UNIVERSIDADE ESTADUAL DO NORTE FLUMINENSE DARCY RIBEIRO

CURSO DE GRADUAÇÃO: CIÊNCIAS BIOLÓGICAS

DISCIPLINA: ANÁLISES CLÍNICAS

AULA PRÁTICA (RELATÓRIO): MICROBIOLOGIA CLÍNICA

SOPHIA MENEZES DE AZEVEDO

CAMPOS DOS GOYTACAZES

2021
1. PREPARO DE MEIO DE CULTURA
 Materiais utilizados:
- Placa de Petri esterilizada;
- Swab estéril;
- Becker;
- Bastão de vidro.
 Utilizar 25 mL de água para 0,59 g de meio de cultura (realizar regra de três
de acordo com a quantidade requerida). Adicionar o meio de cultura e a água
em um Becker. Homogeneizar a solução com o bastão de vidro e ligar a placa
aquecedora para que o meio de cultura ferva. Esse procedimento leva
aproximadamente 40min. O meio de cultura em seguida deve ser
autoclavado. Colocar o meio de cultura autoclavado na placa de Petri. Para
coletar a amostrar retirar o swab da embalagem e passá-lo na região
requerida. Fazer movimentos leves da esquerda para a direita com o swab na
placa de Petri. Após semeada, levar a placa na estufa. Após 48h retirar a
placa e levar a placa para um contador de colônias ou fazer uma lâmina e
levar ao microscópio.

2. TÉCNICAS DE SEMEADURA

 Coletar o material utilizando um cotonete e realizar movimentos de zigue-

zague no meio de cultura.
 Coletar o material utilizando um cotonete e realizar movimentos de zigue-
zague até a metade da placa, girar a placa em 90 º e continuar com os
movimentos de zigue-zague até metade da placa. Novamente girar a placa
em 90 º e continuar com os movimentos de zigue-zague.

3. COLORAÇÃO DE GRAM
 Materiais utilizados:
- Bico de Bunsen
- Alça de platina
- Lâmina de vidro identificada
- Amostra
- Suporte
 - Pipeta com água destilada
- Violeta genciana
- Lugol
- Álcool
- Acetona
- Fucsina simples
- Água destilada
 Primeiramente flambar a ponta da alça de platina no bico de Bunsen. Deixar
esfriar e em seguida abrir o tubo de ensaio com a amostrar. Flambar a ponta
do tubo de ensaio. Colocar a ponta da alça dentro do tubo e retirar a amostrar
com a alça. Pegar a lâmina que inicialmente foi pipetada com água destilada,
espalhar com a alça na lâmina. Passar a lâmina algumas vezes no fogo
rapidamente para evaporar a água destilada e secar a amostra.
 Colocar as lâminas em um suporte. Colocar a violeta genciana nas lâminas e
deixar por 1min. Retirar o excesso de violeta genciana. Em seguida adicionar
o lugol e deixar por 1min. Retirar o excesso de lugol. Lavar com álcool e
acetona retirando o excesso de corante. Lavar com água destilada. Adicionar
a fucsina simples e deixar 45 segundos na lâmina. Retirar o excesso de
fucsina. Lavar com água destilada. Deixar as lâminas secarem e levar ao
microscópio.

4. COLORAÇÃO DE ZIEHL NEELSEN

 Materiais utilizados:
- Pinça
- Suporte para colocar as lâminas
- Corante (Fucsina fenicada, azul de metileno e descorante).
- Fogo
 Adicionar fucsina fenicada nas lâminas. Passar a chama embaixo das lâminas
por 5min para que a fucsina penetre nos bacilos. Pegar as lâminas com a
pinça e lavar em água corrente para tirar o excesso de fucsina. Voltar com as
lâminas para o suporte e aplicar o descorante para romper a parede celular
das bactérias que não são resistentes ao álcool ácido. Retirar o excesso na
água corrente. Adicionar o azul de metileno e esperar por 1min. Retirar o
excesso na água corrente. Colocar as lâminas na estufa.
5. ANTIBIOGRAMA
 Primeiramente colocar em um tubo de 3 a 5 ml de salina e colocar para
autoclavar. Quando esfriar fazer a suspensão utilizando a alça estéril e
pegando a amostra no tubo. Em seguida identificar a placa de Petri e pegar
um swab. Mergulhar o swab na amostra de suspensão salina e retirar o swab
e tirar o excesso, após isso realizar o semeio. Escolher os antibióticos de
acordo com a classificação da bactéria utilizada. Pegar com a pinça o
anitibiótico e colocar na placa. Em seguida flambar a pinça e fazer o mesmo
com os próximos. Colocar a placa na estufa e após 24h retirar a placa para
fazer a leitura do antibiograma.

6. TESTE DE CATALASE
 Colocar 0,5 ml de água oxigenada e colocar em dois tubos. Utilizar uma alça
descartável e recolher um pouco de amostra da colônia de uma placa e
colocar a alça dentro do tubo com água oxigenada. Observar se apresentará
alguma efervescência. Se apresentar, a catalase está presente.
 Outro método utiliza-se uma lâmina e pegar uma gota com a pipeta de água
oxigenada e aplicar na lâmina. Pegar com uma alça descartável uma
amostra da colônia na placa de Petri e colocar na gota de água oxigenada.
Se houver efervescência a catalase está presente.