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1 Escopo e Aplicação

Determinar açúcares redutores, em amostras de açúcar por volumetria.

Este método é aplicável à amostras de açúcar cristal, açúcar refinado granulado e açúcar VVHP
até 0,10 % m/m de açúcares redutores.

2 Resumo do Método

A amostra é dissolvida em água, adicionada solução alcalina de cobre e aquecida em banho de

água em ebulição.
O açúcar invertido reduz os íons cúpricos para óxido cuproso. Após resfriamento, os íons
cúpricos residuais são titulados com solução de EDTA, usando murexida como indicador.

3 Documentos Normativos

ICUM SA - M ethods Book. M ethod GS2/3-5 (2001). The Determination of Reducing Sugar in
White Sugar by the Knight and Allen EDTA M ethod. Published by Verlag Dr. Albert Bartens KG,
Berlin, Germany, 2005.

4 Documentos Complementares

− Consultar a Norma de Instrução Preparo de Amostras de Açúcar e Álcool – CTC-

LA-NI-002;
− Consultar a Norma de Instrução Especificação de Água para Fins Reagente – CTC-
LA-NI-006;
− Relatório de cálculo de incerteza da solução de EDTA 0,005 mol/L – C.I. – n° 41 - 04/05;
− Relatório de cálculo de incerteza da solução de Açúcar Invertido 10 g/L – C.I. – n° 37 -
04/05;
− Relatório de cálculo de incerteza da solução de Açúcar Invertido 0,5 g/L – C.I. – n° 38 -
04/05;
− Planilha de cálculo da reprodutibilidade interna – Doc. N°: 1013-R-1004;
− Planilha de cálculo da incerteza de medição - Doc. N°: 1013-I-1004;
− Cálculo de Incerteza de medição - Doc. N°: 1013-1004 .

5 S egurança

Observar as regras gerais de segurança indicadas em:

− Trabalhos em laboratório - Instruções de segurança;

− Normas de Procedimentos para trabalhos em laboratório;
− Instruções gerais de segurança.
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6 Equipamentos e materiais

− Balança semi-analítica, resolução 0,01 g;

− Balança Analítica, resolução 0,1 mg;
− Banho-maria que atenda a temperatura de ebulição da água;
− M ulti-Dosimat, resolução 0,01 mL;
− Balões Volumétricos de 50 mL;
− M esa agitadora;
− Vidrarias e utensílios comuns de laboratório.

7 Reagentes e S oluções

7.1 Água Deionizada (Tipo III)

7.2 S olução Alcalina de Cobre

− Pesar 25,0 g ± 0,1 g de carbonato de sódio anidro e dissolver em béquer de 250 mL com
aproximadamente 100 mL de água deionizada;
− Pesar 25,0 g ± 0,1 g de tartarato de sódio e potássio tetrahidratado e dissolver em béquer de 250
mL com aproximadamente 100 mL de água deionizada;
− Transferir estas soluções para balão volumétrico de 1000 mL contendo aproximadamente 400
mL de água deionizada e 40 mL de solução de hidróxido de sódio 1 mol/ L;
− Pesar 6,0 g ± 0,1 g de sulfato de cobre pentahidratado, dissolver em 100 mL de água deionizada
e transferir sob agitação contínua, quantitativamente, para o mesmo balão;
− Completar o volume com água deionizada e homogeneizar;
− Armazenar esta solução em frasco âmbar;
− Validade: quatro meses.

7.3 S olução de Hidróxido de S ódio 1 mol/L

− Pesar 4,0 g ± 0,1 g de hidróxido de sódio p.a. e dissolver em béquer de 250 mL com cerca de 30 a
50 mL de água deionizada;
− Transferir quantitativamente para balão volumétrico de 100 mL, completar o volume e
homogeneizar;
− Armazenar esta solução em frasco âmbar com tampa rosqueável;
− Validade: quatro meses.

7.4 S olução de EDTA 0,005 mol/ L

− Pesar 1,860 g ± 0,005 g de ácido etilenodiaminotetraacético sal dissódico di-hidratado (EDTA),

previamente seco em estufa a 70 °C – 80 °C por 2 horas, dissolver em balão volumétrico de
1000 mL com água deionizada;
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− Completar o volume e homogeneizar;

− Validade: dois meses.

7.5 Indicador Murexida

− Pesar 0,50 g ± 0,05 g de murexida, 0,20 g ± 0,05 g de azul de metileno e 40,0 g ± 0,5 g de cloreto
de sódio;
− Transferir para um almofariz de porcelana, triturar a mistura e armazenar em recipiente fechado
e dentro de dessecador;
− Validade: 12 meses.

7.6 S olução de Açúcar Invertido 10 g/L

- Pesar 9,500 g ± 0,005 g de sacarose e transferir para balão volumétrico de 1000 mL com auxílio
de aproximadamente 100 mL de água deionizada e agitar até dissolução da sacarose;
- Acrescentar 5 mL de ácido clorídrico conc. p.a. e homogeneizar;
- Tampar o balão e deixar em repouso por 3 dias à temperatura ambiente, para permitir completa
inversão da sacarose;
- Após completar os 3 dias, elevar o volume até próximo a 800 mL e agitar;
- Pesar aproximadamente 2,0 g de ácido benzóico em béquer e dissolver em 75 mL de água
deionizada aquecida (aproximadamente 70 °C) e transferir para o balão contendo a solução
invertida, completar o volume e homogeneizar;
- A adição de ácido benzóico assegura a preservação da solução;
- Armazenar em frasco âmbar;
- Validade: seis meses à temperatura ambiente.

7.7 S olução de Açúcar Invertido 0,5 g/L

- Diluir 10 mL da solução de açúcar invertido 10 g/L para balão volumétrico de 200 mL;
- Adicionar 3 a 4 gotas de solução indicadora de fenolftaleína 0,1 % e sob agitação, adicionar
lentamente solução de hidróxido de sódio 1 mol/ L até coloração rosa, a qual deverá ser
posteriormente eliminada pela adição de 1 ou 2 gotas de solução de ácido clorídrico 0,5 mol/ L;
- Completar o volume com água deionizada e homogeneizar;
- Validade: Consumir no mesmo dia do preparo.

7.8 S olução Indicadora de Fenolftaleina 0,1 % m/v

- Pesar aproximadamente 0,1 g de fenolftaleína em pó e transferir para balão volumétrico de 100

mL com auxílio de 55 mL de álcool etílico absoluto;
- Solubilizar e completar o volume com água deionizada;
- Armazenar em frasco conta-gotas;
- Validade: quatro meses.
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7.9 S olução de Ácido Clorídrico 0,5 mol/ L

- Transferir aproximadamente 4,3 mL de ácido clorídrico concentrado p.a. para balão volumétrico
de 100 mL, contendo aproximadamente 50 mL de água deionizada, agitar e completar o volume;
- Armazenar em frasco âmbar;
- Validade: três meses.

8 Curva de Calibração

- Preparar diretamente em balões volumétricos numerados de 1 a 6, soluções para cada

ponto da curva de calibração utilizando a tabela de diluições a seguir:

Tabela de diluições para a curva de calibração:

Balão Volume Volume de S acarose Conc.

n° S olução AR Água Açúcares
0,5 g/L Deionizada Redutores
(mL) (mL) (g) (% m/m)
1 5 0 5 0,05
2 4 1 5 0,04
3 3 2 5 0,03
4 2 3 5 0,02
5 1 4 5 0,01
6 0 5 5 0,00

− Homogeneizar cada balão até completa dissolução da sacarose;

− Adicionar 5 mL da solução alcalina de cobre e homogeneizar;
− Colocar os balões no banho-maria em ebulição e manter por 5 min ± 1 min;
Obs: O nível de água do banho maria deve ser o suficiente para cobrir a solução contida no balão
volumétrico.
− Retirar e resfriar imediatamente os balões em água corrente;
− Transferir cada solução para cápsula de porcelana, lavando o balão com pequenas porções de água
deionizada, recolhendo-as nas respectivas cápsulas numeradas de 1 a 6;
− Adicionar aproximadamente 0,1 g do indicador murexida em cada cápsula;
− Titular com solução de EDTA 0,005 mol/L, até mudança da cor verde para púrpura que é o
ponto final, anotar os volumes gastos no registro CTC-LA-RQ-095;
− Construir a curva de calibração a partir dos volumes gastos x concentração de açúcares redutores.
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8.1 Periodicidade

− A curva de calibração deve ser realizada bimestralmente.

8.2 Critério de Aceitação

A curva é considerada aceita se a porcentagem residual não apresentar resultados maiores que ± 10
%.

Concentraçã o Calculada - Concentraç ão Teórica

% Re sidual = x100
Concentraç ão Teórica

Se não atender ao critério de aceitação deve-se repetir o ensaio da curva de calibração.

9 Exemplo

Sejam os valores abaixo obtidos para aplicação na curva de calibração:

Cápsula Concentração de Volume gasto Conc. %
n° AR EDTA Calculada Residual
(% m/m) (mL) (% m/m)
1 0,05 1,40 0,049 -2,5
2 0,04 4,20 0,040 1,2
3 0,03 7,38 0,031 3,7
4 0,02 11,10 0,020 0,8
5 0,01 14,43 0,010 3,5
6 0,00 18,23 -0,001 0,0

- Calcular a equação de regressão linear a partir dos volumes gastos x concentrações de açúcares
redutores, no caso, tem-se:

a = - 0,0029
b = 0,0528
r = 0,9988

A equação será dada por:

Açúcares Redutores (% m/m) = (- 0,0029) x Volume gasto + 0,0528
Nota 1: r é o coeficiente de correlação entre os dados e é aceitável um valor de no mínimo 0,9950.

10 Procedimento

− Pesar e transferir para um balão volumétrico 5,0 g ± 0,1 g da amostra, acrescentar 5 mL de água
deionizada e agitar até completa dissolução;
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− Adicionar 5 mL de solução alcalina de cobre;

− Homogeneizar, colocar o balão em banho-maria em ebulição e manter por 5 min ± 1 min;
Obs: O nível de água do banho maria deve ser o suficiente para cobrir a solução contida no balão.
− Retirar e resfriar imediatamente o balão em água corrente;
− Transferir a solução do balão para cápsula de porcelana;
− Lavar o balão com pequenas porções de água, recolhendo-as na mesma cápsula;
− Adicionar aproximadamente 0,1 g do indicador murexida;
− Titular com solução de EDTA 0,005 mol/L, até mudança da cor verde para púrpura que é o
ponto final, anotar o volume gasto no registro CTC-LA-RQ-074.
Nota 2:
− Observar que uma coloração cinza aparece imediatamente antes do ponto final;
− Quando a cor púrpura é atingida, ela desaparece vagarosamente, devido a oxidação do óxido
cuproso presente, assim, o ponto final deve ser obtido tão rapidamente quanto possível;
− Caso o volume gasto for menor que o primeiro ponto da curva (concentração acima de 0,05 %
m/m) repetir a análise utilizando a diluição abaixo indicada:

Peso da Peso de Volume de Volume sol. Fator de

amostra sacarose água Alcalina de diluição
cobre
(g) (g) (mL)
(mL)

2,5 2,5 5 5 2
Obs: A sacarose deve ser a mesma utilizada na curva de calibração.
O resultado obtido nesta condição deve ser multiplicado por 2.

11 Cálculos

AR (% m/m) = a xV ± b

onde:

AR (%m/m) = Açúcares Redutores na amostra;

V = Volume gasto da solução de EDTA 0,005 mol/ L, em mL;
a = Coeficiente Angular, obtido na equação de regressão linear;
b = Intersecção linear, obtida na equação de regressão linear.

12 Exemplo

Sejam os valores abaixo utilizados:

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M assa de amostra utilizada (g) = 5,0

Volume gasto na titulação da amostra (mL) = 11,34

No caso, tem-se:
Açúcares Redutores (% m/m) = a x Volume gasto + b

AR (% m/m) = (– 0,0029) x 11,34 + 0,0528

AR (% m/m) = 0,02

13 Resultados

Expressar o resultado em % m/m de açúcares redutores, com duas decimais. Resultados abaixo de
0,01 % expressar como < 0,01 % m/m.

14 Confiabilidade Metrológica

A incerteza expandida de medição (Ue ) é de ± 0,01 % m/m (NC=95,45 % e k=2,65) para a faixa de
trabalho de 0,01 % m/m a 0,10 % m/m. O limite de detecção é de 0,01 % m/m e a
reprodutibilidade interna é 0,01 % m/m (NC=95,45%).

15 Referência Bibliográfica

Copersucar - Trabalhos em laboratório - Instruções de Segurança. Cadernos Copersucar, série

Segurança Agroindustrial nº 0019 - Centro de Tecnologia Copersucar, 2ª edição, março 1985, 11p;

Copersucar - Normas de Procedimento para trabalhos em laboratório - Divisão de Segurança

Agroindustrial e Laboratório Central de Análise do Centro de Tecnologia Copersucar - DEAC-SP,
maio 1985, 36p;

Copersucar - Instruções Gerais de Segurança. Normas da Diretoria da Copersucar, 2ª edição, 1982,

54p.
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16 Apêndice I - Fluxogramas de Procedimentos

Curva de Calibração

Adicionar aos balões de 1 a 6

Pesar e transferir para cada
Numer ar 6 balões 5 mL, 4 mL, 3 mL, 2 mL,
balão 5,0 g ± 0,1 g
volumétricos de 50 mL 1 mL e 0 mL da sol.
de sacarose
Aç. Red. 0,5 g/L

Adicionar a cada balão Adicionar aos balões de 1 a 6

Homogeneizar até dissolução 0 mL, 1 mL, 2mL, 3 mL,
5 mL da solução alcalina
da sacarose 4 mL e 5 mL
de cobre e homogeneizar
de água deionizada

Retirar e resfr iar

Colocar os balões no
Aguardar 5 min ± 1 min imediatamente os balões
banho em ebulição
em água corrente

Adicionar apr ox. 0,1 g do

Lavar os balões com pequenas Tr ansferir as soluções
indicador murexida em
porções de água recolhendo na dos balões para cápsulas
cada cápsula e
respectiva cápsula de porcelana
homogeneizar

Titular com a solução de

EDTA 0,005 mol/L até Determinar a equação de
Anotar os volumes gastos
mudança de cor verde Regressão Linear
para púrpura
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Técnica

Consultar procedimento Pesar e transferir para um balão Acrescentar 5 mL de

de oper./ Calib do volumétrico 5,0 g ± 0,1 g água deionizada
equipamento da amostr a

Adicionar ao balão
Colocar o balão no Homogeneizar até dissolução
5 mL da solução alcalina
banho em ebulição dos cr istais
de cobre e homogeneizar

Retirar e resfr iar Transferir a solução

Aguardar 5 min ± 1 min imediatamente o balão do balão para cápsula
em água corrente de porcelana

Titular com a solução de

Adicionar aprox. 0,1 g do Lavar o balão com pequenas
EDTA 0,005 mol/L até
indicador murexida na porções de água
mudança de cor ver de
cápsula e homogeneizar recolhendo na cápsula
par a púrpura

Calcular a concentr ação

de acúcares redutores
Anotar o volume gasto
utilizando a equação de
regressão linear