Técnica analítica: TÉCNICA DO NÚMERO MAIS PROVÁVEL - NMP

Método Analítico: Contagem de bactérias do grupo coliformes totais ou coliformes a 35ºC, coliformes
termotolerantes ou coliformes a 45°C e Escherichia coli

Amostra Preparo de diluições decimais:

(10-1; 10-2; 10-3 outras)

Inocular 10 e 1mL da amostra Inoculação de 1mL de cada tubo de cada diluição

Caldo lactosado (com tubos de

Durham): três tubos de cada volume Incubação por 24 ± 2h a 35 ± 1,0ºC
e diluição “escolhidas”

Resultado (+): _______________ Resultado (-): Reincubar por mais 24 ± 2h

(nos tubos de Durham). a 35 ± 1,0ºC

Repique por meio de alça de

inoculação de cada tubo + em
um tubo com meio especifico

Resultado (+) Resultado (-):

descartar tubos
Repique por meio de alça de
Caldo lactosado verde inoculação de cada tubo + em
brilhante bíle a 2% um tubo com meio especifico
48 ± 3h a 35 ± 1,0ºC

Resultado (-):
descartar tubos

Resultado (+): _______________ (nos

tubos de Durham).
Presença de Coliformes Totais

Repique por meio de alça de inoculação de cada tubo + em um tubo

com meio especifico
CONSULTAR Anexo MB-AP.07 DE LEITURA DE
RESULTADOS (Resultado para Coliformes Totais ou a 35ºC)

Resultado (+): _______________ (nos tubos de

Caldo EC por 24 ± 2h/44,5 ± 0,2ºC Durham).
Presença de Coliformes Termotolerantes – segue conf
E.coli

CONSULTAR Anexo MB-AP.07 PARA

LEITURA DE RESULTADOS (Resultado para
Coliformes Termotolerantes ou 45ºC)
 Anexo
MB – AP.07

TABELA DO NÚMERO MAIS PROVÁVEL (NMP)

Número Mais Provável (NMP) e limite de confiança para combinações de resultados positivos
quando são usados três tubos com as seguintes diluições, 10-1, 10-2 e 10-3.
Combinação de tubos NMP por grama limite de 95%
positivos ou mL Inferior Superior
0,1 0,01 0,001
0-0-0 <3 - -
0-1-0 3 <1 17

1-0-0 4 <1 21
1-0-1 7 2 27
1-1-0 7 2 28
1-2-0 11 4 35

2-0-0 9 2 38
2-0-1 14 5 48
2-1-0 15 5 50
2-1-1 20 7 60
2-2-0 21 8 62

3-0-0 23 9 130
3-0-1 39 10 180
3-1-0 43 10 210
3-1-1 75 20 280
3-2-0 93 30 380
3-2-1 150 50 500
3-2-2 210 80 640
3-3-0 240 90 1400
3-3-1 460 100 2400
3-3-2 1100 300 4800
3-3-3 > 1100 - -
Referência: APHA, Compendium of Methods of the Microbiological Examination of Foods. 2001, p. 59.
 Técnica analítica: Contagem padrão em placas, com inoculação em profundidade (pour plate)
Método Analítico: CONTAGEM DE Bactérias mesófilas aeróbias

Fundir e manter a 45ºC em banho-

Amostra Preparo de diluições decimais: maria os tubos com Agar para
(10-1; 10-2; outras) contagem padrão (PCA)

Despejar
aproximadamente 12 a
Inocular 1mL de cada diluição 15ml em uma placa

Inocular 1mL da amostra Placas de Petri com Agar para contagem padrão
(duplicata da amostra e de cada diluição)

Homogeneizar fazendo movimentos circulares: 5

horário, 5 anti-horário e 5 em forma de 8.
Esperar solidificar

Inverter as placas e incubar por 48 ± 3h a 36±2ºC

Contagem das colônias.

Determinação da Média e Cálculo dos resultados (UFC/mL ou g ou cm²).
Ver anexo: MB-AP.04
Técnica analítica: Contagem padrão em placas, com inoculação em superfície (SPREAD PLATE)
Método Analítico: CONTAGEM DE BOLORES E LEVEDURAS

Preparo de diluições decimais:

Amostra
(10-1; 10-2; outras)
Inocular máximo 0,5mL da amostra Inocular máximo 0,5mL de cada diluição
OBS: Se necessário inocular 1ml – em placas distintas
este deve ser fracionado OBS: Se necessário inocular 1ml – este deve ser
fracionado

Placas de Petri com Agar para contagem padrão de bolores e

leveduras – Agar Dextrose Batata-ADB
(inocular amostra em duplicata de cada diluição)

Homogeneizar com a alça de

Drigalski fazendo movimentos
circulares até toda superfície secar

Incubar placas não invertidas por 03 a 07 dias a 25±1ºC

Contagem das colônias. Determinação da Média e Cálculo dos

resultados (UFC/mL ou g ou cm²).
Ver anexo: MB-AP.04
Técnica analítica: Contagem padrão em placas, com inoculação em superfície (SPREAD PLATE)
Método Analítico: Contagem de Staphylococcus aureus (Estafilococos coagulase positiva)

Preparo de diluições decimais:

Amostra
(10-1; 10-2; outras)
Inocular máximo 0,5mL da amostra Inocular máximo 0,5mL de cada diluição
OBS: Se necessário inocular 1ml – em placas distintas
este deve ser fracionado OBS: Se necessário inocular 1ml – este deve ser
fracionado

Placas de Petri com Agar para contagem de Staphylococcus

aureus – Agar Baird Parker-BP
(inocular amostra em duplicata de cada diluição)

Homogeneizar com a alça de

Drigalski fazendo movimentos
circulares até toda superfície secar

Inverver e incubar as placas por 24 a 48h a 36±1ºC

Contar colônias típicas e atípicas.

Repicar raiz quadrada ou 05 colônias para Caldo BHI e Agar nutriente

Incubar por 24h a 36±1ºC

Proceder teste bioquímico:
Teste de catalase
Teste de coagulase
Coloração de gram

Contagem das colônias. Determinação da Média e

Cálculo dos resultados (UFC/mL ou g ou cm²).
Técnica analítica: Contagem padrão em placas, com inoculação em superfície (SPREAD PLATE)
Método Analítico: Contagem de Bacillus cereus

Preparo de diluições decimais:

Amostra
(10-1; 10-2; outras)
Inocular máximo 0,5mL da amostra Inocular máximo 0,5mL de cada diluição
OBS: Se necessário inocular 1ml – em placas distintas
este deve ser fracionado OBS: Se necessário inocular 1ml – este deve ser
fracionado

Placas de Petri com Agar para contagem de Bacillus cereus–

Agar Vermelho de fenol, gema de ovo, polimixina (MYP)
(inocular amostra em duplicata de cada diluição)

Homogeneizar com a alça de

Drigalski fazendo movimentos
circulares até toda superfície secar

Inverver e incubar as placas por 24 h a 30±1ºC

Contar colônias típicas: Redondas; Planas secas; Aparência de vidro moído, translúcidas
Geralmente com bordos regulares, róseas e com halo de precipitação devido a ação da lecitinase.
Repicar raiz quadrada ou 05 colônias para Agar nutriente

Incubar por 24h a 30±1ºC

Proceder teste bioquímico:
Teste de gelatinase - 30±1ºC/24 h - HgCl2 halo transparente
Teste de redução de nitratos - 30±1ºC/24 horas - solução A + solução B - rósea avermelhada
Teste de fermentação de glicose - 30±1ºC/24 horas – amarelo - fermentação do açúcar
Teste de Voges-Proskauer - 30±1ºC/48 horas - KOH a 40% + cristais de
creatina=ACETILMETILCARBINOL

Contagem das colônias. Determinação da Média e

Cálculo dos resultados (UFC/mL ou g ou cm²).
 Técnica Analítica: Pesquisa Qualitativa de micro-organismo – ausência em 25g
Método analítico: PESQUISA DE SALMONELA

Amostra (25g ou mL)

Pre-enriquecimento

Solução Salina Peptonada Tamponada SSPT (225mL)

24h/35-37ºC
Inocular 0,1; 1 e 1mL

Enriquecimento seletivo
Caldo Rappaport-Vassiliadis (Rp); Caldo Tetrationato (TT); Caldo Selenito Cistina (SC)

Incubar por 24h a 36±1ºC.

Agar HE Agar XLD

(colônias verdes/da cor do meio com ou sem H2S) (colônias vermelhas com ou sem H2S)
Incubar 24h/37ºC Incubar 24h/37ºC

Agar nutriente (24h/37ºC)

Provas bioquímicas (Agar TSI, LIA e Uréia)

Incubar por 24h a 37ºC

Leitura de prova bioquímica

Teste sorológico
Coloração de gram

Resultado como PRESENÇA ou AUSENCIA em 25 g de amostra

 Anexo
MB-AP.04

CONTAGEM TOTAL DE MICRORGANISMOS

Exemplo: CONTAGEM DE AERÓBIOS MESÓFILOS, PSICROTRÓFILOS E

BOLORES E LEVEDURAS

Exemplos para o cálculo do número de UFC/ g ou mL na contagem em placas.

Número de colônias na placa

N° de Diluição
Exemplo Contagem (UFC/g ou mL)
placas 10-1 10-2 10-3
INC 230 21 230 + 250 = 2,4 x 104
1 2
INC 250 23 2 x 10-2
370 = 3,7 x 105 (est)
2 1 INC INC 370
10-3
8 x 65 = 5,2 x 105 (est)
3 1 INC INC 8/cm2
10-3
21 x 65= 1,4 x 105 (est)
4 1 INC INC 21/cm2
10-3
> 6.500 ou > 6,5 x 106 (est)
5 1 INC INC > 100/cm2
10-3
13 = 1,3 x 102 (est)
6 1 13 1 0
10-1
< 1 ou < 10 (est)
7 1 0 0 0
10-1
INC 228 28 228 + 240 + 28 + 26
2 x 10-2. 2 x 10-3 = 2,5
8 2
INC 240 26 x 10-4
2
INC 228 28 228 + 240 + 28 + 26
2 x 10-2 2 x 10-3 = 2,4
9 2
INC 240 23 x 10-4
2
INC 138 42 138 + 162 = 1,5 x 10-4
10 2
INC 162 30 2 x 10-2