Uma análise abrangente de Aurora A; níveis

de transcrição são as mais confiáveis em

associação com a proliferação e prognóstico
no câncer de mama
Satoko Yamamoto , um Mutsuko Yamamoto-Ibusuki , 1 Yutaka Yamamoto , 1, 2 Saori
Fujiwara , 1 e Hirotaka Iwase 1
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Abstrato

Fundo
Aurora cinase, um centrosomal serina / treonina-quinase que desempenha um papel essencial
na segregação dos cromossomas durante a divisão celular, é geralmente amplificado e / ou
sobre-expresso em tumores humanos. A Aurora é sugerido para ser um dos parâmetros de
proliferação, que é um fator prognóstico independente para os pacientes precoces de câncer de
mama invasivo, porém a relevância clínica ou prognóstico individual deste gene tem sido uma
questão de debate.

Métodos

Uma análise abrangente de Aurora A nos níveis de expressão de genes, o número de cópias do
gene e proteína expressão foi realizada em 278 pacientes com câncer de mama primário
invasoras; ea correlação com os resultados clínicos foram investigados.

Resultados

Aurora Um nível de expressão genética, não só relacionada com a amplificação do gene, mas
também foi associado significativamente com vários parâmetros clínico e prognóstico do
paciente. Os pacientes com maior grau nuclear, o status do receptor de progesterona negativo e
maior Ki67 expressa níveis mais elevados de Aurora A mRNA, que foi associada não só a
menor sobrevida livre de recidiva (RFS), mas também foi encontrado para ser um parâmetro
multivariada significativo para RFS. Aurora A expressão da proteína também foi associado
significativamente com as características clínico-patológicas, estado linfonodal, grau nuclear, o
status do receptor de estrogênio e Ki67, mas não com o prognóstico. Por outro lado, Aurora A
amplificação do gene relacionado com o tamanho do tumor, grau nuclear e Ki67, e não tinha
nenhum valor prognóstico.

Conclusão

Nossos dados indicam que Aurora A expressão genética é uma ferramenta eficaz, que define
tanto a potência a proliferação do tumor eo prognóstico do paciente.
Palavras-chave: Aurora A, câncer de mama, biomarcadores, os níveis de Transcrição
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Fundo
Aurora cinases, centrosomal quinases serina / treonina, são membros da família de cinases
envolvidos na divisão celular, e desempenham um papel essencial na segregação dos
cromossomas durante a divisão celular através do seu estabelecimento de fusos
bipolares. Existem três tipos de quinases Aurora, em mamíferos, Aurora A, B e C. Elas diferem
no comprimento e na sequência do domínio amino-terminal e tem diferentes localizações
intracelulares reflectindo as suas diferentes funções no ciclo celular [ 1 ]. A Aurora humano Um
gene está localizado no cromossoma 20q13 segmento, um segmento que é comumente
amplificado e / ou sobre-expressa em vários tumores malignos epiteliais humanos, incluindo
os do cólon, bexiga, ovário, pâncreas, mama e [ 2 - 6 ]. Aurora A amplificação e / ou a sobre-
expressão foi associada com anomalias centrossoma e instabilidade cromossómica bem como
revogação de ADN induzida por danos resposta apoptótica e montagem do eixo posto de
substituição em células de tumores, e como resultado, Aurora A, foi definido como um
oncogene [ 7 , 8 ]. Além disso, a Aurora A sobre-expressão foi encontrada uma correlação com
a fosforilação de supressores de tumor tais como p53, modulando assim as suas actividades
[ 9 ] e sugerindo um papel na proliferação desregulada e resistência à apoptose induzida por
ADN danos no cancro da mama [ 10 ].
Hoje em dia, os subtipos moleculares intrínsecas identificados por análises de expressão de
genes à base de microarray global pode ser utilizado para classificar o cancro da mama, o qual
exibe uma grande diversidade e heterogeneidade molecular [ 11 ]. Além disso, as ferramentas
mais convenientes para a análise da expressão gênica em conjunto com dados clínicos, como
Oncotype Dx [ 12 ], MammaPrint [13 ], e PAM50 [ 14 ], foram desenvolvidos e utilizados na
avaliação de prognóstico e previsão de eficácia terapêutica para alto risco de recorrência em
pacientes precoces de câncer de mama. Estas ferramentas de análise de gene incluem a
maioria dos proliferação ou relacionadas ao ciclo celular genes, incluindo Aurora A, que age
como um poderoso fator de prognóstico em linha com receptor de estrogênio (ER) ou de
crescimento epidérmico do receptor do factor humano tipo2 status (HER2). Em vista do
significado clínico de Aurora A de cancro da mama, a sobre-expressão tem sido correlacionada
com elevado grau nuclear em apenas um pequeno número de estudos, mas estes estudos
indicam que a amplificação e / ou a sobre-expressão do gene da Aurora A estão ligadas à
tumorigénese [ 1 , 2 , 7 ]. Em particular, um estudo recente sugere que Aurora A expressão da
proteína supera outros fabricantes de proliferação, como a proteína Ki67, em câncer de mama
ER positivo [ 15 ]. Considerando que vários estudos avaliaram os níveis de si Aurora A
expressão, explorando seu significado clínico, não houve nenhum que compararam a
expressão do mRNA, o número de cópias a aberração e expressão da proteína, ea correlação de
cada um.
No presente estudo, examinamos os níveis de Aurora A (expressão AURKA ) mRNA, a
amplificação do número de cópias do gene e expressão da proteína em uma coorte de pacientes
com câncer de mama invasivo primário. A relação entre Aurora Um status e características
clínico-patológicas e prognóstico foi avaliado.
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Métodos
Pacientes e tecidos de câncer de mama
Amostras de tumor de mama de 278 pacientes do sexo feminino consecutivos com carcinoma
de mama invasivo primário , que foram tratados no Hospital Universitário de Kumamoto,
entre 2001 e 2008 ,foram incluídos neste estudo. Não há critérios de exclusão foram
aplicados. O estudo foi relatado de acordo com as recomendações de Relatório de Estudos de
Tumores marcador prognóstico (Observação) critérios [ 16 ]. Todos os pacientes foram
submetidos a biópsia pré-terapêutica ou tratamento cirúrgico.As amostras foram congeladas
rapidamente em azoto líquido e armazenadas a -80 ° C até ser utilizado para o ARN total
simultânea e extracção de DNA genómico. O tratamento adjuvante e tratamento neoadjuvante
foram decididos por uma avaliação de risco de acordo com a biologia do tumor (ER, PGR, e
HER2 exceto Ki-67 status) e estadiamento clínico, incluindo biópsia de linfonodo sentinela, de
acordo com as recomendações do St. Gallen consenso de especialistas internacionais na terapia
primária do câncer de mama em estágio inicial [ 11 , 17 - 19 ]. Em detalhe, os tratamentos
foram administrados neoadjuvante para 62 pacientes, dos quais 46 receberam quimioterapia e
16, a terapia hormonal. A taxa de conservação de mama foi de 68,2%, ea maioria deles foram
tratados com radioterapia. Esvaziamento linfonodal axilar foi realizada em 45,2% dos casos,
enquanto outros foram omitidos dissecção devido ao estado do linfonodo sentinela negativo
por exploração nó. Um total de 208 pacientes foram tratados com terapia hormonal; inibidores
da aromatase (AI): 124, tamoxifeno (TAM): 20, TAM-AI: 20, supressão da função ovariana
mais TAM: 44. Cento e seis pacientes foram administradas quimioterapia; regimes contendo
antraciclina (ACR) seguido de taxanos: 68, ACR apenas: 20, taxanos só: 9, outros: 9, e 19
pacientes foram tratados com trastuzumab. O comitê de ética da Escola de Pós-Graduação da
Universidade Kumamoto de Ciências Médicas aprovou o protocolo do estudo. O
consentimento informado foi obtido de todos os pacientes. Os pacientes foram seguidos no
pós-operatório a cada 3 meses. O período médio de acompanhamento foi de 53 meses
(variação de 5-121 meses).

Extração de RNA e em tempo real reversa quantitativa de polimerase reação em cadeia

O ARN total foi isolado a partir de 278 amostras de SNAP-congelado usando um RNeasy Mini
Kit (Qiagen, Germantown, MD, EUA) de acordo com as instruções do fabricante. RNA foi
quantificado através da medição dos índices de A260/A280 (Nano-Gota Technologies,
Wilmington, DE). RNA foi avaliada qualitativamente usando o Agilent 2100 Bioanalyzer
(Expert Software versão B.02.03) com RNA Nano LabChip Kits (Agilent Technologies,
Stockport, UK). O ARN total (0,5 mg) foi transcrito de modo reverso em cDNA usando
PrimeScript ® RT Master Mix (Takara Bio Inc., Otsu, Japão), de acordo com o protocolo do
fabricante. A transcrição reversa em tempo real da reacção em cadeia da polimerase
quantitativa (RT-qPCR) foi realizada com 15 ng de cDNA e de 0,2 mmol / L de cada ensaio, no
ABI Prism 7500 (Applied Biosystems, Carlsbad, CA), pelo método comparativo com TaqMan
química . Os iniciadores de PCR eram como se segue: Ensaio de expressão do gene
TaqMan AURKA ; Hs01582073_m1, ACTB; Hs01060665_g1, PUM1; Hs00982775_m1, TAF-
10; Hs00359540_g1 (Applied Biosystems). Cada reacção foi realizada sob as seguintes
condições: inicialização durante 20 s a 95 ° C, e em seguida 40 ciclos de amplificação,
compreendendo de 3 s a 95 ° C para desnaturação e 30 s a 60 ° C para o emparelhamento e
alongamento. O valor máximo do ciclo limiar (Ct) foi fixado em 40. Os valores de expressão
relativa de cada gene por amostra (os dados brutos Ct) foram calculadas por software 2.2
(Applied Biosystems) de SDS, com expressão definida como o ponto em que a fluorescência se
eleva acima da fluorescência de fundo. Dados Assist ® software (Applied Biosystems) foi
usado para calcular a expressão gênica relativa pelo método delta-Ct normalizada com os
nossos múltiplos genes de referência em casa.

Número de cópias do gene

DNA genómico do paciente e de controlo foi extraído utilizando o Allprep DNA / RNA Mini Kit
(Qiagen) seguindo o protocolo do fabricante. A concentração e a pureza das preparações de
ADN genómico foram medidos. Aurora A amplificação do gene foi analisada com ensaio
número de cópias por RT-qPCR em uma PRIZM 7500 em tempo real PCR System (Applied
Biosystems, Foster cidade, CA). RNase P foi escolhido como uma referência para a dosagem de
gene devido ao seu número de cópia única. Cada reacção foi efectuada em triplicado num
volume total de 20 uL, incluindo 4 mL de ADNg, 1 mL deAURKA TaqMan Copy Number
Ensaio (Hs02052288_cn, Applied Biosystems), 1 uL de RNase P TaqMan Copy Number
Referência Ensaio (4.316.844, Applied Biosystems ), e 10 mL de Master Mix.Condições de
ciclos térmicos incluído um passo de inicialização a 95 ° C durante 10 min, seguido por 40
ciclos de 15 s a 95 ° C e 60 s a 60 ° C. O cálculo do número de cópias do gene foi realizado
utilizando o método de quantificação absoluta. Aurora um estado do gene foi definida pela
razão de AURKA contra gene de RNase P. O nível de corte foi investigada com 40 casos de
tecido mamário normal (arquivo adicionais 1 : Figura S1), que definiu uma proporção de 1,70,
o limite superior do intervalo de 95% confidenciais, indicando amplificação.

Imunohistoquímica e pontuação sistema

As secções histológicas (4 um) foram desparafinadas e incubadas durante 10 min em metanol

contendo 0,3% de peróxido de hidrogénio. Foi utilizado anticorpo policlonal de coelho contra a
Aurora-A (Histofine MAX-PO, 1:100, Nichirei, Japão), que alvejou o terminal N de uma
quinase Aurora. Nós também usamos os anticorpos monoclonais de rato contra ERa (SP1,
Ventana Japão, Tóquio, Japão), receptor de progesterona (PGR) (1E2, Ventana Japão) e Ki67
(MIB1, Dako Japão, Tóquio, Japão), e um anticorpo policlonal contra Her2 ( Dako Japão,
1:200); coloração foi levada a cabo na Nexes IHC Immunostainer (Ventana Medical Systems,
Tucson, AZ), em conformidade com as instruções do fabricante. Aurora A expressão foi
pontuada de acordo com os respectivos padrões de coloração diferentes, predominantemente
citoplasmática, contudo a coloração nuclear foi também observada. Nós avaliamos cada padrão
de coloração e mais pontuação combinada, que virou a coloração citoplasmática por ser
principalmente correlacionadas com a informação clínica. Assim, teve a percentagem de
coloração citoplasmática das células tumorais coradas positivamente, como a mesma forma
com Royce ME et al. [ 20 ]. As amostras em que> 50% das células foram coradas foram
pontuados como fortemente positiva (+ 3), aqueles em que> 20-50% das células foram coradas
foram pontuados como moderadamente positiva (+ 2), aqueles em que> 5-20% de células
foram coradas foram pontuados como fracamente positivo (1 +), e naqueles em que <5% das
células foram coradas, ou em que não havia nenhuma mancha, foram marcados como
negativos (0). Ki67 foi classificada como a porcentagem de células nucleares manchada de
todas as células cancerosas ao longo da frente invasiva do tumor em × 400 campos de alta
potência, o que deu o índice de marcação Ki67. ER e status PGR foram avaliadas com base no
percentual de núcleos corados positivamente eo status de cada um foi considerado positivo
quando houve ≥ 1% da coloração nuclear [ 21 ]. Her2 foi avaliada utilizando o método
HercepTest (Dako), com a coloração das membranas pontuados em uma escala de 0 a 3
+.Tumores com pontuações de ≥ 3 ou com um aumento ≥ 2,2 vezes na amplificação do gene
HER2, tal como determinado por fluorescência in situ hibridação foram considerados positivos
para a sobreexpressão do Her2.

A análise estatística

A não paramétrico de Wilcoxon (para uni-variável), teste de Kruskal-Wallis (para multi-

variáveis) eo χ2 teste foi adotado para a análise estatística das associações entre diferentes
Aurora Um status e fatores clínico-patológicas. Sobrevida livre de recidiva (RFS) e sobrevida
específica por câncer de mama (BCSS) curvas foram calculadas de acordo com o método de
Kaplan-Meier e verificado pelo teste de log-rank.Análises univariada e multivariada dos
valores prognósticos foram realizados com o modelo de riscos proporcionais de Cox. Todos
significância estatística foi definida como P <0,05. JMP 8.0.2 software para Windows (SAS
Institute Japão, Tokyo, Japão) foi utilizado para todas as análises estatísticas.
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Resultados

Correlação entre a expressão de Aurora A mRNA, o número de cópias

do gene e expressão da proteína
Analisamos expressão Aurora Um mRNA, o número de cópias do gene e expressão da proteína
em 278 tumores de mama invasivos primários. Relativa Aurora A expressão de mRNA
variou ,0001-45,36 (mediana, 0,164). O valor médio para a relação entre Aurora A versus
RNase P foi de 1,52. No total, 63 (23%) casos apresentaram um rácio de <1.0, 174 (63%) casos
mostraram uma relação 1,0-2,0, 37 (13%) casos foram 2,0-4,0 e 4 (1%) casos foram> 4.0. Se
uma relação> 1,70 é definido como a amplificação positiva, 78 (28%) casos foram positivos e
200 (72%) casos foram negativos. Os padrões de coloração representativos para cada Aurora
um nível de expressão da proteína estão apresentados na Figura 1 .Sessenta e oito (24%) casos
eram fracamente positivo: 1 +, moderada: 2 +, e forte: 3 + expressão estava presente em 38
(14%), 13 (5%), e 17 (6%) casos, respectivamente , e 210 (75%) casos foram negativos: 0
Quando dicotomizada Aurora Um número de cópias do gene em positivo e negativo, o nível de
Aurora A mRNA foi maior nos pacientes que exibem amplificação do gene, os pacientes foram
divididos em grupos de positivo (n = 78; mRNA mediana; 0,209) e expressão negativa (n =
200 ; mRNA mediana; 0,157), tanto em toda a coorte ( P = 0,017; arquivo adicionais 1 : Figura
S2a) e no ER + / HER2-subtipo grupo ( P = 0,0035; arquivo adicionais 1 : Figura S2B), mas
não no ER + ou / HER2 + subtipo grupo ou o ER-/HER2- (triplo-negativo) grupo
subtipo. Além disso, dividindo-se em quatro subgrupos de acordo com os níveis de expressão
de proteínas (negativas, fracamente positiva, moderadamente positiva e grupos fortemente
positivas); Aurora Um mRNA níveis médios foram 0,157, 0,228, 0,067 e 0,578,
respectivamente (arquivo adicionais 1 : Figura S3). Houve uma correlação fraca entre a Aurora
A de mRNA e da expressão de proteínas em todo o grupo ( P = 0,075), mas não de correlação
dentro de cada subtipo. Além disso, nenhuma correlação significativa foi indicado entre Aurora
A expressão amplificação e proteína em toda a coorte ( P = 0,553; arquivo adicionais 2 : Tabela
S1).

Associação de Aurora A expressão do mRNA, o número de cópias do gene e proteína

expressão com características clínico-patológicas

Examinamos a relação entre a expressão Aurora Um mRNA, o número de cópias do gene e

expressão da proteína, e as características clínico-patológicas (Tabela 1 ). O nível de expressão
de mRNA A Aurora foi significativamente associada com vários parâmetros clínico-
patológicos. Níveis de mRNA Aurora A mais elevadas foram observadas no grupo de pacientes
com maior grau nuclear ( P = 0,0004), estado negativo PGR ( P = 0,016), bem como maior
Ki67 índice de marcação ( P <0,0001). Nenhuma relação significativa foi encontrada entre os
grupos de subtipos, mas o grupo triplo negativo apresentaram os maiores níveis de expressão
de mRNA Aurora Um entre todos os subtipos.
A Aurora Um número de cópias do gene tinha uma relação menos notável com fatores clínico-
patológicos. Amplificação positiva foi associada com tamanho maior do tumor ( P = 0,035), de grau
intermediário nuclear ( P = 0,0044), e um índice de Ki67 rotulagem ( P = 0,013). Aurora A
expressão de proteínas foi associada com vários parâmetros clínico, bem como a Aurora A de
mRNA, tais como estado nodal positiva ( P = 0,0083), maior grau nuclear ( P <0,0001), o estado
negativo ER ( P = 0,0084), e maior Ki67 índice de marcação ( P = 0,0015).
Na ER + / HER2-subtipo grupo (n = 205), maior expressão Aurora Um mRNA foi associado com
maior grau nuclear ( P = 0,0078) e maior índice de marcação Ki67 ( P = 0,0005). Amplificação
positiva foi associada com maior tamanho do tumor ( P = 0,0051), grau nuclear 2 ( P = 0,0080) e
maior índice Ki67 rotulagem ( P = 0,0030). Aurora A expressão da proteína foi associada com o
estado nodal positivo ( P = 0,018), maior grau nuclear ( P = 0,0020) e maior índice de marcação
Ki67 ( P = 0,0030; arquivo adicionais 2 : Tabela S2). No entanto, no ER + ou-/ HER2 + subtipo
grupo (n = 42) e o ER-/HER2- (triplo-negativo) subtipo (n = 31), nem o nível de Aurora A de
mRNA, a amplificação do gene ou a expressão da proteína mostrou qualquer significativa
associação com parâmetros clínico-patológicos, exceto que a expressão Aurora Um mRNA foi
maior com maior índice de marcação Ki67 no grupo triplo negativo ( P = 0,0026; arquivo
adicionais 2 : Tabelas S3-4).
Relevância prognóstico da expressão Aurora Um mRNA, o número de
cópias do gene e expressão da proteína
Na análise da RFS, ambos recorrências locais e metástases à distância foram considerados
como eventos. Entre 31 casos recorrentes, houve 25 casos de metástases à distância e 6 de
recidivas locais.Vinte pacientes morreram em decorrência do câncer de mama, e estes foram
considerados como eventos ao analisar BCSS. A importância de prognóstico de Aurora A de
mRNA, o número de cópias do gene e a expressão da proteína encontram-se resumidos nas
Tabelas 2 e e3.3 . Nossos dados indicam que a expressão Aurora Um mRNA é um fator
preditivo independente de mau prognóstico em RFS para o câncer de mama invasivo primário,
e é especialmente superior a Ki67. No modelo de riscos proporcionais de Cox, que incluiu
idade, estado menopausal, tamanho do tumor, o estado nodal, de qualidade nuclear, ER, PGR,
HER2 e Ki67, expressão Aurora Um mRNA provou ser um parâmetro importante prognóstico
univariada ( P = 0,006) e multivariada fator ( P = 0,027) para a RFS (Tabela 2). Como para
EGCM, Aurora A expressão de ARNm não era um parâmetro univariada significativa ( P= 0,14;
Tabela 3 ).

Para identificar um clinicamente significativa de corte para a expressão Aurora Um mRNA,

vários níveis de expressão Aurora Um mRNA foram testadas pelo método de Kaplan-Meier e
verificado pelo teste de log-rank. Um nível de expressão Aurora Um mRNA de 0,30 foi
identificado como proporcionar a associação mais significativa com RFS. Neste cenário, os
pacientes com níveis elevados de expressão (n = 90, mediana 0,684) tiveram RFS
significativamente mais pobres do que aqueles com baixos níveis de expressão (n = 188,
mediana 0,101) ( P = 0,0074; Figura 2 a).
Além disso, estudou-se o valor prognóstico da Aurora A em diferentes subtipos de nossa
coorte. Na ER + / HER2-subtipo grupo (n = 205), Aurora Uma expressão a expressão genética,
a amplificação do gene e da proteína não foram significativamente associados com ou RFS nem
BCSS usando proporcional modelo de risco de Cox (arquivo adicionais 2 : Tabela S5) e não
poderia ser verificada pela curva de Kaplan-Meier (arquivo adicionais 2 : Tabela S4). Nem o
grupo subtipo ER-/HER2- ER + ou-/ HER2 + subtipo grupo (n = 42) ou (n = 31) não foram
significativamente associados com RFS e BCSS, bem como o ER + / HER2-subtipo
grupo. Quando definido a Aurora A amplificação do gene e a expressão da proteína como
positivo ou negativo, em contraste com a expressão da Aurora um ARNm, não havia diferença
entre o prognóstico Aurora A amplificação de genes e não-amplificação grupos, e a proteína
Aurora A positivo e negativo grupos. Nem teve correlação significativa com a RFS (Figuras 3 e
um and4a)4 a) ou com BCSS (Figuras 3 e b and4b).4 b). Além disso, na análise univariada,
não houve valor prognóstico significativo para qualquer RFS (Aurora A amplificação do
gene: P = 0,47, Aurora A expressão da proteína: P = 0,35; Tabela 2 ) ou BCSS (Aurora A
amplificação do gene: P = 0,78, Aurora A expressão da proteína: P = 0,52; Tabela 3 ).
Discussão
Usando um ensaio baseado em PCR quantitativo em tempo real, descobrimos que 28% das
amostras em nosso grupo mostrou Aurora A amplificação do gene, uma descoberta que foi
superior ao resultado da pesquisa de Zhou que mostrou amplificação em 12% das linhas
primárias de células de câncer de mama [ 22 ]. Embora estudos recentes sugeriram que as
aberrações no número de cópias pode contribuir para o aumento da instabilidade do ADN e
conduzem a um desequilíbrio genómico [ 23 ], e que o número de cópias de aberração tem um
efeito profundo sobre a variação inter-individual na expressão do gene, a Aurora A
amplificação do gene não tinha nenhum relevância prognóstica em nosso estudo. Nós
encontramos uma correlação significativa entre o nível de expressão de Aurora A mRNA e
amplificação do gene em toda a coorte ( P = 0,017; arquivo adicionais 1 : Figura S2a) e ER + /
grupo HER2-subtipo (P = 0,0035; arquivo adicionais 1 : Figura S2B ). É razoável que a
amplificação do gene deve aumentar o nível de Aurora A de mRNA [expressão 23 , 24 ],
embora alguns casos exibem nenhuma amplificação expressaram níveis elevados de ARNm de
Aurora A. Em contraste, a associação entre a amplificação e a sobre-expressão da proteína não
foi absolutamente significativa em todo o grupo ( P = 0,553; arquivo adicional 2 : Tabela S1),
31% (n = 21) dos casos de sobre-expressão da proteína (n = 68) mostrou a amplificação do
gene . Além disso, a correlação entre mRNA e expressão da proteína não teve significância
( P = 0,075; arquivo adicionais 1 : Figura S3). Discrepâncias entre amplificação do gene e
mRNA e proteína sobre as taxas de expressão foram anteriormente relatados em pequenos
grupos de vários tipos de câncer [ 22 ]. Todos aqueles sugerido que a Aurora A sobre-expressão
foi regulada não só por amplificação do gene, mas também por outros mecanismos, tais como a
activação da transcrição e a supressão de degradação da proteína. Kimura et al. relataram a
rápida degradação da AIK1 (Aurora A) após a fase de mitose e a presença de sequências de tipo
caixa de destruição em AIK1 (Aurora A), o que sugere um envolvimento do sistema ubiquitina-
proteassoma na sua degradação [ 25 ]. Nas células normais, os níveis de Aurora A proteína é
controlada pelo menos em parte, pela ubiquitina-ligase E3 baseada em SCF FBXW7 [ 26 ]. Nós
já indicaram que pacientes com menor expressão FBXW7 mRNA teve um pior prognóstico
para BCSS do que aqueles com maior expressão [ 27 ]. Na nossa coorte, por exemplo, o grupo
Aurora A expressão da proteína positivo apresentou menor expressão FBXW7 ARNm do que a
Aurora um grupo negativo de proteína (dados não apresentados). Recentemente, Chen et al
BB. relataram que Fbxl7, que é também a ligase E3 subunidade baseado em SCF,
especificamente ubiquitinates e degrada a Aurora A para regular eventos mitóticas in vitro
[ 28 ]. Nós especulamos Fbxl7 tem maior afinidade para Aurora A que FBXW7 que
predominantemente trabalham durante G0 e fase G1-S, e também é de grande valor para a
nossa próxima investigação. Chen BB et al. Também sugerem que a Aurora A é modulado e
regulado por uma variedade de modificações pós-translacionais, tais como a fosforilação, a
desfosforilação. A elucidação desses mecanismos e clarificar o seu significado clínico nos
apressar para estudos posteriores.
Observou-se que a Aurora A expressão de mRNA foi significativamente superior nos doentes
que tinham parâmetros proliferativos activos, tais como maior grau nuclear, o receptor da
hormona e negativo maior índice de marcação de Ki67, bem como na proteína ao longo do
grupo de expressão.Além disso, a expressão Aurora Um mRNA acabou por ser
significativamente associada com o RFS ( P= 0,0074) pelas curvas de Kaplan-Meier
dicotômicas, bem como os resultados da RFS uni e multivariada. Hoje em dia, gene expression
profiling deve ser considerado como um adjunto para fenotipagem patologia de alta qualidade,
que resulta em uma indicação de determinadas terapias para os pacientes de cancro da mama
precoce [ 29 ] que contêm Aurora A, tal como um dos genes-proliferação. Heibe-Kains et
al. relataram que a expressão do mRNA prevê classificação em quatro subtipos moleculares de
medição quantitativa de três genes em uma meta-análise baseada em array (ESR1, ERBB2 e
AURKA) em um grande estudo de pacientes com câncer de mama (n = 5715) , que identificou
os principais subtipos de cancro da mama e intrínsecas fornecida discriminação robusta para
utilização clínica de um modo muito semelhante a um 50 gene subtipo preditor (PAM50)
[ 30 ]. Nosso estudo forneceu dados poderoso apoio que coincidem com as investigações
fundamentais usando dados de expressão de mRNA A Aurora.
Proteína sobre a expressão de Aurora A em nosso estudo foi significativamente associada com
várias características clínico-patológicas, como status linfonodal, grau nuclear, expressão de
receptores hormonais, e Ki67 índice de marcação, o que está de acordo com outros estudos que
demonstram que a Aurora A sobre os níveis de expressão correlacionada com maior grau
nuclear no câncer de mama [ 1 ,15 , 20 , 31 ]. Ali et al. compararam o valor prognóstico dos
marcadores de proliferação, como MCM2, Ki67, Aurora A, polo-like kinase 1 (PLK1), GMNN e
H3 fosforilada-histona (phh3), com base em sua expressão diferencial em diferentes fases do
ciclo celular, em seguida, mostrou que a Aurora A é o melhor fator prognóstico, superando
Ki67 em câncer de mama ER positivo [ 15 ]. Nossos dados também mostraram que a Aurora A
proteína sobre a expressão foi associada com parâmetros de proliferação, mas já não tinha
qualquer significado prognóstico na ER + / HER2-subtipo grupo. Uma explicação é de que a
Aurora A proteína é expressa não apenas de forma difusa no citoplasma mas também como
marcação localizada no citoplasma ou no núcleo. Neste estudo, foi analisada a proporção de
coloração citoplasmática tumor com base em nosso estudo anterior [ 32 ], que ainda estava em
desenvolvimento para fornecer diretrizes universais quanto a saber se a coloração nuclear e
citoplasmática ou stainig citoplasmática foi positiva. Em segundo lugar, a técnica de
imunomarcação foi influenciada pelo anticorpo utilizado e o estado do bloco de tecido. Tecidos
de biopsia, por exemplo, tendem a manchar fortemente que influenciou os estudos, e Aurora A
coloração positiva foi de 15% para 94%. No nosso tecido, 17 casos fortemente positivas (6%)
revelaram conter coloração difusa no citoplasma em todo o tumor, mas, noutros casos, a
coloração foi principalmente localizadas numa parte do tumor. Ao estabelecer diretrizes
padronizadas para imunohistoquímica, Aurora Um pode vir a ser um biomarcador proliferação
mais eficaz para casos selecionados, que precisam de terapia citotóxica mais intensivo.
Recentemente, vários inibidores de Aurora cinase, tais como Hesperadin [ 33 ], ZM447439
[ 34 ], e VX680 [ 35 ] foram desenvolvidos, os quais foram concebidos para atingir o local de
ligação a ATP de Aurora cinases e, assim, inibir a todas as três quinases Aurora. in vivo e in
vitro, os estudos mostram que a inibição do crescimento do tumor foi acompanhado por um
aumento significativo na apoptose de células tumorais. Além disso, VX680 não teve nenhum
efeito sobre a viabilidade das células não-cycling primárias humanas, provavelmente porque a
expressão e a actividade de quinase Aurora A é baixa ou indetectável em células normais,
assim, inibidores moleculares de quinases Aurora A pode ser a terapêutica anti-cancerígenos
promissores [ 36 , 37 ]. Trabalhos futuros são necessários para estabelecer padrões de Aurora
A expressão ea resposta aos inibidores Aurora A.
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Conclusões
Analisamos Aurora A expressão por meio de três métodos diferentes, a expressão do gene, a
variação do número de cópias usando RT-qPCR, e expressão da proteína por imuno-
histoquímica. Aurora A expressão da proteína foi associada com parâmetros proliferativa
agressivos, enquanto expressão Aurora Um mRNA foi associado não só com a má RFS, mas
também acabou por ser um biomarcador independente para RFS. Nossos resultados sugerem
que Aurora A expressão é uma ferramenta eficaz que pode detectar tumor proliferação
potência, e é considerado como uma parte importante da expressão do gene de perfil para a
diversidade biológica de câncer de mama. Mais pesquisas, incluindo Aurora A sinalização é
necessária.
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Agradecimentos
Agradecemos Y. Azakami e Y. Sonoda para excelente suporte técnico e A. Okabe, para
gerenciamento de dados clínicos.