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Revista de Ciências

Farmacêuticas
Básica e Aplicada Rev Ciênc Farm Básica Apl., 2015;36(1):43-49
Journal of Basic and Applied Pharmaceutical Sciences
ISSN 1808-4532

Análise microbiológica de xampus e cremes


condicionadores para uso infantil
Aline Marques Rosa¹, Marilene Rodrigues Chang¹, Fernanda Luiza Espinosa Spositto¹, Camila Gonzalez da Silva¹,
Luciane Miyagusku¹, Rubia Adriele Sversut¹, Marcos Serrou do Amaral², Nájla Mohamad Kassab*¹

1
Universidade Federal do Mato Grosso do Sul, Centro de Ciências Biológicas e da Saúde, Campo Grande, MS, Brasil.
2
Universidade Federal do Mato Grosso do Sul, Instituto de Física, Campo Grande, MS, Brasil.

RESUMO INTRODUÇÃO

O Brasil é um dos maiores mercados mundiais O Brasil é um dos maiores mercados mundiais
consumidores de cosméticos infantis. A utilização consumidores de cosméticos infantis. A utilização de
de produtos de higiene pessoal, como xampus, produtos de higiene pessoal, como xampus, condicionadores
condicionadores e sabonetes infantis, e de produtos de e sabonetes infantis, e de produtos de beleza já se incorporou
beleza já se incorporou ao dia a dia de muitas crianças. ao dia a dia de muitas crianças. Esse crescente interesse
Deste modo, é imprescindível que esses produtos vem chamando a atenção de pais, médicos e autoridades
estejam em consonância com os limites microbianos sanitárias quanto à segurança e qualidade desses produtos
estabelecidos pela Farmacopeia Brasileira (2010) e pela (ANVISA, 2013).
Resolução da Diretoria Colegiada/ANVISA Nº 481/99 A pele das crianças é mais fina do que a de adultos,
para serem comercializados. Neste trabalho, foi avaliada possui camada córnea reduzida, com menos pelos e,
a qualidade microbiológica de amostras de 10 xampus consequentemente, é mais sensível a agentes físicos e
e 10 cremes condicionadores de cabelos destinados químicos (Bárbara et al., 2007; Lund et al., 1999). Xampus
à higiene infantil. Dentre as amostras analisadas, são preparações químicas aquosas destinadas à higienização
verificou-se que, em 50% dos xampus e 30% dos cremes do couro cabeludo e do cabelo, que agem removendo a
condicionadores capilares, houve proliferação de micro- sujeira e retirando o excesso de oleosidade (Scacheti et
organismos, tais como bactérias aeróbias e fungos, al., 2011). Alguns também podem conter fármacos na sua
acima dos limites máximos permitidos. Embora não se composição e, assim, exercer função terapêutica (Bárbara
tenha encontrado micro-organismos patogênicos, essas et al., 2007; Barbosa & Silva, 1995).
percentagens indicam a necessidade do cumprimento Os xampus de uso infantil, isto é, destinados a
das Boas Práticas de Fabricação por parte das indústrias crianças de 0 a 9 anos (Ministério da Saúde, 2010) reduzem
farmacêuticas e cosméticas, para que os consumidores as tensões superficiais entre os cabelos e as sujidades, pois
possam adquirir produtos confiáveis, com qualidade contêm tensoativos catiônicos, aniônicos, anfóteros e não
adequada para manutenção da saúde e do bem-estar. iônicos. Entre os tensoativos utilizados nas preparações
Palavras-chave: Higiene infantil. Xampu. Creme cosméticas para esse público destaca-se o lauril éter
condicionador. Análise microbiológica. Controle de sulfo-succinato de sódio e coco II imidazolina, que são
qualidade. componentes não irritantes para as mucosas (Corrêa, 2012).
Cremes condicionadores capilares são emulsões do
tipo óleo/água, que têm como agente emulsivo primário
um tensoativo catiônico. Sua principal função é corrigir
modificações ocasionadas pelo uso do xampu sobre os
cabelos, no que diz respeito à carga elétrica (Ferreira,
2002). Esses produtos, condicionadores para cabelo,
também devem apresentar constituintes que não agridam a
pele dos usuários e não sejam irritantes oculares (Bárbara
et al., 2007).
Xampus e condicionadores capilares são cosméticos
Autor correspondente: Nájla Mohamad Kassab, Centro de Ciências de uso tópico não estéreis, que admitem limitado número de
Biológicas e da Saúde, Universidade Federal do Mato Grosso do Sul. e-mail:
nmkassab@gmail.com micro-organismos viáveis não patogênicos e determinam
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ausência de micro-organismos patogênico em 1 g ou 1 acima descrita (10-1 g/mL de amostra), diluições sucessivas
ml do produto, segundo a legislação brasileira (ANVISA, foram realizadas, empregando a mistura de salina estéril
1999). com Tween® 80 e obtendo-se, assim, as concentrações
Cargas microbianas elevadas podem facilmente de 10-2 e 10-3 g/mL. Essas soluções foram utilizadas para
alterar a estabilidade do produto, levando não somente a avaliação microbiológica. A Figura 1 apresenta desenho
sua deterioração, com mudanças físicas e químicas, mas esquemático das diluições realizadas.
também aumentando o risco potencial de causar infecção no
usuário (ANVISA, 2010; Medeiros et al., 2007; Pinto et al.,
2003), além de prejuízos financeiros e comprometimento
da imagem da empresa (Blume et al., 2007).
Muitos trabalhos relativos à análise microbiológica
de produtos farmacêuticos, cosméticos, matérias-primas
e embalagens para acondicionamento foram descritos
na literatura (Andrade et al., 2005; Blume et al., 2007;
Medeiros et al., 2007; Siva & Silva, 2011). Porém, não foi
encontrado nenhum estudo específico sobre a qualidade
microbiológica de produtos cosméticos ou de higiene para
uso infantil.
Assim, este trabalho teve por objetivo avaliar
a qualidade microbiológica de produtos cosméticos
destinados à higiene infantil (xampus e condicionadores
capilares), comercializados na cidade de Campo Grande –
MS, com o intuito de verificar se os mesmos encontram-se
em consonância com os limites microbianos estabelecidos Figura 1- Desenho esquemático das diluições realizadas.
pela 5ª edição da Farmacopeia Brasileira (F.Bras. 2010)
e pela RDC 481/99 (ANVISA, 1999) e, portanto, são
apropriados para o uso. Sem inativação do conservante
O procedimento foi realizado conforme descrito
MATERIAL E MÉTODOS previamente (Blume et al., 2007; Sironi, 2009;Yamamoto
et al., 2004), com algumas modificações. Em balança
Aquisição e processamento das amostras analítica, 1,0 g de cada amostra foi pesado e diluído com
Foram incluídos neste estudo 10 xampus e 10 9,0 mL de salina estéril. A partir da diluição 1:10 obteve-se
condicionadores capilares, designados como X1, X2, …, as diluições 1:100 e 1:1000. O esquema de preparação foi
X10 e C1, C2, …, C10, respectivamente, de diferentes semelhante ao ilustrado na Figura 1, à exceção do diluente,
marcas, adquiridos em lojas de cosméticos e drogarias da o qual não continha o Tween® 80, mas apenas salina
cidade de Campo Grande – MS. estéril. As diluições obtidas foram utilizadas para avaliação
As amostras de xampus e condicionadores foram microbiológica.
limpas externamente com algodão embebido em álcool
70°GL e, em seguida, homogeneizadas. A preparação das Meios de cultura
amostras para a pesquisa de micro-organismos foi realizada Foram utilizados para avaliação de possíveis
de duas formas: a primeira com a inativação do conservante, contaminantes microbiológicos os seguintes meios de
empregando-se polissorbato 80 (Teween® 80); e a segunda, cultura: ágar sangue, ágar sabouraud-dextrose 4%, ágar
sem inativação do conservante. Todo procedimento foi batata, ágar MacConkey, ágar manitol e ágar DNase. O
desenvolvido de forma asséptica em cabine de segurança ágar sangue oferece ótimas condições de crescimento para
biológica Classe II B2 em duplicata. a maioria dos micro-organismos, além de ser um meio que
permite detectar a presença de hemólise por Streptococcus
Com inativação do conservante spp e Staphylococcus spp.
Em balança analítica, foi pesado 1,0 g de cada Já o ágar sabouraud-dextrose, é um meio com
amostra (xampu e condicionador), e adicionado em nutrientes que favorecem o crescimento de diversos fungos
béqueres estéreis com capacidade volumétrica de 50 mL. leveduriformes e filamentosos, enquanto o ágar batata
Em cada béquer foram adicionados 8,8 mL de solução é útil para desenvolvimento do microcultivo de fungos
salina estéril e 0,2 mL de Tween® 80, o que resultou na objetivando identificá-los através da morfologia. O cristal
diluição 1:10 (ANVISA, 2010). violeta do ágar MacConkey inibe o crescimento de micro-
O conteúdo de cada béquer foi homogeneizado com organismos Gram positivos, o que justifica o emprego deste
auxílio de um bastão de vidro estéril e transferido para tubos ágar no isolamento de cocos e bacilos Gram negativos e
de ensaio cônicos estéreis, que foram submetidos à agitação na verificação da fermentação da lactose (ANVISA, 2004;
mecânica (vortex®) por um minuto. A partir da diluição Silva & Neufeld, 2006; Winn et al., 2008).

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Os ágares manitol e DNase são empregados para a Critérios para interpretação de dados
identificação de espécies de Staphylococcus e outros micro- Para a interpretação dos resultados obtidos
organismos de importância clínica (ANVISA, 2004; Silva na avaliação microbiológica, foram utilizados os
& Neufeld, 2006; Winn et al., 2008). parâmetros estabelecidos pela F. Bras. (2010) e pela
A preparação dos meios de cultura foi realizada RDC 481/99, bem como o critério de ausência de micro-
segundo recomendação sugerida pelos fabricantes e, antes organismos patogênicos, como Pseudomonas aeruginosa,
do uso, cada meio foi esterilizado em autoclave e transferido Staphylococcus aureus, coliformes totais e fecais por
para placas de petri estéreis com 90 x 15 mm. Para todos os grama ou mililitro de amostra. Os limites máximos
testes, foi realizado o controle de qualidade negativo, com recomendados pela F. Bras.(2010) para bactérias aeróbias
uma placa contendo cada meio isoladamente e uma placa e fungos (leveduras e/ou fungos filamentosos) devem ser
contendo apenas os diluentes, Teween®80 e solução salina 200 UFC/g e 20 UFC/g, respectivamente. Enquanto que,
estéril, foi incubada a 35°C para pesquisa de bactérias e 25 pela RDC 481/99, a contagem de micro-organismos totais
+ 1°C por 14 dias para pesquisa de fungos e leveduras. A aeróbios, incluindo bactérias e fungos, não podem ser
viabilidade dos ágares empregados no estudo foi verificada superior a 500 UFC/g.
previamente com micro-organismos adequados, com o
intuito de estabelecer o controle positivo. RESULTADOS

Avaliação microbiológica Os micro-organismos isolados nas amostras de


As análises microbiológicas foram realizadas xampu e creme condicionador de uso infantil e suas
segundo metodologia recomendada na F. Bras. (2010), unidades formadoras de colônia estão relacionados na
com pequenas modificações. Todo procedimento foi Tabela 1.
desenvolvido de forma asséptica em cabine de segurança
biológica Classe II B2, em duplicata. DISCUSSÃO
Para o isolamento de possíveis contaminantes
bacterianos as amostras de xampus e condicionadores Neste trabalho, as amostras foram preparadas com
foram semeadas em placas de ágar sangue base (Oxoid, e sem inativação dos conservantes. Conforme sugere a
Hampshire, England) e ágar MacConkey (Oxoid, literatura (F. Bras., 2010), na elaboração de amostras não
Hampshire, England) com alças calibradas (10 µL) estéreis para ensaios microbiológicos, deve-se proceder
descartáveis estéreis e incubadas a 32,5 ºC ± 2,5 °C durante com inativação do sistema conservante. A fim de verificar
3-5 dias. A identificação dos micro-organismos foi feita se seria possível observar crescimento microbiano, mesmo
por métodos convencionais padronizados (Koneman et al., na presença de conservantes, foram realizadas análises em
2008). amostras de xampus e condicionadores capilares também
O isolamento de fungos (filamentosos e leveduras) sem a inativação.
foi feito pela semeadura em superfície das amostras com Segundo a F. Bras. (2010), o Tween®80 pode ser
alças calibradas (10 µL) em placa de ágar Sabouraud utilizado para facilitar a dispersão de produtos pouco
Dextrose (Oxoid, Inglaterra), incubadas por até 15 dias a solúveis em água e também como inativante de conservantes,
23ºC ± 2,5 °C. A identificação desses micro-organismos tais como sais de amônio quaternário, fenóis e derivados e
foi feita segundo técnicas convencionais. Para leveduras: tensoativos anfóteros, comumente empregados em diversas
produção de tubo germinativo, microcultivo em ágar fubá formulações farmacêuticas, incluindo cosméticos (Pinto
suplementado com 1% de Tween® 80, teste de assimilação et al., 2000). A solução de salina estéril é um diluente
de carboidrato (auxanograma) e crescimento a 42°C. utilizado nos preparos dos inóculos, com o intuito de
Para fungos filamentosos, a identificação foi feita pela recolher o crescimento de bactérias e leveduras, mantendo
observação dos aspectos macroscópicos e microscópicos a viabilidade do micro-organismo por curto período de
(microcultivo em ágar batata), conforme previamente tempo (ANVISA, 2010).
descrito (Larone, 2011). Apesar de a literatura recomendar a utilização do
A contagem das unidades formadoras de colônias ágar caseína-soja, para isolamento de micro-organismos
(UFC) foi feita por meio de um contador eletrônico, modelo viáveis em produtos não estéreis (F. Bras.,2010), no presente
Q295B (Quimis, Brasil). As contagens foram realizadas em estudo foi utilizado o ágar sangue para a semeadura das
duplicata para cada diluição semeada (10-1, 10-2 e 10-3 g/ amostras porque este meio é mais rico e oferece ótimas
mL). Para o cálculo das UFC por grama (UFC/g) para cada condições de crescimento para a maioria dos micro-
diluição, utilizou-se a seguinte fórmula: organismos, tanto bactérias quanto leveduras (ANVISA,
UFC/g = N / (D.V), onde: N = média aritmética das 2004). Foi utilizado ainda o ágar MacConkey, por ser um
contagens de colônias na placa; D = diluição utilizada; e, V ágar seletivo para bactérias Gram negativas, como E. coli e
= volume da alça calibrada (10 µL). Dessa forma, obteve- Salmonella, investigadas (Konemann et al., 2008).
se para cada diluição um valor de UFC/g. E, na sequência, Nenhuma das amostras analisadas, com ou sem
calculou-se a média aritmética das UFC/g obtidas nas inativação de conservantes, apresentou crescimento de
placas que apresentaram crescimento. micro-organismos patogênicos. Todas cumpriram às

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Tabela 1: Identificação microbiana e unidades formadoras de colônia presentes nas amostras de xampu e creme condicionador
de uso infantil.
Amostra Sem Inativação de conservantes Com Inativação de conservantes

Total Total
M.O. UFC/g M.O. UFC/g
(UFC/g) (UFC/g)
X3 SCN 100 100 SCN 1000 1000
-- -- -- SCN 5000 5200a
X4 Bacillus sp 100
Corynebacterium sp 100
X5 Penicillium sp 100 100 Penicillium sp 1000 1000
200a
Cladosporium sp 100 100 SCN 100 400b
X6 100
Bacillus sp
Cladosporium sp 400
3000a
SCN 200 300 SCN 1000 400b

X8 Bacillus sp 1000
Bacillus sp 100 Rhodococcus sp 1000
Cladosporium sp 400
200a 2100a
SCN 200 SCN 2000
200b 1200b

C3 -- -- Corynebacterium sp 100
Cladosporium sp 100 Cladosporium sp 200
Acremonium sp 100 Acremonium sp 1000
C5 SCN 5000 5000 SCN 9000 9000
3000a
-- -- -- SCN 1000 100b
C7 100 100 2000
Bacillus sp Bacillus sp
Cladosporium sp 100
M.O.: micro-organismo; X: amostra de xampu; C: amostra de creme condicionador capilar; UFC: unidades formadoras de colônias; SCN: Staphylococcus coagulase negativa;
(--) ausente em 1,0 g de amostra; aContagem total de bactérias aeróbias; bContagem total de fungos filamentosos.

recomendações da F. Bras. (2010) e RDC 481/99. Entretanto, aos limites permitidos pela F. Bras. (2010) e pela RDC
50% dos xampus e 30% dos cremes condicionadores 481/99. Na amostra X4, observou-se eficiência total do
capilares apresentaram crescimento de micro-organismos sistema conservante na análise direta, isto é, sem inativação
não patogênicos, tais como bactérias aeróbias e fungos de conservantes. Nas demais amostras a eficiência dos
filamentos/leveduras (Tabela 1). conservantes foi parcial ou praticamente nula, como
Nas amostras de xampu em condições normais (sem observado na C5 para SCN.
inativação) foram isolados dois gêneros de bactérias – As bactérias do gênero Rhodococcus sp, encontradas
Staphylococcus coagulase negativa (SCN) e Bacillus sp – e na amostra X8, com a inativação do conservante, são
dois gêneros de fungos – Penicillium sp e Cladosporium capazes de degradar alcanos a partir de solos contaminados
sp. Nas amostras inativadas, seis gêneros distintos: quatro com petróleo (Brito et al., 2010). Nesse caso, infere-se a
de bactérias (SCN, Bacillus sp, Corynebacterium sp e hipótese de que esse micro-organismo seja contaminante
Rhodococcus sp) e dois fungos filamentosos (Penicillium da embalagem plástica, que advém do petróleo.
sp e Cladosporium sp). Entre os fungos encontrados, observou-se
Nas amostras de cremes condicionadores capilares predomínio de Cladosporium sp. Em todas as amostras
sem inativação do conservante foram isolados dois gêneros que apresentaram contaminação por fungos (X5, X6, X8,
de bactérias (SCN e Bacillus sp) e dois gêneros de fungos C3 e C7), as contagens ficaram acima dos limites máximos
(Cladosporium sp e Acremonium sp). Nas amostras recomendados pela F. BRAS. (2010). Entretanto, pela RDC
inativadas, cinco gêneros distintos: três de bactérias 481/99, apenas as amostras X5 e C3 apresentaram contagem
(SCN, Bacillus sp e Corynebacterium sp) e dois de fungos de Penicillium sp e Acremonium sp, respectivamente, acima
filamentosos (Cladosporium sp e Acremonium sp). do permitido quando na inativação de conservantes.
Entre as bactérias encontradas, observou-se Todos os fungos isolados são ubiquitários, isto é,
predomínio de SCN. Nas amostras que acusaram a contaminantes de ambiente que, em condições favoráveis,
presença de bactéria: X3, X4, X8, C3, C5 e C7, analisadas como pele não íntegra, indivíduos com baixa imunidade e
com inativação de conservantes, a contagem foi superior carga microbiana elevada, podem originar uma variedade

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de doenças com significância etiológica incerta. O fungo bebês abrirem os produtos de uso infantil para verificar a
Cladosporium sp é filamentoso oportunista, que pode textura ou aroma antes de comprá-los, fato este que pode
causar lesões purpúreas e cistos subcutâneos (Winn et al., aumentar a probabilidade de contaminação, tanto do
2008). Além disso, pode também causar infecções oculares conteúdo quanto da embalagem do produto. Vale ainda
e dérmicas (Brooks et al., 2012). Já o Penicillium sp, foi ressaltar que a incorporação de proteínas ou carboidratos
descrito como agente de ceratite, infecção de ouvido e em formulações cosméticas também pode estar relacionada
doenças disseminadas em pacientes com leucemia (Larone, com o aumento da carga microbiana (Pinto et al., 2003).
2011). Neste trabalho, as médias dos valores de UFC/g
No caso das amostras de xampus e de cremes de bactérias e fungos foram comparadas com os limites
condicionadores capilares que não apresentaram máximos estabelecidos pela F. Bras. (2010) e RDC 481/99.
crescimento microbiano, isso pode ocorrer devido a duas Porém, alguns autores não recomendam trabalhar com o
possibilidades: 1) os produtos foram elaborados sob limite máximo de micro-organismos permitidos, pois a
rigoroso controle de qualidade, tanto na seleção da matéria- quantidade de UFC, oriundas das embalagens somadas
prima, quanto no controle do processo; 2) a quantidade àquelas relativas ao conteúdo, poderiam em curto período
de conservante na formulação está além do permitido. O de tempo ultrapassar o limite permitido e, deste modo,
mesmo pode-se dizer com relação às amostras de cremes colocar em risco a qualidade final do produto (Fiorentino
condicionadores capilares, considerando que 70% delas et al., 2008).
não apontaram qualquer crescimento microbiano. O presente estudo demonstrou que há necessidade de
Segundo a ANVISA (2001), a função do conservante intensificar a fiscalização quanto à qualidade microbiológica
não se estende a compensar as más práticas de fabricação. de produtos destinados ao uso infantil, visto que 40% das
Muitos fabricantes o utilizam em excesso na tentativa de amostras analisadas foram reprovadas pelas F. Bras. (2010)
manter a carga microbiana dentro do limite estipulado, e/ou pela RDC 481/99.
desconsiderando a toxicidade decorrente dessa prática. Dessa forma, é necessário que as empresas de
Entretanto, a comprovação deste fato só pode ser feita cosméticos e indústrias farmacêuticas cumpram com
mediante a identificação e o doseamento das substâncias rigor as Boas Práticas de Fabricação, para que fabriquem
empregadas como conservante nessas formulações, que produtos com qualidade que satisfaçam as exigências
não foram objetivos deste trabalho. das legislações vigentes no país e resguardem a saúde do
Tanto as amostras de xampus quanto as amostras consumidor.
de condicionadores capilares analisados sem inativação
do sistema conservante, e que apresentaram resultados AGRADECIMENTOS
positivos para o crescimento microbiano, seja dentro ou
acima dos limites máximos de aceitabilidade, sugerem a Agradecemos à FUNDECT-MS e ao Laboratório
existência de biocarga acima do ideal e/ou falha do sistema de Pesquisas Microbiológicas do Centro de Ciências
conservante. Este fato pode abreviar a vida útil do produto Biológicas e da Saúde da UFMS.
e torná-lo impróprio para utilização, mesmo dentro do
prazo de validade rotulado. ABSTRACT
Matérias-primas em geral empregadas nas
formulações cosméticas são importantes fontes de Microbiological Analysis of Children’s Shampoos and
contaminação microbiana e por isso devem ser controladas Conditioners
(Pinto et al., 2003). Considerando que as formulações
cosméticas analisadas eram aquosas e que produtos Brazil is one of the largest commercial markets for
com maior atividade de água favorecem o crescimento children’s cosmetics. Personal-care products such as
microbiano, pode-se presumir que a água utilizada nas shampoos, conditioners and soaps for infants use, as
formulações ou as condições de higiene do local da well as beauty products are used daily by many children.
produção ou do operário constituíram prováveis fontes de Therefore, it is essential that these products are within
contaminação. Segundo Andrade e colaboradores (2005), microbial limits established by the most recent Brazilian
os limites de aceitação para bactérias heterotróficas para Pharmacopoeia and the Brazilian Health Surveillance
água com fins farmacêuticos não devem ser maiores que Agency Collegiate Board of Directors Resolution Nº
102 UFC/mL. 481/99. This study evaluated the microbiological quality
Outra possível causa para a contaminação of samples of 10 shampoos and 10 conditioners intended
microbiana encontrada nas amostras positivas seria for infant hygiene. Of the samples analyzed, 50% of
a forma de comercialização dos produtos, que, shampoos and 30% of conditioners showed microbial
colocados em prateleiras, estão expostos à poeira e a growth, such as aerobic bacteria and molds/yeasts,
outros contaminantes ambientais. Um agravante é que, over the limits allowed. Although pathogenic micro-
diferente dos medicamentos, as embalagens de xampus e organisms were not found, these proportions indicate
condicionadores capilares normalmente não são lacradas. the need for pharmaceutical and cosmetic companies
É prática comum de pais ou responsáveis por crianças ou and businesses to comply with Good Manufacturing

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Recebido em 17 de fevereiro de 2014


Aceito em 6 de novembro de 2014

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