FISIOLOGIA DO CICLO ESTRAL Prof.

Paulo Bayard Dias Gonalves Universidade Federal de Santa Maria Centro de Cincias Rurais Departamento de Clnica de Grandes Animais Laboratrio de Biotecnologia e Reproduo Animal 97105-900 Santa Maria, RS

INTRODUO O conhecimento do ciclo estral e sua regulao fundamental para o Mdico Veterinrio desempenhar suas atividades em reproduo animal, tanto na clnica como na implementao de biotecnologias e manejos reprodutivos adequados. Atualmente, as novas tcnicas de biologia molecular esto permitindo um avano rpido e significativo no entendimento dos eventos que ocorrem durante os ciclos reprodutivos. De certa forma, esses conhecimentos so importantes para o homem poder desenvolver tecnologias capazes de retirar o mximo de produtividade para nutrio humana; em contra partida, se torna difcil acompanhar essa evoluo e as avalanches de conhecimentos que ocorrem todo o dia, formando exmios especialistas ou generalistas com conhecimentos amplos, mas superficiais. Conciliar o conhecimento especfico com uma noo do todo uma tarefa difcil de todos Mdicos Veterinrios independente da rea de atuao. Nesse sentido, o ciclo estral uma pequena poro do processo reprodutivo de uma fmea. Segundo Robinson & Shelton (1991), trs ciclos esto envolvidos na reproduo animal, o ciclo da vida, o ciclo reprodutivo anual e o ciclo estral. No ciclo da vida, esto includas as fases fetal, a pr-puberdade, a puberdade, a reprodutiva e a senescncia. No ciclo reprodutivo anual, esto envolvidas as diferentes pocas do ano, considerando a disponibilidade alimentar e maior quantidade de luz. Em bovinos, o fotoperodo no to importante quanto em ovinos e eqinos, mas tem sido responsabilizado, direta ou indeiretamente, pela melhor atividade reprodutiva durante a primavera e vero. Nesta reviso, o ciclo estral vai ser abordado mais detalhadamente, mas sero revisados alguns fatores importantes da fase fetal e puberdade para o incio da ciclicidade reprodutiva.

FOLICULOGNESE

Com a formao dos cordes sexuais, nos bovinos aproximadamente aos 30 dias de

gestao e nos ovinos aos 20 dias de gestao, as clulas somticas que acompanharam a trajetria das clulas germinativas at a crista genital, circundam o gameta e o isolam atravs de uma membrana basal (Rsse, 1983). Recentemente, acreditava-se que a produo de ocitos em uma fmea mamfera cessava durante a vida fetal. No entanto, Johnson et al. (2004) demonstraram que ovrios de camundongas jovens e adultas possuem clulas germinativas em atividade mittica, renovando a populao de ocitos disponveis ao crescimento folicular e ovulao. Caracterizando cada fase do desenvolvimento folicular, o folculo primordial em bovinos formado pelo gameta e por algumas clulas somticas planas, podendo haver algumas cubides (ou clulas da pr-granulosa) e pela membrana basal. O folculo primrio apresenta um maior tamanho, a presena de uma camada com um maior nmero de clulas somticas, sendo todas de formato cubide e o incio da transcrio de alguns genes importantes para traduo de protenas que sero utilizadas durante o crescimento do ocito, incluindo aquelas responsveis pela formao da zona pelcida. Com a continuao da multiplicao das clulas da granulosa vo formando-se vrias camadas ao redor do ocito, organizando-se, assim, o folculo secundrio (Buccione et al., 1990). A interao entre as clulas da granulosa e o gameta de fundamental importncia para o desenvolvimento do ocito (Cain et al., 1995), as trocas metablicas entre esses dois tipos de clulas ocorre atravs dos complexos intercomunicantes (Eppig et al, 1989). Em bovinos, os folculos pr-antrais iniciam seu desenvolvimento durante a vida fetal. Aos 180 dias de gestao, o nmero desses folculos atinge seu mximo, decrescendo rapidamente aps o nascimento (Erickson, 1966a; Erickson, 1966b). O crescimento folicular ocorre de uma forma contnua, somente poucos folculos conseguem chegar a ovulao, a maioria degenera, diminuindo o estoque de ocitos. O desenvolvimento do folculo pr-antral, seguido pela formao do antro, maturao do ocito e ovulao um acontecimento raro, sendo observado em menos de 0,1% do total de folculos (Ireland, 1987). A atresia pode ocorrer em qualquer fase do desenvolvimento folicular, inclusive nos folculos primordiais (Rajakoski, 1965). Em bovinos, fetos com 210 dias j apresentam todos os estdios de desenvolvimento folicular, inclusive folculos tercirios (Carmbula et al., 1999). Esse um fato importante, evidenciando que o desenvolvimento folicular no critico no desempenho reprodutivo, tendo em vista que desde o desenvolvimento fetal e, posteriormente, em animais pr-pubere, adulto em diferentes condies nutricionais, gestao e ps-parto ocorre desenvolvimento folicular, mas somente em animais adultos em boas condies nutricionais ocorre a ovulao. Assim sendo, o crtico fazer com que os nveis hormonais sejam adequados para fazer com que o folculo dominante chegue a ovulao.

PUBERDADE Puberdade tem sido definida como um processo pelo qual uma fmea torna-se capaz de reproduzir. De uma maneira mais especfica, a puberdade o momento em que ocorre a primeira ovulao com manifestao estral, seguida pelo desenvolvimento de um corpo lteo funcional (para reviso Robinson & Shelton, 1991; Foster & Nagatani, 1999). Esse processo gradual e a primeira ovulao geralmente no precedida de manifestao estral e o primeiro corpo lteo tem um perodo de permanncia e atividade mais curto. Trabalhos dos anos 80 demonstraram que o ovrio e hipfise tm capacidade de responder a ao de hormnios e iniciar a suas atividades antes da puberdade. O hipotlamo foi responsabilizado por bloquear a reproduo antes da puberdade por apresentar uma hipersensibilidade ao estrgeno, o que causaria um feedback negativo mesmo em baixas concentraes desse hormnio. Na realidade, o que se sabe que durante a puberdade ocorrem mudanas no padro de liberao de GnRH, sendo mais freqentes os pulsos de GnRH, o que estimula a secreo de gonadotrofinas e, conseqentemente, a produo de esterides pelos ovrios, fazendo com que reinicie o ciclo. A idade, a estao do ano em espcies poliestricas estacionais e nutrio so alguns fatores que interferem no momento da puberdade. A nutrio um dos fatores fundamentais. Animais bem nutridos atingem a puberdade mais precoce do que aqueles que sofrem restries alimentares. O sinal metablico que determina o momento da puberdade no est ainda definido, mas tm vrios candidatos como leptina, glicose, insulina e IGF-I (insulinlike growth factor I) que esto envolvidos nesse mecanismo. Provavelmente, no h um nico fator, mas vrios fatores responsveis pelo controle metablico que determina o momento da puberdade.

CICLO ESTRAL O ciclo estral, em bovinos, apresenta uma durao de 18 a 24 dias, sendo mais comum 21 dias. O ciclo pode ser dividido em fase lutenica e folicular de acordo com a atividade e presena de um folculo ou corpo lteo. No entanto, essas fases no so evidentes tendo em vista que no h uma fase exclusiva de atividade folicular e nem uma fase exclusiva de atividade lutenica. Didaticamente, o ciclo poder ser dividido em quatro fases, sendo essas denominadas de prestro com durao de aproximadamente 3 dias, estro de 6 a 18 horas, metaestro 2 dias e diestro 15 dias. O ciclo estral dinmico, havendo crescimento folicular constante durante todo o ciclo. Os eventos observados no ovrio de uma fmea em resposta as mudanas hormonais podem ser observadas na Figura 1 e o perfil hormonal durante o ciclo estral pode ser verificado na Figura 2 (para reviso Gonalves et al. 2002).

Eventos

Cio

3
Legenda Figura 1.

12

15

18

21

Dias do Ciclo
Folculo resgatado Folculo em atresia Folculo dominante Folculo dominante em atresia Folculo ovulatrio Luteinizao Desenvolvimento do Corpo Lteo Corpo Lteo em atividade Lutelise Figura 1. Eventos ovarianos que ocorrem durante o ciclo estral em uma vaca.

Cio

24 h

24 h

Ov

Ov

-1 0

12

15

18

21 0 1

Dias do Ciclo

Progesterona

Estradiol

LH

FSH

Figura 2. Perfil hormonal durante o ciclo estral. O dia zero foi considerado o dia do estro.

DINMICA FOLICULAR E REGULAO DO GnRH

O conhecimento da dinmica folicular em bovinos proporciona subsdios que permitem o controle racional da reproduo, possibilitando entre outros procedimentos, manipular o ciclo estral, induzir o cio ps-parto e utilizar outras biotecnologias com maior eficcia. A dinmica folicular comeou a ser melhor entendida a partir de estudos realizados com a ultra-sonografia, a qual permite um monitoramento ovariano sem necessidade de aplicar tcnicas invasivas. Com base nesses estudos, ser realizada uma breve discusso a respeito do incio, nmero, durao, divergncia, seleo e atresia folicular, bem como algumas aplicaes desse conhecimento. Para estudos com ultra-sonografia, a emergncia de uma onda folicular tem sido definida como o ltimo dia em que o futuro folculo dominante apresenta 4-5 mm de dimetro (para reviso, Ginther et al., 1996). Inicialmente, Rajakoski (1960) props a ocorrncia de duas ondas foliculares durante o ciclo estral bovino, utilizando mtodos de observao visual e histolgicos. Com o emprego da ultra-sonografia em estudos de dinmica folicular, no incio dos anos 80, pode ser constatado que uma vaca apresenta geralmente duas a trs ondas e raramente uma ou quatro ondas foliculares. Ciclos estrais com trs ondas foliculares tm maior durao do que aqueles com duas ondas. Em ciclos com duas ondas, um folculo dominante inicia o crescimento no dia do estro (dia 0) e pra de crescer aproximadamente no dia 6 do ciclo, regredindo em torno do 13 dia. Aproximadamente no 10 dia do ciclo, o segundo folculo dominante inicia o seu crescimento e culmina com a ovulao no estro seguinte. Esses perodos apresentam grande variabilidade em um mesmo indivduo, entre indivduos e conforme a condio nutricional (Santos, 1993). Dois ou mais folculos, iniciam seus crescimentos a partir de um dimetro aproximadamente de 4-5 mm e um desses folculos se destaca em tamanho at o momento em que o segundo maior folculo comea a decrescer. Nesse momento de divergncia folicular, no qual o folculo dominante segue seu crescimento e o segundo maior folculo atinge o seu maior tamanho, iniciando sua regresso, o FSH atinge o mais baixo nvel, em conseqncia da inibio causada pelos hormnios estrgeno e inibina produzidos pelo folculo dominante. A diminuio do FSH por esses hormnios decorrente de uma ao direta na hipfise anterior, diminuindo a expresso do gene que codifica para a subunidade beta do FSH, atravs de reduo da transcrio e da estabilidade do mRNA (Roche, 1996). A principal caracterstica do folculo dominante uma maior atividade das proteases especficas para IGFBP (protenas ligadoras de fator de crescimento semelhante a insulina), do que nos subordinados, liberando IGF o que, provavelmente, potencialize ou permita a ao das gonadotrofinas em estimular o crescimento e

diferenciao folicular, resultando no estabelecimento da dominncia (Rivera & Fortune, 2001; Rivera et al., 2001). Na fase final de desenvolvimento folicular, aps a dominncia, observada a expresso de receptores de LH na camada de clulas da granulosa (Webb & England, 1982; Evans & Fortune, 1997). Nessa fase o folculo dominante se torna tambm dependente de LH. O folculo dominante secreta mais que 80% do estradiol e tambm responsvel por 55% da inibina liberada na circulao (Campbell et al., 1991a). As mudanas da arquitetura intracelular desses folculos tambm refletem a alta capacidade de produo de hormnios, j que eles apresentam trs vezes mais rea de retculo endoplasmtico liso, aumento de cinco vezes na rea do sistema de Golgi e o dobro de membranas mitocondriais, quando comparado com folculos antrais pequenos (McNatty et al., 1992). Alm do IGF, inibina, ativina e outros fatores esto envolvidos no mecanismo endcrino, a seleo da dominncia folicular, importantes na regulao autcrina e parcrina do folculo. O crescimento do folculo dominante e o incremento da produo de estrgeno so caracterizados pela diminuio nos nveis de inibina, ativina e IGFBP, simultaneamente com o aumento de IGF-I livre. H evidncias de que a inibina e ativina e IGFBP tm efeito negativo na ao das gonadotrofinas no folculo e que os diferentes padres de secreo de FSH e LH regulam esses fatores na seleo, dominncia e perda de dominncia do folculo dominante (Knight, 1991; Erickson et al., 1994; Roche, 1996). Nesse folculo, h um aumento da produo de estrgeno (folculo estrgeno-ativo) e, paralelamente, h o desenvolvimento de receptores para LH nas clulas da granulosa, incremento nos nveis de IGF-I e diminuio nas concentraes de ativina, inibina e IGFBP. No entanto, no folculo atrsico, ocorre inverso nos nveis desses fatores. Com base nesses estudos, conclui-se que a seleo, dominncia e perda de dominncia de folculos dominantes esto reguladas por mecanismos endcrinos, autcrinos e parcrinos. Esse conhecimento possibilita o entendimento de vrios fenmenos que so observados na prtica e na aplicao de algumas tecnologias. O efeito endcrino observado pela aplicao de FSH, induzindo a superovulao, ou seja, se os nveis de FSH forem mantidos, mais de um folculo se torna dominante e resulta em ovulao. No entanto, os resultados de superovulao so extremamente baixos se a aplicao de FSH for realizada na presena de um folculo dominante. Um outro aspecto prtico a ovulao no ps-parto e o reincio do ciclo estral. Nas condies de criao extensiva, as vacas em ps-parto freqentemente encontram-se em estado corporal dois (considerando um escore de 1 a 5, Wildmann et al.,1982) ou/e em catabolismo e apresentam crescimento folicular, mas no ovulam, fenmeno esse muito semelhante ao que ocorre na puberdade. H evidncias que as baixas concentraes de estrgenos so capazes de modularem o GnRH de maneira que no ocorra a ovulao antes da puberdade. Apesar de pouco

se conhecer a respeito do mecanismo que inibe o reincio do ciclo no ps-parto, pode-se considerar uma certa similaridade com o que ocorre antes da puberdade. A ao do estrgeno no diretamente nos neurnios responsveis pela sntese de GnRH. O estrgeno, por no possuir receptores nessas clulas, provavelmente atue em outros neurnios que tenham ao nos neurnios que sintetizam o GnRH. Vrias hipteses j foram postuladas e, basicamente, envolvem a inibio ou ativao de neurohormnios que estimulam ou inibem o GnRH. Os primeiros trabalhos sugeriram que os estrgenos podem ter ao em neurnios responsveis pela liberao de norepinefrina, o qual estimula a liberao de GnRH, ou de opiides e dopamina, que por sua vez inibem a liberao desse hormnio. O efeito dos opiides na secreo de LH est bem determinado pelos trabalhos que utilizaram nalaxone, um inibidor de opiides endgenos. No entanto, os neurnios do GnRH tambm no possuem os subtipos dos receptores clssicos de opioides (, e ). Assim sendo, o efeito da -endorfina, de inibir o LH e ser revertido pelo nalaxone, ocorre por meios indiretos, provavelmente, utilizando outros neurohormnios. O fato da -endorfina inibir o LH serviu de base para responsabilizar os opiides pelo atraso na puberdade e no reinicio do ciclo no ps-parto em animais com baixo escore corporal. Novos estudos tm demonstrado que o hormnio responsvel por regular a liberao de GnRH, refletindo o estado nutricional e as reservas energticas um hormnio derivado dos adipcitos, denominado leptina. Em vrias espcies animais, incluindo os ovinos, camundongos, ratos e primatas, foi demonstrado que, em baixas condies nutricionais, os nveis de leptina e gonadotrofinas esto relativamente baixos, sendo revertidas as concentraes de FSH e LH aps aplicao exgena desse hormnio. Apesar de sua ao na liberao de gonadotrofinas, no h evidncias de receptores para leptina nos neurnios do GnRH. Esses receptores so coexpressados nos neurnios hipotalmicos que expressam o Pro-opiomelanocortina (POMC; exemplo de hormnios derivados dessa protena so -endorfina e hormnio

adrenocorticotrofina) e o neuropeptideo Y (NPY). Assim, h relevantes evidncias de que a leptina o sinal metablico para inibir a atividade reprodutiva em condies nutricionais deficientes e reservas energticas inadequadas (para reviso Cunningham et al., 1999). Independente de ocorrer ovulao, a dinmica folicular observada nas diferentes fases do ciclo reprodutivo. Folculo tercirio pode ser observado no ovrio de feto bovino a partir dos 210 dias de gestao (Carmbula et al., 1999). A associao entre nveis de FSH e emergncia de um folculo dominante comprovado em animais pr-pberes, entre 6 e 8 meses, durante a prenhez e no perodo ps-parto (Evans et al., 1994; Adams et al., 1994; Ginther et al., 1996). Assim sendo, esses conhecimentos so fundamentais para antecipar o cio, principalmente no

perodo ps-parto, apesar de nos faltarem ainda subsdios para induo de cio de uma maneira eficaz em diferentes condies nutricionais. Esses conhecimentos proporcionaram a gerao de tecnologias que possibilitam um melhor aproveitamento do material gentico disponvel, como a puno folicular em bezerras, novilhas pr-pberes, vacas prenhes e no perodo ps-parto.

CONCLUSES

A evoluo dos conhecimentos sobre o ciclo estral e a dinmica folicular tem servido para explicar fenmenos observados na rotina de campo e para o desenvolvimento de tecnologias aplicadas reproduo animal. A partir dos conhecimentos bsicos dos ciclos reprodutivos, novas biotecnologias e modernos sistemas de manejos reprodutivos vm sendo desenvolvidos para incrementar a eficincia reprodutiva de nossos rebanhos. Na prtica, essas metodologias desenvolvidas para melhorarem o desempenho da reproduo bovina no tem sido adotadas de uma maneira ampla e eficiente para produzir uma maior quantidade de carne bovina, em conseqncia das polticas econmicas do Pas e, principalmente, pela ausncia de apoio do setor industrial da carne bovina ao produtor.

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