Questão de aula 4 – Biotecnologia

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Aumento da expressão do proto-oncogene ras no bócio multinodular

O bócio multinodular (BMN) é definido como o aumento da glândula tiroide devido à proliferação
multifocal de tirócitos1, resultando em estruturas foliculares heterogéneas. É considerado uma neo-
plasia benigna comum, clinicamente detetada em 2%-6% dos indivíduos em regiões com dieta
insuficiente em iodo.
A proteína Ras, codificada pelos proto-oncogenes ras, é um transdutor do sinal extracelular,
sendo uma importante via de transmissão da informação da membrana celular ao núcleo, e com-
partilha características estruturais e funcionais com a proteína G da membrana celular. Alterações
no proto-oncogene ras são igualmente prevalentes em tumores benignos e malignos da tiroide,
sugerindo que possam ser uma fase inicial no processo de transformação da célula tireoidiana.
Experiências in vitro mostram que o aumento da expressão da proteína Ras normal é suficiente
para conferir um potencial de transformação em cultura de células.
A ativação do proto-oncogene ras por mutações pontuais é a alteração genética mais frequente
encontrada em tumores espontâneos da tiroide. A avaliação dos níveis de proteína Ras pela técnica
de imuno-histoquímica demonstra níveis elevados desta proteína em carcinomas papilares e folicu-
lares em 85% dos casos, bem como aumento da intensidade da coloração em 30% dos adenomas
avaliados. Esse resultado sugere que o aumento da expressão do ras possa ser implicado no
desenvolvimento das neoplasias benignas e na transformação maligna da tiroide. Para compreen-
der a expressão do gene ras em doentes com bócio multinodular, foi realizado o seguinte estudo.
Métodos e resultados
1. Foram avaliados 112 pacientes hospitalares que apresentavam bócio multinodular, sentido
por apalpação, no período de março de 1999 a fevereiro de 2001.
2. O tecido da tiroide destes pacientes foi recolhido durante o ato cirúrgico de remoção da
tiroide e imediatamente congelado em nitrogénio líquido.
3. Todas as amostras foram mantidas a -70 ºC até serem analisadas.
4. As concentrações do mRNA dos proto-oncogenes H-ras e K-ras foram avaliadas indireta-
mente, pela técnica da reação em cadeia da polimerase (PCR), a partir de transcrição
reversa (RT), RT-PCR.
5. Os oligonucleótidos (primers) utilizados para amplificação dos fragmentos de cDNA especí-
ficos para cada mRNA foram desenhados com base na sequência de cada gene.
6. A temperatura de acoplamento foi de 62 °C para os três genes analisados. Foram amplifica-
dos na mesma reação os genes da família ras (H ou K) e o controlador interno.
7. Todos os ensaios foram realizados em duplicado, e, em caso de discordância, foi realizada
uma terceira repetição.
8. O produto da PCR foi submetido a eletroforese em gel de agarose, corado com brometo de
etídio, e analisado.
1. -ras T N T neg
Os resultados
M N T N T N
obtidos
encontram-se ß
expressos nas 2
figuras A, B, C M
e D da figura G
K
 Figura 1. A. RT-PCR do proto-oncogene H-ras, analisado em gel de agarose do tecido de tiroide normal (N) e
tumoral (T). B. RT-PCR do proto-oncogene K-ras, analisado em gel de agarose do tecido de tiroide normal (N) e
tumoral (T). C. Média de expressão do proto-oncogene H-ras, de acordo com o critério de categorização (+/-) da
expressão génica. D. Média de expressão do proto-ongogene K-ras, de acordo com o critério de categorização (+/-)
da expressão génica.
Nota 1: Os tirócitos são as células secretoras das hormonas da tiroide.

Baseado em Golbert, L., Kolling, J., Leitão, Posser, M., Lobato, R., & Maia, A. (2003). Aumento da expressão do proto-
oncogene ras no bócio multinodular: possível envolvimento na patogênese. Arquivos Brasileiros de Endocrinologia &
Metabologia, 47: 721-727. DOI: 10.1590/S0004-2730200300600016

1. Selecione, entre as afirmações seguintes relativas aos resultados obtidos, as três afirmações
corretas, transcrevendo para a folha de respostas os números correspondentes.
I. O valor de expressão do proto-oncogene para a tiroide normal é sempre inferior, qualquer
que seja o proto-oncogene avaliado.
II. A expressão génica é tanto maior quanto menor for a expressão do proto-oncogene.
III. O estudo demonstra que a expressão dos proto-oncogenes H-ras e K-ras é maior em
pacientes com tecidos neoplásicos de tiroide.
IV. O aumento da proteína Ras incentiva ao aparecimento de nódulos com maior expressão
génica, independentemente do tipo de proto-oncogene.
V. A proteína Ras inibe a proliferação celular, verificando-se nos pacientes uma tiroide normal.

2. Os proto-oncogenes, ao contrário dos genes supressores tumorais,

(A) desempenham uma importante função de controlo do ciclo celular.
(B) codificam proteínas que estimulam o ciclo celular, promovendo o crescimento e a prolifera-
ção celulares.
(C) codificam proteínas que reprimem a progressão do ciclo celular e promovem apoptose.
(D) resultam de mutações de oncogenes.
3. Os genes supressores tumorais podem dar origem a cancros quando sofrem
(A) alterações que levam à não degradação da proteína que codificam.
(B) mutações que levam à multiplicação da proteína que codificam.
(C) inversões para um determinado gene, sendo este ativamente transcrito.
(D) alterações que levam à perda de funções da proteína que codificam.

4. Um primer é uma sequência de baseada em regiões da molécula de DNA

em estudo.
(A) aminoácidos … variáveis (C) oligonucleótidos … conservadas
(B) aminoácidos … conservadas (D) oligonucleótidos … variáveis

5. Refira dois agentes mutagénicos químicos que poderão alterar a sequência de nucleótidos do
DNA do ser humano.

6. Ordene as expressões identificadas pelas letras de A a E, de modo a reconstituir a sequência

cronológica de acontecimentos no desenvolvimento de um tumor cancerígeno.
A. Mutação de uma célula normal.
B. Desenvolvimento de uma metástase num tecido ou órgão diferente.
C. Invasão de tecidos adjacentes.
D. Vascularização do tumor.
E. Início do desenvolvimento do tumor.

7. Estabeleça a correspondência correta entre os diferentes tipos de mutações, na coluna I, e as

afirmações que constam na coluna II. Todas as letras e todos os números devem ser utilizados.
Coluna I Coluna II
(a) Mutação génica (1) Perda de um segmento cromossómico, levando à remoção do material genético.
(b) Mutação (2) Alteração das bases no DNA origina um codão diferente, que codifica o mesmo
cromossómica aminoácido e a mesma proteína.
estrutural (3) A síndrome de Down resulta deste tipo de mutação.
(c) Mutação (4) Transferência de um segmento do cromossoma para o seu homólogo, duplicando-lhe
cromossómica alguns genes.
numérica (5) Resulta de erros ocorridos durante a meiose, levando à formação de gâmetas com
défice de cromossomas.
(6) Alteração que leva à existência de um aminoácido quimicamente semelhante ao
original, formando uma proteína diferente, mas funcional.
(7) Alteração da orientação de um segmento do cromossoma.

8. Descreva as etapas necessárias para a execução da técnica de PCR, utilizada na análise das
amostras dos pacientes deste estudo.

9. Explique a utilização de enzimas termorresistentes na técnica de PCR.