Diferenciação celular

e (micro)Ambiente:

Teratogénios

Raquel P. Andrade

O EMBRIÃO:
Modelo por Excelência de DIFERENCIAÇÃO CELULAR

2
 O EMBRIÃO:
Modelo por Excelência de DIFERENCIAÇÃO CELULAR

Tempo

Proliferação
Diferenciação

Local

- Malformações Congénitas

- Cancro

4
 2 semanas
Perdem-se ~60% Perdem-se ~60%

Causas
Nascem apenas ~16%
Internas: Genéticas (20-25%)
Com malformações ~3%
Externas: Maternas/Ambientais
(10-15%)

The amazing thing about mammalian development is not Desconhecidas (60-70%)

that it sometimes goes wrong, but that it ever succeeds.”
National Research Council. 2000. Scientific Frontiers in Developmental
Veronica Van Heyningen (2000) Toxicology and Risk Assessment. Washington, DC: The National Academies
Press. https://doi.org/10.17226/9871

Teratologia - “estudo do monstro” estudo da contribuição ambiental

para alterações ao desenvolvimento
(do grego τερατολογία, composto de τερατο- «monstro» e
-λογία «estudo»)
pré-natal

Teratogénio – Agente externo causador de malformações congénitas

6
 Princípios da Teratologia (Wilson JG, 1977)
1. A suscetibilidade à teratogénese depende do genótipo do embrião e da
maneira como interage com o ambiente;

2. A suscetibilidade à teratogénese varia com o estadio de desenvolvimento em

que se encontra o embrião no momento da exposição ao agente teratogénico;

3. O número e severidade das manifestações resultantes do desenvolvimento

anormal dependem da dose e duração de exposição ao agente teratogénico;

4. Os agentes teratogénicos atuam através de mecanismos específicos sobre as

células e tecidos em desenvolvimento, desencadeando uma sequência de
eventos patogénicos;

5. O acesso do agente teratogénico aos tecidos em desenvolvimento depende da

própria natureza do agente;

6. O desenvolvimento anormal do embrião pode resultar em quatro tipos de

manifestações: malformação anatómica, défice funcional, atraso de
crescimento e morte.

Periodos de Susceptibilidade Embrionária à acção de teratogénios

Gilbert, Developmental Biology, Sinauer Eds. 2015

8
 Periodos de Susceptibilidade Embrionária à acção de teratogénios

“All or nothing”

Morte Recuperação total

(toti-/pluripotência)

O que acontece no Periodo

Embrionário que torna esta fase
de desenvolvimento tão
susceptível à acção de
teratogénios?

- Diferenciação Celular

Gastrulação
Neurulação
Segmentação
Organogénese
....

Lagman’s Medical Embryology

10
 Embrião Humano CS7

11

Gastrulação
Formação dos três folhetos embrionários:
Ectoderme, Mesoderme e Endoderme

Embrião Humano CS7

Assim que a linha primitiva se forma, as

células do epiblasto começam a migrar
através dela e para o blastocélio.

As células migram individualmente,

depois de sofrerem uma
TRANSIÇÃO EPITÉLIO-MESÊNQUIMA.

12
 Transição
Epitélio-Mesênquima

N-cadherin

13

Gastrulação
Formação dos três folhetos embrionários:
Ectoderme, Mesoderme e Endoderme

Anterior Posterior

A Gastrulação envolve extensa Proliferação e Migração Celular

14
 Gastrulação
Formação dos três folhetos embrionários:
Ectoderme, Mesoderme e Endoderme

Embrião Humano CS7

Assim que a linha primitiva se forma, as

células do epiblasto começam a migrar
através dela e para o blastocélio.

As células migram individualmente,

depois de sofrerem uma
TRANSIÇÃO EPITÉLIO-MESÊNQUIMA.

Embrião de Galinha 24-48h

15

CS 14 – 5ª semana
CS10 – 4ª semana

Carnegie Stage 9 (CS9) – 3ª semana

Hill, M.A. (2021, April 26) Embryology Carnegie stage 10. Retrieved from https://embryology.med.unsw.edu.au

16
 Gastrulação
“Não é o nascimento, o casamento, ou a morte, mas a gastrulação, que é
verdadeiramente o momento mais importante da tua vida.”
Lewis Wolpert

Durante a Gastrulação e restante Período Embrionário, as

células são muito susceptíveis à acção de Teratogénios.

Teratogénio – Agente externo causador de malformações congénitas

A acção de um Teratogénio depende de:

 Dose e duração
 Genótipo do embrião
 Periodo do desenvolvimento embrionário
 Natureza do agente

17

Gilbert, Developmental Biology, Sinauer Eds. 2015

18
 Síndrome do alcoolismo fetal (SAF)

• Crescimento reduzido

• Malformações cranio-faciais

• Deficiência Mental

 Não há dose “segura” de álcool

 Desde a fertilização
 Gravidez não planeada ~50%

Afecta ~5% população ocidental

19

Síndrome do alcoolismo fetal (SAF)

Holoprosencefalia
Projecções neuronais deficientes
Tamanho reduzido do cérebro
com holoprosencefalia

20
 Síndrome do alcoolismo fetal (SAF)

Modelos Animais:
Ratinho exposto a etanol
durante a gastrulação

 Bolbos olfativos
ausentes

 hemisférios cerebrais
fundidos
(holoprosencefalia)

21

Síndrome do alcoolismo fetal (SAF)

• Crescimento reduzido

• Malformações cranio-faciais

• Deficiência Mental –

- holoprosencefalia

O que correu
mal??
22
 Lírios e Ciclopes
 1950s – pastores de
ovelhas em Idaho, EUA
reportaram um elevado
número de malformações
congénitas

 Em épocas de seca as
ovelhas pastavam a
maiores altitudes

 Lírios de milho

23

Ciclopes
 Os lírios de milho continham
um veneno, mais tarde
denominado Ciclopamina
(por razões óbvias)

 Quando as ovelhas prenhas

comiam os lírios, os seus
descendentes apresentavam
malformações, sendo os
ciclopes os mais notórios

 Décadas sem explicações

conclusivas

24
 Hedgehog
 1970s - Volhard e
Wieschaus descobriram
50 genes essenciais para
o desenvolvimento da
mosca da fruta (1995
Nobel Prize)

 Um gene em particular,
quando mutado, gerava
moscas com espículas no
abdomen

 O gene Hedgehog

25

Hedgehog

 1993 – Cientistas em
Harvard discobriram
um gene homólogo em
mamíferos

 Mutações causavam
múltiplas
malformações, desde
muito ligeiras a ciclopes

26
 Via de sinalização celular Sonic Hedgehog

colesterol

Ligando – SHH

Receptores membranares:

Patched, reprime Smoothened

Efector nuclear: Gli

Li et al., Lab Invest 2007

27

Holoprosencefalia (resultantes de mutações em genes da via SHH)

(alobar, semilobar, microformas)

28
 Morfogénese Facial Embrionária

Migração das células da crista neural através dos arcos

faríngeos para a formação do crânio e face

29

30
 A via de SHH participa na Morfogénese Facial e no
Desenvolvimento Cerebral

Maryline and Rijli, Development 2010

31

A via de SHH participa na Morfogénese Facial e no

Desenvolvimento Cerebral

wt Inibição Shh

32
 A via de SHH participa na Morfogénese Facial e no
Desenvolvimento Cerebral

Geng and Oliver, 2009

Tempo

33

Perturbação da via de sinalização SHH

Exposição a ciclopamina

34
 Via de sinalização celular Sonic Hedgehog

colesterol Ciclopamina

Li et al., Lab Invest 2007

35

Mutações em genes da via SHH

Exposição a ciclopamina SAF

36
 Via de sinalização celular Sonic Hedgehog

colesterol Ciclopamina

Álcool

Li et al., Lab Invest 2007

37

Síndrome do alcoolismo fetal (SAF)

• Inibição da proliferação das células da crista neural

• Diferenciação precoce em cartilagem

Smith et al. BIRTH DEFECTS RESEARCH (PART C) 102:210–220 (2014)

38
 Síndrome do alcoolismo fetal (SAF)

• Inibição da proliferação das células da crista neural

• Diferenciação precoce em cartilagem
• Apoptose das células da crista neural

Smith et al. BIRTH DEFECTS RESEARCH (PART C) 102:210–220 (2014)

39

Síndrome do alcoolismo fetal (SAF)

• Inibição da proliferação das células da crista neural

• Diferenciação precoce em cartilagem
• Apoptose das células da crista neural

A acção do Álcool depende de:

 Dose e duração
 Genótipo do embrião
 Periodo do desenvolvimento embrionário

40
 Agente
Teratogénico – Carcinogénico

Malformações Congénitas Cancro

Defeitos na:

Organização de tecidos
Proliferação
Diferenciação
Comunicação intercelular

41

Cancro: uma doença do desenvolvimento

Hanahan and Weinberg, Cell 2011

42
 Cancro: uma doença do desenvolvimento

Carcinogénese

Proliferação Diferenciação
celular Celular

Desenvolvimento

43

Células cancerígenas adquirem propriedades indistinguíveis de

células embrionárias quando colocadas no micro-ambiente certo!!

metastatic
human
melanoma
cells

metastatic human melanoma cells form normal migratory chains

(B) and follow the neural crest migration roots to integrate into
facial cartilage (C) and sympathetic ganglia (D)

44
 Terapias Cancro:

Destruir as células tumorais

Diferenciar as células
tumorais

45

Sinalização Hedgehog no Embrião... ...até ao Adulto

SHH SHH

Proliferação Diferenciação

46
 Sinalização Hedgehog no Embrião... ...até ao Adulto

Diferenciação

Proliferação

Shh
Desregulação de Ptch
Smo

47

Gorlin syndrome (Basal Cell Nevus Syndrome)

- alteração genética caracterizada por anomalias no desenvolvimento e
tendência para desenvolver carcinomas de células basais, meduloblastomas e outras
neoplasias.

Mutações no gene PTCH1

Alívio da repressão de Smoothened

Via Shh contitutivamente activa

Proliferação descontrolada

48
 Eureka!
 1998 – Phil Beachy (JHU) lembrou-
se das ovelhas esquisitas que se
encontraram nos anos 50’s em
Idaho

 Questionou-se se a Ciclopamina
poderia ser usada para modular a
via de sinalização Shh

49

Via de sinalização celular Sonic Hedgehog

colesterol Ciclopamina

50
 Cyclopamine e GDC-0449
 Cyclopamine inibe a sinalização hedgehog ao ligar-se a
Smoothened

 GDC-0449 é uma pequena molécula que atua como um

inibidor específico da via de sinalização hedgehog; é mais
potente e possui propriedades farmacológicas mais
favoráveis do que a Cyclopamine

 GDC-0449 demonstrou atividade anti-tumoral em modelos de

meduloblastoma em ratinho e em modelos celulares
humanos de cancro colorectal e pancreático

51

INHIBITION OF THE HEDGEHOG PATHWAY IN

ADVANCED BASAL-CELL CARCINOMA
DANIEL D. VON HOFF, M.D., PATRICIA M. LORUSSO, D.O., CHARLES M. RUDIN, M.D., PH.D., JOSINA C. REDDY,
M.D., PH.D., ROBERT L. YAUCH, PH.D., RAOUL TIBES, M.D., GLEN J. WEISS, M.D., MITESH J. BORAD, M.D.,
CHRISTINE L. HANN, M.D., PH.D., JULIE R. BRAHMER, M.D., HOWARD M. MACKEY, PH.D., BERTRAM L. LUM,
PHARM.D., WALTER C. DARBONNE, M.S., JAMES C. MARSTERS, JR., PH.D., FREDERIC J. DE SAUVAGE, PH.D.,
AND JENNIFER A. LOW, M.D., PH.D.

September 2, 2009

52
 Results

53

Results
 18 Metastatic tumors – 50% responded
 15 Locally advanced tumors – 60%
responded

54
 Cancro: uma doença do desenvolvimento

Carcinogénese

Proliferação Diferenciação
celular Celular

Desenvolvimento

Tratamento com Cyclopamine/GDC-0449: modulação do Microambiente Celular

55

Agro-Pecuária
Da Investigação Fundamental
à Clínica:
…uma história improvável!

Biologia do
Desenvolvimento
Embrionário

Medicina /
Oncobiologia

Lee et al, J Agr Food Chem 2014

56