AVALIAÇÃO DO PODER ANTISSÉPTICO EM PRODUTOS

Departamento: Controle de Qualidade Tipo: Método de Análise Número: MA-04.008/C Página: 01/04
Setor: Controle Microbiológico Revisão: 02 Data da Aprovação: 24/04/2018
ORIGINAL EM VERMELHO
1. OBJETIVO
Estabelecer o procedimento para avaliação do poder antisséptico em produtos, de forma a garantir
a eficácia dos mesmos. Análise qualitativa.

2. RESPONSABILIDADE
 Analista de Controle Microbiológico

3. DISTRIBUIÇÃO
 Controle Microbiológico
 Garantia da Qualidade
4. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
 Guia ABC de Microbiologia, 1ª Edição, página 75.

5. ESPECIFICAÇÕES
Os produtos a serem testados devem atender às seguintes especificações:
ESPECIFICAÇÕES
Micro-organismo Halo de inibição
Staphylococcus aureus ATCC 6532 (CCCD S009) Min. 4 mm
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 (CCCD P004) Min. 4 mm
Salmonella enterica (typhimurium) ATCC 14028 (CCCD S004) Min. 4 mm

6. PERIDIOCIDADE
 Sempre que for necessário.

7. PROCEDIMENTO DE ANÁLISE
7.1. Preparação dos meios de cultura:
 Preparar os meios de cultura Ágar Caseína Soja e outro meio nutriente adequado (Caldo
Lactosado ou TSB), de acordo com o procedimento IT–04.002.

7.2. Preparação da vidraria necessária ao ensaio:

 Preparar a vidraria necessária ao ensaio, conforme descrito no procedimento IT-04.020.

7.4. Preparação dos repiques dos micro-organismos:

 Flambar a alça de platina em gota, na chama de um bico de bunsen, até que a mesma fique
incandescente. Aguardar alguns segundos para que a alça resfrie.
 Retirar o tampão do tubo de ensaio contendo a cultura a ser repicada (Staphylococcus aureus,
Pseudomonas aeruginosa e Salmonella enterica (typhimurium). Rapidamente, passar a boca do
tubo de ensaio pela chama do bico de bunsen.

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Aprovado por: Coordenação da Garantia da Qualidade Visto: _________________ 18/03/2011
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 Introduzir a alça de platina no tubo de ensaio contendo a cepa do micro-organismo, evitando

encostar a mesma pelas paredes do tubo.
 Tocar a gota da alça de platina na cultura do micro-organismo, fazendo um leve movimento de
arraste.
 Retirar a alça de platina do tubo de cultura e introduzir no tubo contendo 10 mL do meio
nutriente.
 Incubar o meio de cultura repicado na Câmara Quente, a 30 – 35ºC, por 24 horas (1º repique).
 Após o período de incubação, transferir 1 mL do meio repicado anteriormente (1º repique) para
outro tubo contendo 10 mL do meio Caldo Lactosado.
 Incubar o meio de cultura repicado na Câmara Quente, a 30 – 35ºC, por 24 horas (2º repique).
 Após o período de incubação, transferir 1 mL do meio repicado anteriormente (2º repique) para
outro tubo contendo 20 mL do meio nutriente.
 Incubar o meio de cultura repicado na Câmara Quente, a 30 – 35ºC, por 24 horas (3º repique).

7.5. Execução do teste:

 Transferir 1 mL do 3º repique para três tubos de ensaio distintos e previamente esterilizados
(uma para cada tipo de micro-organismo).
 Adicionar cerca de 40 mL do meio Ágar Caseína Soja, previamente fundido e resfriado a 45ºC
para cada tubo já contendo o respectivo micro-organismo. Agitar no agitador Vortex por 3
minutos até completa homogeneização.
 Transferir os conteúdos dos tubos de ensaio para placas de petri.
 Deixar as placas de petri em repouso, sobre a superfície da bancada, até que o meio
solidifique.
 Perfurar o ágar, utilizando um perfurador de aço inox com cerca de 1,5 cm de diâmetro em dois
pontos distintos.
 Remover a porção do ágar perfurado com o auxílio de uma pinça apropriada.
 Distribuir 0,5 mL do produto em teste.
 Incubar as placas de petri na Câmara Quente, a 30 – 35ºC, por 48 horas.

7.6. Leitura dos resultados:

 Após o período de incubação, fazer a leitura das placas de petri, medindo o halo de inibição,
em milímetros, com o auxílio de um paquímetro.
 Calcular a inibição, em milímetros, como segue:

Inibição (mm) = DH – DF
2

Onde: DH = Diâmetro do halo de inibição

DF = Diâmetro do furo

7.7. Descarte das placas:

 Descartar as placas utilizadas conforme descrito no procedimento IT-04.015.

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7.8. Ações corretivas:

 Em caso de resultado fora do especificado, emitir o formulário “Registro de Não Conformidade”,
preenchendo-o com os dados solicitados. Encaminhar o referido documento para a
Coordenação do Controle de Qualidade, para que sejam tomadas as providências cabíveis.

8. REGISTRO
 Emitir o formulário “Registro de Avaliação de Poder Antisséptico em Produto”, preenchendo-o
com os dados solicitados, conforme descrito no anexo I. Encaminhar para a Coordenação do
Controle de Qualidade para conferência e visto.

9. ANEXOS
 Anexo I: Modelo do formulário “Registro de Avaliação de Poder Antisséptico em Produto”

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Anexo I
REGISTRO DE AVALIAÇÃO DO PODER ANTISSÉPTICO EM PRODUTO

Produto:

Lote: Fabricação: Validade:

DADOS DOS MICRO-ORGANISMOS
Micro-organismo 1: Staphylococcus aureus
ATCC: 6538 CCCD: S009 Lote: Fornecedor:
Fabricação: Validade: Data da reconstituição:
Responsável:
Micro-organismo 2: Pseudomonas aeruginosa
ATCC: 9027 CCCD: P004 Lote: Fornecedor:
Fabricação: Validade: Data da reconstituição:
Responsável:
Micro-organismo 3: Salmonella enterica ( typhimurium)
ATCC: 14028 CCCD: S004 Lote: Fornecedor:
Fabricação: Validade: Data da reconstituição:
Responsável:
DADOS DO MEIO DE CULTURA UTILIZADO NO TESTE
Meio de Cultura: TSA – Agar Caseína Soja (Agar B) Fornecedor:
Lote: Fab: Val:
Data de Preparação de Meio de Cultura: Val: Responsável:
DADOS DO MEIO DE CULTURA UTILIZADO NO TESTE
Meio de Cultura: Caldo Lactosado (Caldo D) Fornecedor:
Lote: Fab: Val:
Data de Preparação de Meio de Cultura: Val: Responsável:
HALO DE INIBIÇÃO
MICRO-ORGANISMO ESPECIFICAÇÃO RESULTADO
Staphylococcus aureus Min. 4 mm
Pseudomonas aeruginosa Min. 4 mm
Salmonella enterica ( typhimurium) Min. 4 mm
Início: Término: Analista:

CONCLUSÃO

Aprovado Reprovado
REFERÊNCIAS: Análises conforme o procedimento MA-04.008
Data: Controle de Qualidade:

REG-241B.doc

Elaborado por: Supervisão do Controle de Qualidade Visto: _________________ Aprovação Inicial:

Aprovado por: Coordenação da Garantia da Qualidade Visto: _________________ 18/03/2011