Biologia Celular e Molecular

2ª Frequência
9 de Janeiro de 2024

1. A análise química de DNA realizada por Erwin Chargaff e os seus colaboradores em

1950-1951 foi muito importante para perceber a composição quimica e estrutura
molecular do DNA. Em 1951 Erwin Chargaff publicou um artigo científico em que
descreveu a razão molar em bases de DNA de diversas espécies. A tabela abaixo
representa parte dos resultados apresentados nesse artigo:

1.1. De acordo com Chargaff, “ A composição em bases do DNA geralmente varia

entre espécies”. Com base na informação que consta na tabela acima, apresente
um argumento que apoie a conclusão de Chargaff.

1.2. Chargaff concluiu também que “Em todas as moléculas de DNA,

independentemente da espécie, A+G=T+C”. Qual a informação na tabela que
apoia esta conclusão?
2. A DNA polimerase III cataliz a extensão de cadeias de DNA.

2.1. Tendo em conta as características da DNA polimerase III, identifique com 5’

ou 3’ cada uma das extremidades identificadas de a a f, e identifique a cadeia
líder e a cadeia seguidora para este garfo de replicação.

2.2. A DNA polimerase III tem no seu domínio catalítico dois locais ativos com
atividades diferentes. Quais são os dois tipos de atividade enzimática desta
proteína, e quais os seus papéis na replicação de DNA?

3. O seu projeto de investigação consiste no estudo de um gene da mosca do vinagre,

designado “Female specific expression 1”, codificante de uma proteína que se julga
estar presente apenas nas fêmeas desta espécie, e ser responsável por diferenças no
desenvolvimento de machos e fêmeas. Com base na sequência do gene Fse1,
desenhou uma sonda radioativa para o exão 1 do gene, que utilizou para fazer
Northern blot utilizando amostras de RNA isoladas a partir de extratos nucleares ou
citoplasmáricos, de machos e fêmeas, Os resultados obtidos foram os seguintes:
Fig 2.
 3.1. Como justifica a diferença de tamanho entre os transcritos detetados no
núcleo e os transcritos detetados no citoplasma?

3.2. Utilizando as amostras de RNA citoplasmático, preparou cDNA e obteve a

sequência do cDNA pasa Fse1. A figura 2 é uma representação esquemática do
cDNA obtido a partir das amostras de machos e do cDNA obtido a partir das
amostras de fêmeas. Com base nesta informação, que mecanismo poderá estar
na base das diferenças no tamanho dos transcritos detetados no citoplasma para
machos e fêmeas? Justifique.

3.3. Utilizando um anticorpo tentou detetar a proteína codificado por Fse1 nos
machso e fêmeas, e a proteína está ausente nos machos. Formule uma hipótese
que justifique a ausência da proteína, tendo em conta que detetou o mRNA que a
codifica nos machos.

4. Num extrato de reticulócitos, o polinúcleótido 5’-AUGUUUUUUUUU-3’ leva à

formação do peptídeo Met-Phe-Phe-Phe. Na presença de farsomycin, um novo
antibiótica desenvolvido pela Fluhardy Pharmaceuticals, é produzido apenas o
peptídeo Met-Phe. Partindo desta observação, o que se pode concluir sobre o modo
de ação de farsomycin?

a) Impede formação do complexo de iniciação 80S, que contém o tRNA iniciador e

as duas subunidas do ribossoma.
b) Inibe a ligação do aminoacil-tRNA à posição A do ribossoma.
c) Inibe a atividade catalítica da subunidade grande do ribossoma na formação da
ligação peptídica.
 d) Bloqueia a translocação do do peptidil-tRNA do local A para o local P do
ribossoma.
Justifique a opção selecionada.

5. Uma célula eucariota pode regual o expressão genética em qualquer passo do fluxo
de informação genética, desde o DNA até à proteíca ativa. Introduza no esquema
abaixo os tipos de regulação listados, de acordo com os processos controlados.

i. Controlo da degradação do mRNA

ii. Controlo da atividade da proteína
iii. Controlo do processamento do mRNA
iv. Controlo da degradação da proteína
v. Controlo da transcrição
vi. Controlo da tradução

6. Indique quais das seguintes afirmações são verdadeiras e quais são as falsas;
reformule as afirmações que considerar falsas, de modo a torná-las verdadeiras.

a. Os cromossomas bacterianos têm extremidades repetitivas, designadas por

telómeros, que não existem nos cromossomas eucariotas.

b. As telomerases são RNA polimerases.

 c. Cada cromossoma eucariota tem uma única origem de replicação.

d. A transcrição termina quando surge um codão stop.

e. O proteoma e o genoma de uma espécie têm o mesmo nível de complexidade.

f. A análise por “microarrays” de DNA permite obter informação sobre os níveis de

mRNA de um conjunto de genes na amostra analisada.

g. O RT-PCR, usando como molde mRNA isolado a partir de um determinado tecido,

permite saber se um determinado gene é expresso nesse tecido.

h. Os anticorpos são proteínas que permitem detetar especificamente uma

determinada proteína.

7. Um estudo recente abordou a possibilidade de um microRNA, o miR-186-5p, regular

a expressão da proteína codificada pelo gene Gria2, por ligação à 3’UTR do mRNA
transcito a partir desse gene.
 7.1. No painel A da figura está representada a possível sequência alvo do miR-
186-5p no mRNA de rato transcrito a partir do gene Gria2, e a comparação com o
mRNA de outras espécies (rat, hsa, ptr, mmu, cfa). O que pode dizer quanto à
conservação da possível sequência alvo, e qual o significado dessa conservação?

7.2. Para testar experimentalmente se o miR-185-5p de facto regula a expressão

do mRNA transcrito a partir do gene Gria2, fundiu-se a 3’UTR desse mRNA com o
mRNA da luciferase, um gene repórter, e introduziu-se essa função em células
onde se promoveu a sobre-expressão (pre-miR-186p) ou a inibição do miRNA-
186-5p (miRNA-186-5p inhibitors) (painel C). Tendo em contra o mecanismo de
regulação por microRNAs e os resultados do painel C, o que pode concluir sobre a
eficiência do miRNA-186-5p na regulação do mRNA do Gria2? Porquê?

8. Um segmento de uma cadeia peptídica tem a sequência Met-Ala-Ser-Tyr-Cys, e é

codificado pelo seguinte fragmento de DNA:
-ATGGCCAGCTATTGT-
-TACCGGTCGATAACA-
Qual das cadeias de DNA é a cadeia molde (use a figura abaixo)? Indique a
polaridade de cada uma das cadeiras (5’ e 3’).
Fig. Código genético

9. Um grupo de investigadores publicou recentemente um artigo em que descreve

alterações na expressão genética em zonas do cérebro afetadas num modelo animal
de isquémia cerebral (processo que acontece na sequência de um acidente vascular
cerebral, por exemplo). Neste trabalho os investigadores compararam o padrão de
expressão genética no hipocampo de animais controlo e no hipocampo de animais
submetidos a uma condição de isquémia. Sugira que métodos poderão ter sido
utilizados para obter estes resultados e proponha como poderia a experiência ser
feita.