todo o conteúdo esteja
dissolvido, uniformemente.
 Quando recomendado, aquecer o meio de cultura em chapa aquecedora, sob agitação
constante.
 Distribuir o meio de cultura no recipiente de teste indicado, como segue:
- Meio Fluido (caldo): Distribuir cerca de 100 mL do meio preparado em cada tubo de ensaio.
- Meio Sólido (Ágar): Se for para distribuição posterior em placas de petri, deixar o meio de
cultura no próprio recipiente de preparo. Caso contrário, distribuir cerca de 20 mL em cada
placa de petri.
 Identificar as bandejas contendo os meios de cultura preparados com a etiqueta apropriada,
conforme indicado no anexo II.
 Esterilizar o meio de cultura preparado, conforme recomendado pelo fabricante.

6.4. Estocagem:
 Os meios de cultura preparados devem permanecer nas Câmaras quente ou fria (conforme
estabelecido para cada tipo de meio) em estantes identificadas como Quarentena até que os
resultados dos testes de esterilidade e fertilidade sejam satisfatórios.
 A partir da data de finalização dos testes, o meio de cultura pode ser utilizado desde que seja
aprovado pela supervisão ou Coordenação do Controle de Qualidade mediante visto na
identificação das bandejas. Após aprovação, os meios devem ser deslocados para estantes
identificadas como Aprovadas, localizadas nas próprias câmaras.
 O prazo de validade para cada meio de cultura preparado é de 30 dias.

6.5. Ações corretivas:

 O meio de cultura, cujo teste de fertilidade apresente resultados insatisfatórios deve ser
avaliado quanto à sua preparação e caso sejam descartadas todas as hipóteses de falhas nesta
fase, devolver o frasco utilizado para o fornecedor ou enviar para a área de descarte. Descartar
todos os meios de cultura já preparados do lote em questão.
 Os lotes de meios de cultura preparados para uso, que apresentem contaminação, não devem
ser utilizados nos ensaios microbiológicos.

7. REGISTRO
 Registrar a preparação do meio de cultura no “Registro de Controle de Preparação e Teste de
Fertilidade dos Meios de Cultura”, preenchendo-o com os dados solicitados, conforme indicado
no anexo I.
 Identificar as bandejas e/ou objetos contendo os meios de cultura preparados com a etiqueta de
identificação indicada no anexo II, preenchendo os campos referentes ao nome do meio,
controle do preparo, nome do fornecedor do meio de cultura, lote, preparação, validade e visto
do preparador.

8. ANEXOS
 Anexo I: Modelo do formulário “Registro de Controle de Preparação e Teste de Fertilidade dos
Meios de Cultura”
 Anexo II: Modelo da etiqueta “Identificação para Lotes de Meios de Cultura”

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Anexo I
REGISTRO DE CONTROLE DE PREPARAÇÃO E
TESTE DE FERTILIDADE DOS MEIOS DE CULTURA
MEIO DE CULTURA
TSA(Agar B) TSB(Caldo A) Thioglicolato(THIO) Sabouraud(Agar C)
Outros: ___________________________________________________________________
Fabricante: Lote: Validade:
PREPARAÇÃO
Controle do Preparo: Data: Validade:
Quantidade (mL): Preparador:
DADOS DO INÓCULO
Microorganismo:
Fabricante: ATCC:
Fabricação: Validade:
TESTE DE FERTILIDADE RESULTADO
( ) De acordo
CONTROLE NEGATIVO
( ) Em desacordo
Realizado em _____/_____/_____ no frasco do ( ) De acordo
CONTROLE POSITIVO
lote correspondente. ( ) Em desacordo
Leitura em _____/_____/_____ do frasco do lote correspondente
Observação:
Controle de Qualidade: Liberado em:

Anexo II

MEIOS DE CULTURA
THIO TSB TSA SAB
Òutros: ________________________________

_______________________________________

Controle do Preparo: __________

Fornecedor:____________________________
Lote: ______________Preparação: _________
Validade: __________ Nº Placas/Tubos: ____
Preparador:_____________
Teste de Fertilidade Teste de Esterilidade
Realizado em:_______ Realizado em:_______
( ) Em acordo ( ) Em acordo
( ) Em desacordo ( ) Em desacordo
Liberado em: Por:

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