Protocolo para Análise de Bactérias em Folhas

Materiais e Equipamentos Necessários:

1 dia

 Amostras de folhas
 Gral com pistilo ( 05)
 Hipoclorito
 Água destilada
 Vasilhas para colocar de molho as folhas
 Pipetas pauster
 Meios de cultura bacteriana Muller Hinton
 Incubadora bacteriana

2 dia

 Meio de cultura MacConkey

 Meio de cultura Sabourad
 Microscópio
 Lâminas e lamínulas estéreis
 Tubos de ensaio e placas de Petri estéreis
 Swab
 Solução salina estéril (0,9%)

Procedimento:

Preparação de Amostras 1 dia:

Desinfecção da Superfície: Mergulhe 02 folhas em hipoclorito ( 10 gotas )

por 10 minutos para desinfetar a superfície. Enxágue com água destilada
estéril.

Isolamento e Cultura:

3. Preparação da Amostra:
Experimento 1 dia:

1. Pegue o Gral com pistilo e coloque 02 folhas sem lavar e um pouco

de água, macere até obter uma pasta com água, reserve.
2. Pegue o caldo Mueller Hinton, abra atrás da chama a adicione a
água obtida a partir da maceração com a folha sem lavar. Anote no
tubo seu nome e escreva folha sem lavar.
3. Pegue o Gral com pistilo e coloque 02 folhas LAVADAS e um pouco
de água, macere até obter uma pasta com água, reserve.
4. Pegue o caldo Mueller Hinton, abra atrás da chama a adicione a
água obtida a partir da maceração com a folha LAVADA. Anote no
tubo seu nome e escreva folha sem lavar.
5. Coloque na incubadora de 24 a 48 horas.

Experimento 2 dia.

1. Pegue o caldo Muller Hinton da amostra sem lavar e proceda da

seguinte maneira.

Ligue o bico de Bunsen

Abra o tubo Mueller Hinton atrás da chama
Flambe a alça bacteriológica e após pegue um inóculo bacteriano do
tubo.
Após divida a placa de MacConkey no meio e plaqueie por
esgotamento, conforme a figura abaixo:

Repita o mesmo procedimento acima para o meio Sabourad

Incubação: Incube as placas ou tubos de ensaio a uma temperatura

adequada para o crescimento bacteriano (geralmente em torno de 37°C).

Identificação e Análise:
6. Isolamento de Colônias: Após o crescimento bacteriano, isole colônias
individuais em placas para análise.
Coloração de Gram: Realize a coloração de Gram para classificação inicial
das bactérias.
Microscopia: Examine as colônias sob o microscópio para características
morfológicas.
Testes Bioquímicos: Realize testes bioquímicos (catalase, oxidase,
fermentação de açúcares, etc.) para identificação bacteriana.

Protocolo para análise microbiano em frutas

Materiais

 Frutas
 Salina estéril
 Swab
 Meio de cultura SS
 Sabourad
 Hipoclorito

Experimento:

1) Coloque as frutas de molho no hipoclorito ( 10 gotas ) por 10

minutos.
2) As frutas não lavadas, processe da seguinte maneira:
Ligue o bico de Bunsen
Abra a salina e mergulhe o swab, após passe o swab na fruta.
Após divida a placa de SS e agar Sabourad no meio e plaqueie por
esgotamento, conforme a figura abaixo:
 3) Após os 10 minutos, pegue as frutas que estavam na água, lave em
água corrente e processe da seguinte maneira:

Ligue o bico de Bunsen

Abra a salina e mergulhe o swab, após passe o swab na fruta.
Após divida a placa de SS e agar Sabourad no meio e plaqueie por
esgotamento, conforme a figura abaixo:

Referência:

ASM (American Society for Microbiology). Manual de Microbiologia Ambiental. 2ª ed.

Washington, D.C.: ASM Press, 2007.