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Questão de Aula 4 - Biotecnologia: Nome: N.° Turma: Data: Professor
Questão de Aula 4 - Biotecnologia: Nome: N.° Turma: Data: Professor
Data: Professor:
O bócio multinodular (BMN) é definido como o aumento da glândula tiroide devido à proliferação
multifocal de tirócitos1, resultando em estruturas foliculares heterogéneas. É considerado uma neo-
plasia benigna comum, clinicamente detetada em 2%-6% dos indivíduos em regiões com dieta
insuficiente em iodo.
A proteína Ras, codificada pelos proto-oncogenes ras, é um transdutor do sinal extracelular,
sendo uma importante via de transmissão da informação da membrana celular ao núcleo, e com-
partilha características estruturais e funcionais com a proteína G da membrana celular. Alterações
no proto-oncogene ras são igualmente prevalentes em tumores benignos e malignos da tiroide,
sugerindo que possam ser uma fase inicial no processo de transformação da célula tireoidiana.
Experiências in vitro mostram que o aumento da expressão da proteína Ras normal é suficiente
para conferir um potencial de transformação em cultura de células.
A ativação do proto-oncogene ras por mutações pontuais é a alteração genética mais frequente
encontrada em tumores espontâneos da tiroide. A avaliação dos níveis de proteína Ras pela técnica
de imuno-histoquímica demonstra níveis elevados desta proteína em carcinomas papilares e folicu-
lares em 85% dos casos, bem como aumento da intensidade da coloração em 30% dos adenomas
avaliados. Esse resultado sugere que o aumento da expressão do ras possa ser implicado no
desenvolvimento das neoplasias benignas e na transformação maligna da tiroide. Para compreen-
der a expressão do gene ras em doentes com bócio multinodular, foi realizado o seguinte estudo.
Métodos e resultados
1. Foram avaliados 112 pacientes hospitalares que apresentavam bócio multinodular, sentido
por apalpação, no período de março de 1999 a fevereiro de 2001.
2. O tecido da tiroide destes pacientes foi recolhido durante o ato cirúrgico de remoção da
tiroide e imediatamente congelado em nitrogénio líquido.
3. Todas as amostras foram mantidas a -70 ºC até serem analisadas.
4. As concentrações do mRNA dos proto-oncogenes H-ras e K-ras foram avaliadas indireta-
mente, pela técnica da reação em cadeia da polimerase (PCR), a partir de transcrição
reversa (RT), RT-PCR.
5. Os oligonucleótidos (primers) utilizados para amplificação dos fragmentos de cDNA especí-
ficos para cada mRNA foram desenhados com base na sequência de cada gene.
6. A temperatura de acoplamento foi de 62 °C para os três genes analisados. Foram amplifica-
dos na mesma reação os genes da família ras (H ou K) e o controlador interno.
7. Todos os ensaios foram realizados em duplicado, e, em caso de discordância, foi realizada
uma terceira repetição.
8. O produto da PCR foi submetido a eletroforese em gel de agarose, corado com brometo de
etídio, e analisado.
1. -ras T N T neg
Os resultados
M N T N T N
obtidos
encontram-se ß
expressos nas 2
figuras A, B, C M
e D da figura G
K
Figura 1. A. RT-PCR do proto-oncogene H-ras, analisado em gel de agarose do tecido de tiroide normal (N) e
tumoral (T). B. RT-PCR do proto-oncogene K-ras, analisado em gel de agarose do tecido de tiroide normal (N) e
tumoral (T). C. Média de expressão do proto-oncogene H-ras, de acordo com o critério de categorização (+/-) da
expressão génica. D. Média de expressão do proto-ongogene K-ras, de acordo com o critério de categorização (+/-)
da expressão génica.
Nota 1: Os tirócitos são as células secretoras das hormonas da tiroide.
Baseado em Golbert, L., Kolling, J., Leitão, Posser, M., Lobato, R., & Maia, A. (2003). Aumento da expressão do proto-
oncogene ras no bócio multinodular: possível envolvimento na patogênese. Arquivos Brasileiros de Endocrinologia &
Metabologia, 47: 721-727. DOI: 10.1590/S0004-2730200300600016
1. Selecione, entre as afirmações seguintes relativas aos resultados obtidos, as três afirmações
corretas, transcrevendo para a folha de respostas os números correspondentes.
I. O valor de expressão do proto-oncogene para a tiroide normal é sempre inferior, qualquer
que seja o proto-oncogene avaliado.
II. A expressão génica é tanto maior quanto menor for a expressão do proto-oncogene.
III. O estudo demonstra que a expressão dos proto-oncogenes H-ras e K-ras é maior em
pacientes com tecidos neoplásicos de tiroide.
IV. O aumento da proteína Ras incentiva ao aparecimento de nódulos com maior expressão
génica, independentemente do tipo de proto-oncogene.
V. A proteína Ras inibe a proliferação celular, verificando-se nos pacientes uma tiroide normal.
5. Refira dois agentes mutagénicos químicos que poderão alterar a sequência de nucleótidos do
DNA do ser humano.
8. Descreva as etapas necessárias para a execução da técnica de PCR, utilizada na análise das
amostras dos pacientes deste estudo.