Você está na página 1de 49

MINISTRIO DA EDUCAO UNIVERSIDADE FEDERAL DE PELOTAS INSTITUTO DE BIOLOGIA CURSO DE CINCIAS BIOLGICAS

ANLISE MICROBIOLGICA DE BARRAS DE CEREAIS E CEREAIS MATINAIS, COMERCIALIZADOS NA CIDADE DE PELOTAS - RS

FERNANDA CORRA DA SILVA VASCONCELLOS

MONOGRAFIA DE CONCLUSO DE CURSO

Universidade Federal de Pelotas Campus Universitrio s/n Caixa Postal 354, CEP 96010-900 Pelotas RS Brasil

2006

FERNANDA CORRA DA SILVA VASCONCELLOS

ANLISE MICROBIOLGICA DE BARRAS DE CEREAIS E CEREAIS MATINAIS, COMERCIALIZADOS NA CIDADE DE PELOTAS - RS

Monografia

apresentada

Universidade

Federal de Pelotas, sob a orientao da Prof. Dra. Gladis Aver Ribeiro, como parte das exigncias para obteno do ttulo de Bacharel Biolgicas. e Licenciada em Cincias

PELOTAS Rio Grande do Sul Brasil Outubro de 2006

Banca Examinadora
Prof. Dra. Gladis Aver Ribeiro Prof. Msc. Adriane Maria Delgado Menezes Msc. Helen Silveira Coimbra Prof. Dra. Patrcia da Silva Nascente

Dedico

Aos meus pais e ao meu irmo.

AGRADECIMENTOS
A Deus e a Nossa Senhora, pela minha vida e proteo; Aos meus pais, Neister e Elizabeth, pelo apoio e incentivo, nos momentos complicados e de incerteza na minha vida; Ao meu irmo Gabriel, pela amizade, companheirismo, e alegrias que me proporcionou incansavelmente; A minha Dinda Martha por ser minha segunda me; A minha orientadora Prof. Dra. Gladis Aver Ribeiro, pela pacincia, amizade e incentivo pesquisa; Aos meus amigos e colegas de aula Alessandra, Dvia, Joo, Michele e Taciane pela amizade, incentivo e descontrao em todos os momentos durante o caminho percorrido na graduao; Aos colegas de laboratrio Natlia, Rafael e Patrcia, que me auxiliaram a dar os meus primeiros passos dentro do laboratrio de Microbiologia; As colegas de laboratrio Simone, companheirismo; A todos que me incentivaram direta ou indiretamente, para realizao da graduao e finalmente deste trabalho. Rosana e Vanessa pela amizade e

S em Deus encontrarei glria e salvao. Ele meu rochedo protetor, meu refgio est Nele. Sl 61- 8

RESUMO
Os alimentos saudveis e prontos esto com uma forte tendncia de consumo, devido necessidade de uma alimentao balanceada e de um bem-estar fsico e emocional. Com isso, as barras de cereais e os cereais matinais surgiram com a finalidade de auxiliar na alimentao equilibrada fornecendo fibras, carboidratos e protenas com baixo teor de calorias e gorduras. Portanto, para verificao microbiolgica das barras de cereais e dos cereais matinais, foram analisadas 20 amostras de barras de cereais e dez de cereais matinais, no perodo de maro a setembro de 2005, obtidos nos supermercados da cidade de Pelotas, a fim de analisar a presena dos microrganismos Bacillus cereus, Coliformes Termotolerantes e Salmonella spp. Para anlise de Bacillus cereus foi utilizado o meio de cultura gar Manitol Gema de Ovo Polimixina (MYP), sendo as colnias caractersticas estocadas em gar Nutriente para posteriores provas bioqumicas, para Coliformes Totais e Termotolerantes, os meios de cultura utilizados foram o Caldo Lactosado para o teste presuntivo, o Caldo Lactose Bile Verde Brilhante (CLBVB) para o teste confirmativo de Coliformes Totais e o Caldo EC para o teste confirmativo de Coliformes Termotolerantes e para anlise de Salmonella spp. foram utilizados os caldos Rappaport, Tetrationato e Selenito e os gar HE e XLD para o isolamento de colnias, dos quais as tpicas foram submetidas as provas bioqumicas. Todas as 20 amostras de barras de cereais estavam dentro dos padres previstos pela Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria (ANVISA), ou seja, para Bacillus cereus o limite de 5 x 102 UFC.g -1, para Coliformes Termotolerantes de 5 x 10 NMP.g -1 e para Salmonella spp. a ausncia. J para os cereais matinais, apenas uma amostra (10%) estava contaminada com Bacillus cereus (1,0 x 104 UFC.g -1), no qual o limite de 5 x 103 UFC.g -1. Com os resultados encontrados a partir das amostras analisadas do comrcio de Pelotas, pode-se observar que estes alimentos no oferecem risco a sade do consumidor. Palavras-Chaves: barra de cereais; cereais matinais; Bacillus cereus; Coliformes Termotolerantes; Salmonella spp.

ABSTRACT
The healtly and prepared foods theyre with strong trend of consumption, just of necessity a balanced alimentations, physical and emotion welfaire. With this, the cereals bars and breakfast cereals had appeared with the purpose of assisting in equilibrate alimentation supplying fibres, carbohydrates and proteins with low calories and fats. Therefore, for verification of the cereals bars and breakfast cerals had been analysed 20 samples of cereals bars and ten of breakfast cereals, between March a September 2005, obtained of supermarket of the Pelotas city, with objective to analyze the presence Bacillus cereus, Thermotolerant Coliform and Salmonella spp. microrganisms. For analyse of Bacillus cereus was used Agar Manitol Gema de Ovo Polimixina (MYP), where characteristics colonys thrust in Agar Nutriente for backsides biochemistry tests, for Thermotolerant and Total Coliforms was used Lactosado Broth for the presuntive test, Brilliant Green Lactose Bile Broth for confirmative test of Total Coliform and EC Broth for confirmative test of Thermotolerant Coliform and to analyse Salmonella spp. was used Rappaport, Tetrationato and Selenito Broths and HE and XLD Agar for colonys isolation, at the typical colonys went submited the biochemistry tests. All the 20 samples of cereals bars was within expected standart of Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria (ANVISA), or be, for Bacillus cereus this limit is this 5x102 UFC. g-1, for Thermotolerant Coliform is this 5x10 NMP.g -1 and for Salmonella spp. is this absence. Now for breakfast cereals, just one sample (10%) was contamined with Bacillus cereus (1,0x104 UFC. g-1), in which the limit is this 5x 103 UFC. g-1. Finally, these results demonstrated these foods dont offer to risk consumers health. Key Words: Cereals bars; Breakfast cereals; Bacillus cereus; Thermotolerant Coliform; Salmonella spp.

LISTA DE FIGURAS
Figura 1: Anlise de Coliformes Totais e Termotolerantes ..............................21

Figura 2: Anlise de Bacillus cereus....................................................................25

Figura 3: Deteco de Salmonella spp................................................................28

Figura 4 a: Provas bioqumicas realizadas para identificao de Bacillus cereus encontrado nas amostras positivas. ..................................................... 30

Figura 4 b: Provas bioqumicas realizadas para identificao de Bacillus cereus encontrado nas amostras positivas. ..................................................... 31

Figura 5: Fluxograma do processo de fabricao de barras de cereais ........36

Figura 6: Fluxograma do processo de fabricao de cereais matinais ..........37

LISTA DE TABELAS
Tabela 1: Reaes bioqumicas caractersticas de Escherichia coli nos testes de IMViC ...................................................................................................................20

Tabela 2: Reaes bioqumicas caractersticas de Bacillus cereus ..............24

Tabela 3: Contagem de Bacillus cereus nas amostras positivas ....................29

SUMRIO

RESUMO ....................................................................................................................vi ABSTRACT ...............................................................................................................vii LISTA DE FIGURAS ...............................................................................................viii LISTA DE TABELAS.................................................................................................ix 1. INTRODUO ....................................................................................................11 2. OBJETIVO ...........................................................................................................13 3. REVISO DE LITERATURA .............................................................................14 3.1 Qualidade e Segurana Alimentar ..........................................................14 3.2 Salmonella spp...........................................................................................15 3.3 Colifo rmes Totais e Termotolerantes......................................................16 3.4 Escherichia coli ..........................................................................................16 3.5 Bacillus cereus ...........................................................................................17 4. MATERIAL E MTODOS ..................................................................................18 4.1 Coleta e procedimento das anlises.......................................................18 4.2 Anlise de Coliformes Totais e Termotolerantes..................................18 4.3 Anlise da presena de Escherichia coli................................................19 4.4 Contagem de Bacillus cereus ..................................................................22 4.5 Deteco de Salmonella spp...................................................................26 5. RESULTADOS ....................................................................................................29 6. DISCUSSO........................................................................................................32 7. CONCLUSO......................................................................................................35 8. REFERNCIAS...................................................................................................38 9. ANEXOS ..............................................................................................................41

1. INTRODUO
A preocupao do consumidor, com a qualidade dos alimentos e a conseqente reduo dos riscos sade vem aumentando ao longo dos anos. A segurana alimentar, que tem crescido em importncia juntamente com os novos processos de industrializao e com as novas tendncias do comportamento do consumidor, entendida como a garantia do consumidor em adquirir um alimento que possua como caracterstica intrnseca a sanidade, bem como atributos nutricionais e sensoriais desejveis (BENEVIDES et al., 2004). Entre as qualidades desejveis que se devem relacionar com os alimentos est a iseno de microrganismos infecciosos. Pode no ser possvel conseguir uma tolerncia certa para todos os microrganismos com alguns procedimentos corretos de fabricao, a produo de alimentos com um nmero mais baixo possvel de carga microbiana o objetivo desejvel (JAY, 1992).

Em um mundo faminto, a ingesto diria dos cereais pode ser a forma mais eficaz de obter nutrientes que cobrem as necessidades de energia e de crescimento, partindo de recursos alimentcios escassos e todos os povos da Terra tm uso destes produtos com mais propagao que de qualquer outro alimento (ICMSF, 1980).

A superfcie externa dos gros de cereais que se colhe, conserva alguns microrganismos adquiridos durante seu desenvolvimento, mas os microrganismos contaminantes procedem do solo, dos insetos e de outras fontes. Os gros de cereais recm colhidos contm desde alguns mil a vrios milhes de bactrias por grama e desde nenhum a vrias centenas de mil de esporos de fungos (FRAZIER, et al., 1993). Todos os cereais do campo esto expostos a uma grande variedade de microrganismos procedentes do p, gua, plantas enfermas, insetos, solo, fertilizantes e defecao de animais (ICMSF, 1980).

de se esperar que a composio do trigo, do centeio, do milho e dos gros de cereais estejam contaminados pelos microrganismos do solo, pelo ambiente dos locais onde se armazenam estes gros e por outros microrganismos recolhidos

durante o tratamento destes produtos (JAY, 1992). Por isso, a melhor maneira de evitar o crescimento microbiano nos gros mant-los secos (ICMSF, 1980).

Praticamente todo carboidrato ou substncia derivada de carboidratos est sujeito utilizao como substrato para o crescimento microbiano, basicamente como fonte de energia. Por outro lado, a utilizao, pelos microrganismos, dos produtos resultantes da hidrlise das protenas, bem como de outras substncias nitrogenadas no proteicas so os principais responsveis pelas marcantes alteraes dos alimentos em processos de deteriorao. Ao lado dos microrganismos envolvidos em processos de deteriorao, tambm existem inmeras espcies patognicas que podem contaminar os alimentos e, em alg umas situaes, encontrar neles um substrato adequado para a sua proliferao (ROITMAN et al., 1988).

Dentre os microrganismos envolvidos no processo de contaminao dos gros de cereais, destacam-se o Bacillus cereus, Coliformes Totais e Termotolerantes e a Salmonella spp., previstos pela Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria (ANVISA), dos quais as formas virulentas podem causam ao homem diarria, nuseas, dores abdominais e febre podendo levar a morte em indivduos imunodeprimidos.

Assim, duas fontes destes microrganismos so as barras de cereais e os cereais matinais que so produtos feitos com os mais diversos gros, como o arroz, o milho, o trigo, a aveia podendo ser adicionado o mel, as frutas desidratadas, a castanha, o amendoim e o chocolate dentre tantos componentes.

Portanto, as barras de cereais e os cereais matinais so produtos que satisfazem o paladar dos consumidores que buscam uma alimentao equilibrada, gostosa e saudvel, aliando ainda uma alimentao rica em fibras e carboidratos com baixa quantidade de calorias e gorduras.

2. OBJETIVO
O objetivo deste trabalho foi de avaliar as condies microbiolgicas de barras de cereais e de cereais matinais, comercializados nos supermercados da cidade de Pelotas, RS Brasil, atravs da investigao dos microrganismos Bacillus cereus, Coliformes Fecais (Termotolerantes) e Salmonella spp.

3. REVISO DE LITERATURA

3.1 Qualidade e Segurana Alimentar


A educao, a informao e a motivao de todos que manipulam os alimentos, na indstria, no comrcio e nos restaurantes, constituem os pontos essenciais de uma boa poltica de preveno. De uma maneira mais geral, todo o incremento de conscincia coletiva em matria de higiene no pode ser mais do que benfico para a sade (BOURGEOIS et al., 1988).

A alimentao dentro dos padres higinicos satisfatrios uma das condies essenciais para a promoo e manuteno da sade, sendo que a deficincia nesse controle um dos fatores responsveis pela ocorrncia de surtos de doenas transmitidas por alimentos (OLIVEIRA et al., 2003).

Os microrganismos esto intimamente associados com a disponibilidade, a abundncia e a qualidade do alimento para o consumo humano. Alimentos so facilmente contaminados com microrganismos na natureza, durante manipulao e processamento. Aps ter sido contaminado, o alimento serve como meio para o crescimento de microrganismos, os quais se tiverem condies de crescer, podem mudar as caractersticas fsicas e qumicas desse alimento, causando sua deteriorao (PELCZAR et al., 1996).

O controle sanitrio dos alimentos se constitui em um conjunto de normas e tcnicas utilizadas para verificar se os produtos alimentcios esto sendo produzidos, manipulados e distribudos de acordo com as boas prticas de manipulao e fabricao de alimentos. Quando isto no obedecido, muitos microrganismos patognicos como Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Salmonella, Bacillus cereus, por exemplo, podem contaminar o alimento, tornando este um fator de risco a sade do consumidor. A presena de coliformes geralmente considerada indicadora de ms condies higinico-sanitrias (BENEVIDES et al., 2004).

A anlise microbiolgica dos alimentos para se verificar a presena de microrganismos fundamental para se conhecer as condies de higiene nas quais estes alimentos foram preparados (BRUM & RIBEIRO, 2001).

3.2 Salmonella spp.


Os insetos, os roedores, os pssaros, as pessoas podem contaminar os gros com Salmonella, Escherichia, Shigella ou Klebsiella. Destes gneros, as salmonelas so as que trazem mais problemas (BROOKS, 1969 apud ICMSF, 1980). O gnero Salmonella spp. compreende espcies de bactrias na forma de bacilos Gramnegativos, anaerbicos facultativos e no formadores de esporos. Seu habitat normal o trato intestinal dos seres humanos e muitos animais. (TORTORA et al., 2003).

As infeces humanas produzidas por salmonelas em geral ocorrem por ingesto de alimentos, gua ou leite contaminados por fezes humanas ou de animais. As salmonelas so primariamente patgenos de animais (aves domsticas, sunos, pssaros, ovinos), os quais so as principais fontes de salmonelose no-tifide em humanos (KONEMAN et al., 2001).

A Salmonella um dos microrganismos mais envolvidos em casos e surtos de doenas de origem alimentar em diversos pases, inclusive o Brasil. A sua patogenicidade varia de acordo com o tipo sorolgico, idade e condies de sade do hospedeiro. As doenas causadas costumam ser divididas em febre tifide, febre entrica e enterocolite ou salmonelose. (FRANCO et al., 2001 apud BALIONI, 2003).

3.3 Coliformes Totais e Termotolerantes (Fecais)

O grupo dos Coliformes so definidos como bastonetes Gram-negativos aerbios ou anaerbios facultativos, no formadores de endsporos. Como algumas bactrias do grupo no so enterobactrias, e sim bactrias comumente encontradas em amostras de plantas e solo, muitos padres para alimentos e gua especificam a identificao de coliformes termotolerantes. O coliforme termotolerante predominante a Escherichia coli, que constitui uma grande proporo da populao bacteriana

entre coliformes termotolerantes e no termotolerantes. Em condies normais os coliformes no so por si s patognicos, embora algumas linhagens possam causar diarrias e infeces urinrias oportunistas (TORTORA, et al., 2003).

Em alimentos o ndice de coliformes totais utilizado para avaliar as condies higinicas, de forma que altas contagens significam contaminao ps-

processamento, limpezas e sanificaes deficientes (ZARDEH 2001 apud MATA, 2003).

3.4 Escherichia coli


Escherichia coli a espcie predominante entre os diversos microrganismos anaerbios facultativos que fazem parte da microbiota intestinal de animais de sangue quente. O significado da presena de E. coli em um alimento deve ser avaliado sob dois ngulos. Inicialmente, E. coli, por ser uma enterobactria, uma vez detectada no alimento, indica que esse alimento tem uma contaminao microbiana de origem fecal e, portanto est em condies higinicas insatisfatrias e outro aspecto a ser considerado que diversas linhagens de E. coli so comprovadamente patognicas para o homem e para os animais (FRANCO et al., 1996).

Geralmente o agente E. coli aceito como indicador de contaminao e pode sugerir a possvel ocorrncia e o crescimento de muitos outros patgenos mesfilos e entricos (GILL et al, 1998 apud MATA, 2003).

3.5 Bacillus cereus

O Bacillus cereus uma bactria grande, Gram-positiva, formadora de endsporos que muito comum no solo e na vegetao, e geralmente considerada inofensiva. Contudo, ela foi identificada como causa de surtos de doena veiculada por alimentos (TORTORA, et al., 2003).

As

substncias

alimentares

desidratadas

no

so

estreis,

alguns

microrganismos e particularmente, alguns esporos bacterianos sobrevivero ao

processo de desidratao. Os esporos bacterianos so freqentemente encontrados em cereais e outros alimentos (HOBBS, & ROBERTS., 1993).

O B. cereus, possui ampla distribuio geogrfica, e pode ser encontrado em solos, gua e p ambiental, foi isolado de uma variedade de alimentos, incluindo verduras, carnes, cereais, leite fresco pasteurizado e leite em p. A freqncia de intoxicao alimentar causada por B. cereus, doena mediada por uma toxina, aumentou nos ltimos anos (KONEMAN et al., 2001).

Existem dois tipos reconhecidos de intoxicaes alimentares causadas por B. cereus: o diarrico e o emtico. Ambos so autolimitantes e a recuperao ocorre dentro de 24h. O B. cereus produz toxinas diarricas durante o crescimento no intestino delgado humano, enquanto as toxinas emticas so pr formadas no alimento. O tipo diarrico causado por uma enteroxina diarrica, essa toxina inativada a 56C por 30min, enquanto que o tipo emtico causado por um peptdeo bastante resistente ao calor (126C por 90min). Os sintomas da intoxicao alimentar diarrica so: diarria aquosa, dores abdominais, nuseas e raramente vmitos e os sintomas da intoxicao alimentar emtica so: nuseas, vmitos e dores abdominais com possibilidade de diarria (FORSYTHE, 2002).

4. MATERIAL E MTODOS
4.1 Coleta e procedimento das anlises

As barras de cereais e os cereais matinais foram obtidos em supermercados da cidade de Pelotas e transportados na prpria embalagem at o laboratrio de Microbiologia do Departamento de Microbiologia e Parasitologia (DEMP), UFPel para serem analisados. Cada barra de cereal contm 25g, logo uma barra foi destinada para a anlise de Coliformes, outra foi para o teste de Salmonella spp. e outras duas barras (50g) foram para o teste de Bacillus cereus. Para os cereais matinais foram pesados 25g para a anlise de Coliformes, 25g para Salmonella spp. e 50g para a anlise de Bacillus cereus. Foram analisados no total 30 amostras, sendo que 20 foram de barras de cereais e dez de cereais matinais, no perodo de maro a setembro de 2005. Antes da realizao das anlises o local e as embalagens foram desinfetados com lcool 70.

4.2 Anlise de Coliformes Totais e Termotolerantes


A metodologia utilizada foi baseada em SILVA et al. (1997). As anlises de Coliformes Totais e Termotolerantes foram feitas atravs da tcnica do Nmero Mais Provvel (NMP). Uma barra de cereal e 25g de cereal matinal foram

homogeneizados, separadamente, com 225mL de gua peptonada 0,1% e submetidos a diluies de 10-1 a 10-4 em tubos com 9mL de gua peptonada. Depois de realizada as diluies, foi inoculado um mL de cada diluio em trs tubos de Caldo Lactosado (CL) c om tubos de Durhan, que foram mantidos a 35C por no mximo 48h, sendo esta etapa presuntiva. Os tubos que apresentaram turbidez e formao de gs dentro dos tubos de Durhan foram considerados positivos, e destes foram retiradas de uma a duas gotas com uma ala de platina e inoculadas em tubos com Caldo Lactose Bile Verde Brilhante (CLBVB) com tubos de Durhan e incubados a 35C por 48h. Para confirmao de coliformes totais, aps este perodo foram considerados positivos aqueles tubos que apresentaram a presena de gs e turbidez do meio de cultura, sendo expressos em NMP.g -1. A partir dos tubos positivos de

coliformes totais foram retiradas de uma a duas gotas do caldo e inoculadas em tubos com Caldo EC contendo tubos de Durhan que foram incubados em banho Maria a 45,5C por 48h. Aps este perodo foi observado a turbidez e produo de gs, sendo estes tubos positivos para coliformes termotolerantes, sendo o resultado expresso em NMP.g-1 (Figura 1).

4.3 Anlise de presena de Escherichia coli


De cada tubo de Caldo EC positivo, foi retirada uma alada do meio e estriada em placas contendo gar Eosina Azul de Metileno (EMB) que foram incubadas a 35C por 24h para a anlise de colnias tpicas de E. coli (nucleadas com centro preto, com ou sem brilho metlico).

Havendo colnias tpicas, foram transferidas duas colnias isoladas de cada placa para tubos contendo gar Nutriente, que foram incubadas a 35C por 48h para posteriores provas bioqumicas de indol, motilidade, produo de H2S, MR-VP e citrato (IMViC) (Figura 1). Todos estes testes podem ser inoculados a partir de uma nica alada de cultura, porm, o teste de citrato deve ser o primeiro, para evitar a introduo de compostos dos outros meios.

Com uma agulha de platina foi inoculada uma alada com inculo bem leve da cultura no tubo com gar Citrato de Simmons, incubando a 35C por 72/96h e se observou o crescimento bacteriano (teste positivo) ou no (teste negativo). O outro teste realizado foi com o gar semi-slido SIM, para verificao da produo de indol, motilidade e produo de H2S, que utilizando a mesma agulha de platina, foi semeado no gar que ser incubado a 35C por 24h. Depois deste perodo foi verificado a motilidade e produo de H2S e para verificao da produo de indol foi adicionado ao meio de cultura cinco gotas do reagente de Kovacs para observar se houve a degradao do aminocido Triptofano e produo de Indol, o que se observa pelo desenvolvimento de um anel vermelho na superfcie do meio (teste positivo) ou se o anel permanecer amarelo da mesma cor do reagente (teste negativo). Para a realizao dos testes de Vermelho de Metila (VM) e Voges-Proskauer (VP), utilizou-se dois tubos com o Caldo MR-VP que foram incubados a 35C por 48h para o teste de VP e 96h para o teste de VM. Para o teste de VP, foi adicionado nos

tubos 0,6 mL de soluo de a naftol 5% e agitou-se, adicionando em seguida 0,2mL de KOH 40%, onde deve ser observado por at uma hora o desenvolvimento de uma cor rosa no meio de cultura (teste positivo), a permanncia do meio na cor do reagente marrom ser teste negati vo. Para o teste de VM foram adicionadas cinco gotas de soluo de vermelho de metila, sendo observado imediatamente uma colorao vermelha do meio sendo o teste positivo. As reaes bioqumicas no teste de IMViC caractersticas para E. coli esto apresentadas na Tabela 1.

Tabela 1: Reaes bioqumicas caractersticas de Escherichia coli nos testes de IMViC. IMViC CITRATO INDOL SIM MOTILIDADE H2S VP MR-VP VM

+/-

+/-

FONTE: MATA, 2003

10-1 25 g da amostra + 225mL de gua peptonada Homogeneizao 1 mL

10-2 1 mL

10-3 1 mL

10-4

9 mL H2O peptonada 1 mL Teste Presuntivo: Caldo Lactosado 1 mL 1 mL 1 mL

Incubao a 35C/48 h

Teste 1 alada confirmativo Coliformes Teste Totais: Caldo confirmativo 1 alada Lactose Bile Coliformes Termotolerantes: Verde Brilhante Caldo EC Tabela Tabela NMP NMP Teste confirmativo E. coli gar EMB Incubao a 45,5C/48h Incubao a 35C/48h

gar Nutriente Provas Bioqumicas

Citrato MR

VP

SIM

Figura 1 Anlise de Coliformes Totais e Termotolerantes (adaptado de SILVA et al., 1997).

4.4 CONTAGEM DE Bacillus cereus

A metodologia utilizada foi baseada em SILVA et al, (1997). A contagem de Bacillus cereus foi feita atravs da tcnica de Unidade Formadora de Colnia (UFC). Duas barras de cereais e 50g de cereal matinal foram homogeneizadas, separadamente, com 450 mL de gua peptonada 0,1% e as diluies foram feitas da 10-1 a 10-3 em tubos com 9mL de gua peptonada. Foi inoculado um mL da primeira diluio distribudas em quatro placas de gar manitol gema de ovo polimixina (MYP) espalhando o inculo com ala de Drigalski at que o meio absorvesse o inculo. As demais diluies foram semeadas em duplicata com 0,1mL em cada placa e o inculo espalhado com a ala de Drigalski. recomendado que se utilize uma ala estril para cada diluio, porque a flambagem com lcool no eliminar os esporos. As placas foram incubadas a 35C por 48h (Figura 2).

Logo aps foram selecionadas placas com 10 a 100 colnias, contendo no mais do que 30 colnias tpicas, ou seja, esfricas com a colorao rsea leitosa, com bordas perfeitas, planas, secas, rodeadas por um grande halo de precipitao devido reao da lecitinase sobre a gema de ovo. As colnias suspeitas de serem B. cereus foram repicadas em gar Nutriente e incubadas a 35C por 48h para posteriores provas bioqumicas (Figura 2).

Teste de decomposio de tirosina: Foram feitas estrias com o inculo da ala de platina em placas de gar Tirosina incubando a 35C por at 10 dias para observao do desenvolvimento de uma zona clara e transparente de decomposio e dissoluo de cristais de tirosina (teste positivo) podendo o meio ficar com uma colorao castanha.

Teste de Voges-Proskauer (VP): Foi inoculado por disperso no caldo VP e incubado a 35C por 48h, adicionando 0,6mL de a naftol 5% e 0,2mL de KOH 40%, agitando o tubo e deixando descansar por uma hora aparecendo a cor vermelha (teste positivo) e a permanncia do meio na cor amarela (teste negativo).

Teste de reduo do nitrato : Foi inoculado no tubo com o caldo nitrato e incubado a 35C por 24h e aps este perodo adicionou-se de 3 a 4 gotas do reativo de Zambelli e tambm de 3 a 4 gotas de Hidrxido de Amnia, verificando o desenvolvimento da cor laranja (teste positivo).

Teste de hidrlise de gelatina : Foi transferida uma alada da cultura para as placas de gar Gelatina, fazendo uma estria na superfcie do meio incubando a 30C por 24h, logo aps cobriu-se toda a superfcie do gar com o reagente de Frazier observando o desenvolvimento de um halo transparente ao redor da estria da cultura (teste positivo) ou ausncia deste halo (teste negativo).

Teste de motilidade em meio SIM : Foi inoculado com uma picada no meio e incubado a 35C por 48h, verificando o deslocamento do crescimento em regies fora da picada, o B. cereus geralmente mvel.

Teste de verificao de crescimento rizide: Foram utilizadas placas com gar Nutriente onde foi depositada uma alada da cultura bem no centro do meio, sem espalhar, incubando a 35C por 48h tendo que observar se a colnia apresentou crescimento rizide, caracterstico das cepas da variedade mycoides.

Teste do manitol: Foi inoculada uma alada no tubo com o caldo manitol e incubou-se a 35C por 48h e aps este perodo observou-se a cor do manitol (roxa) que permaneceu inalterada (teste positivo) o u caso tenha ficado amarelo (teste negativo). As cepas do Bacillus cereus no fermentam o manitol.

Teste de Lecitinase: Foram utilizadas placas de gar MYP onde foi depositada uma alada da cultura no centro do meio, incubando a 35C por 48h. As colnias de Bacillus cereus so caracterizadas por um grande halo de precipitao, indicando a degradao da lecitina.

Teste da atividade hemoltica: Foi repicada a cultura por esgotamento em gar Sangue de carneiro incubando a 35C por 48h onde se observou a formao

do halo devido atividade hemoltica, sendo as cepas de B. cereus fortemente hemolticas.

Tabela 2: Reaes bioqumicas caractersticas do Bacillus cereus. Caractersticas Degradao de Tirosina Bacillus cereus +

Reao de VP

Reduo do Nitrato

Hidrlise de Gelatina

Motilidade

Crescimento Rizide

Reduo do Manitol

Reao de Lecitinase

Atividade Hemoltica
+ positivo - negativo

25 g da amostra+ 225mL de gua peptonada Homogeneizao

10 -1 1mL

10-2 1mL

10-3

gar Manitol Gema de Ovo Polimixina

9mL H2O 0,3mL0,3mL0,2mL0,2mL peptonada Incubao a 35C/48h 0,1mL 0,1mL 0,1mL 0,1mL

Colnias Suspeitas

Colorao de Gram: Bacilo Gram +

gar Nutriente Incubar a 35C/48h

Provas Bioqumicas

Degradao de Tirosina

Teste do VP

Teste de Motilidade Crescimento Rizide

Teste de reduo do Nitrato Teste de Lecitinase

Atividade Hemoltica

Hidrlise de gelatina

Teste do Manitol

Figura 2 Anlise de Bacillus cereus (adaptado de SILVA et al., 1997)

4.5 DETECO DE Salmonella spp.

A metodologia recomendada para a deteco de Salmonella spp., segue basicamente cinco etapas que podem ser aplicadas a qualquer tipo de alimento segundo SILVA et al, (1997). A primeira etapa foi o pr enriquecimento em caldo no seletivo onde foram homogeneizadas uma barra de cereal (25g) e 25g de cereal matinal, separadamente, em 225mL de Caldo Lactosado incubados a 35C por 24h. Na prxima etapa foi feito o enriquecimento em caldos seletivos sendo inoculado um mL do pr enriquecimento para tubos com 10mL dos Caldos Tetrationato e Selenito e 0,1mL para o Caldo Rappaport sendo todos mantidos a 35C por 24h. Logo aps este perodo foi feito o plaqueamento seletivo diferencial em placas contendo Agar Hektoen-Enteric (HE) e Agar Xilose Lisina Desoxicolato (XLD) com o objetivo de isolar colnias tpicas de Salmonella spp. O material para o cultivo em HE e XLD foi obtido a partir dos caldos seletivos, sendo retirado de cada caldo uma a duas aladas de inculo com a ala de platina (Figura 3). No gar HE as colnias de Salmonella spp. so colnias verde-azuladas, com ou sem centro preto, onde cepas fortemente produtoras de H2S podem produzir colnias inteiramente pretas, colnias fermentadoras de lactose ou sacarose so de cor roscea. No gar XLD so colnias de cor rosa escuro, com ou sem centro preto, cepas fortemente produtoras de H2S podem produzir colnias com centro preto grande e brilhante ou inteiramente preto, cepas fermentadoras de lactose ou sacarose produzem colnias amarelas com ou sem centro negro. Havendo resultados positivos para Salmonella spp., estas foram submetidas a identificao sorolgica usando os soros anti-Salmonella somtico polivalente (Figura 3).

Depois deste perodo foram feitas as provas bioqumicas com as colnias tpicas de Salmonella spp.:

Agar Trplice de Ferro (TSI): Colnia tpica foi semeada na superfcie do meio com uma agulha de platina e logo aps introduzida at o fundo do meio, incubando a 35C por 24h, foi observado no Agar TSI a mudana de colorao (teste positivo) ou continuou igual (teste negativo).

Agar Lisina Ferro (LIA): Colnias tpicas foram introduzidas at o fundo do meio duas vezes com o auxlio da agulha de platina e incubadas a 35C por 24h, logo aps foi observado se o meio que roxo permaneceu inalterado (teste positivo) ou mudou para amarelo (teste negativo).

Caldo Uria: As colnias foram semeadas com o auxlio da ala de platina e incubadas a 35C por 24h, depois foi observado se o meio no mudou de cor (teste positivo) ou mudou de cor (teste negativo).

25 g da amostra + 225mL de Caldo Lactosado

Homogeneizao

Incubar a 35C/24 h

0,1mL

1mL

1mL

Caldo Rapapport

Caldo Tetrationato Incubar a 35C/24 h

Caldo Selenito

XLD

HE

XLD

HE

XLD HE

Incubar a 35C/48 h

Provas Bioqumicas

LIA

TSI

URIA

Incubar a 35C/48 h

Sorologia: pesquisa do Ag somtico

Figura 3 Deteco de Salmonella spp. (adaptado de SILVA et al., 1997).

5. RESULTADOS

Dentre as 30 amostras analisadas, 20 de barra de cereais e dez de cereais matinais, duas (10%) amostras de barra de cereais e uma (10%) amostra de cereais matinais apresentaram colnias caractersticas de Bacillus cereus, conforme mostra a tabela abaixo, no apresentando isolamento de Coliformes Termotolerantes e Salmonella spp. Dos resultados encontrados verificou-se a contaminao com B. cereus com contagem de 1,9 x 102 UFC.g -1 e 1,7 x 102 UFC.g -1 nas barras de cereais e 1,0 x 104 UFC.g -1 nos cereais matinais, este acima do previsto pela ANVISA (Tabela 3).

Tabela 3 - Contagem de Bacillus cereus nas amostras positivas de barras de cereais e cereais matinais comercializados em Pelotas, RS em 2006. Amostras Resultados (UFC.g -1)* ANVISA** (UFC.g -1)*

Barra de cereal n2 Barra de cereal n10 Cereal matinal n09


* UFC (Unidade Formadora de Colnia)

1,9 x 102 1,7 x 102 1,0 x 104

5,0 x 102 5,0 x 102 5,0 x 103

** ANVISA (Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria)

Aps a contagem das colnias caractersticas de B. cereus foram realizados os testes bioqumicos, para confirmao do microrganismo B. cereus nas trs amostras positivas, conforme mostram as Figuras 4 a e Figura 4 b.

A Teste positivo de decomposio de tirosina em Agar Tirosina.

B Teste positivo de Voges Proskauer em Caldo MR VP.

C Teste positivo de reduo do nitrato Caldo Nitrato.

D Teste de hidrlise de gelatina em Agar Gelatina.

E Teste positivo de motilidade em meio de SIM.

F Teste do crescimento rizide em Agar Nutriente.

Figura 4 a: Provas bioqumicas realizadas para identificao de Bacillus cereus encontrado nas amostras positivas.

G Teste do manitol em Caldo Manitol.

H Teste de lecitinase em Agar MYP.

I Teste de atividade hemoltica em Agar Sangue de Carneiro.

Figura 4 b: Provas bioqumicas realizadas para identificao de Bacillus cereus encontrado nas amostras positivas.

6. DISCUSSO

As barras de cereais e os cereais matinais so compostos por vrios gros de cereais como, trigo, aveia, milho, cevada, arroz e tambm de frutas desidratadas como; banana, uva passa, morango, ma, coco, mamo dentre outras alm de chocolate e mel. Todos esses componentes contm protenas, fibras, carboidratos, vitaminas essenciais para manuteno da sade podendo ser consumidos de maneira fcil e rpida.

De acordo com McKEVITH (2004), os cereais so produtos bsicos para alimentao fornecendo uma grande variedade de macro e micro nutrientes para populao mundial e um grande consumo de cereais est associado com um decrscimo do risco de desenvolver srias doenas crnicas.

Para OLIVEIRA (2006), a aveia que um alimento funcional (previne e ajuda a tratar doenas) um produto dos cereais matinais e das barras de cereais que auxilia a controlar o diabete, a hipertenso e o colesterol ruim, tudo isso graas ao betaglucano que um tipo de fibra solvel presente nesse cereal. Ela impede o aumento da glicemia, melhora a circulao sangnea e atua no intestino, inibindo a absoro de gorduras.

Porm, desde a colheita dos gros que j podem estar expostos a uma grande variedade de microrganismos atravs da gua, p, plantas enfermas (ICMSF, 1980) at passar por todas as etapas de processamento para compactao das barras e a produo dos cereais matinais (FIGURAS 5 e 6), podem tambm ocorrer vrias contaminaes durante esse percurso com diversos microrganismos podendo comprometer a sade do consumidor, uma vez que, os esporos do B. cereus so ativados pela ao trmica, ou seja, so termorresistentes podendo germinar e os bacilos se multiplicarem rapidamente (MURRAY et al., 2004).

Dentre as trs amostras que apresentaram B. cereus das 30 analisadas neste trabalho, apenas a contaminao de cereais matinais estava acima dos padres previstos pela ANVISA, que estabelece o mximo de 5,0 x 103 UFC.g-1, j que as demais amostras de barras de cereais apresentaram contagem inferior ao limite permitido de 5,0 x 102 UFC.g -1.

LACA et al. (2006), constatou que a composio microbiana dos cereais est relacionada ao armazenamento dos gros, onde a alta umidade permite o crescimento dos microrganismos alterando assim, as propriedades do produto, sendo, 13% de umidade considerado o valor mximo para armazenar trigo, milho, cevada e arroz durante um curto perodo, j que os gros midos parecem sofrer a ao fermentativa devido a ao ltica e de coliformes.

De acordo com JAY (1992), estes produtos tm um elevado contedo de protenas e de carboidratos, sua aw (atividade da gua) to baixa que, se armazenar convenientemente, limitam o crescimento de todos os microrganismos. Portanto, provavelmente este fator foi limitante para o no desenvolvimento de Salmonella spp. e E. coli.. FORSYTHE (2002), define como atividade da gua a medida da gua disponvel em uma amostra. A aw a razo entre a presso do vapor da gua da amostra e a da gua pura, mesma temperatura. Para o B. cereus a aw mnima de 0,930, para E. coli de 0,935 e para Salmonella spp. de 0,940. E nos gros a aw fica em torno de 0,87 0,80 o que, possivelmente, dificultou o crescimento bacteriano nas amostras analisadas neste trabalho.

DUC et al. (2005) analisaram amostras de um produto infantil a base de cereais, envolvidos em doenas de origem alimentar e foi verificada a contaminao de dois tipos de bactrias esporognicas Bacillus subtilis e B. cereus. Como ocorreu neste trabalho, presena de B. cereus em uma amostra de cereais matinais.

BRUM et al. (2001), estudaram 30 amostras de diversos alimentos amilceos obtidos no comrcio de Pelotas-RS e obtiveram apenas uma amostra de aveia cereal que tambm faz parte da composio das barras de cereais e cereais matinais com ndice acima do permitido, pela Legislao Vigente, para B. cereus que foi de

8,0 x 102 UFC.g -1. Semelhante ao encontrado em nosso estudo, onde apenas uma amostra foi encontrada este microrganismo.

Analisando barra de cereal caseira elaborada com biscoito de amido de milho, acar, leite em p desnatado, flocos de arroz, aveia em flocos, xarope de glicose de milho, uva passa e damasco seco, BRITO et al. (2004) no encontraram Salmonella spp. e Coliformes Termotolerantes. Resultados compatveis aos encontrados neste trabalho.

ICMSF (1980), verificou que os indicadores fecais (coliformes) esto em pequena concentrao nos gros no campo, a menos que haja uma considervel atividade animal no local. O B. subtilis e B. cereus esto presentes em pequeno nmero e Staphylococcus aureus e as espcies de Salmonella no so detectadas nas distintas investigaes efetuadas nos gros no campo nos pases ocidentais. De acordo com FORSYTHE (2002), a sobrevivncia dos coliformes no solo de 30 dias o que dificultaria sua permanncia nos gros.

7. CONCLUSO

Pode-se concluir que as barras de cereais esto dentro dos padres previstos pela ANVISA. J os cereais matinais embora tenha-se analisado um nmero pequeno , verificou-se que uma amostra estava acima do permitido, ento cabe ao consumidor verificar as condies de embalagem e armazenamento do produto no local de comercializao.

COLHEITA ? SECAGEM ? ARMAZENAGEM ? DISSOLUO ? PREPARAO ? FORMATAO ? EMBALAGEM ? EXPEDIO


Figura 5 Fluxograma do processo de fabricao de barra de cereais.
Fonte: adaptado do site - http://www.ufrgs.br/alimentus/feira/prcerea/barracereal/flux.htm Acessado em 27/04/06.

COLHEITA ? SECAGEM ? ARMAZENAMENTO ? DEGERMINAO ? SECAGEM ? MOAGEM ? MISTURA ? COZIMENTO ? PR-SECAGEM ? LAMINAO ? PR-SECAGEM ? TORREFAO ? RESFRIAMENTO ? COBERTURA ? ENVASE DE ACAR ? NATURAL

Figura 6 Fluxograma do processo de fabricao de cereais matinais.


Fonte: adaptado do site - http://www.ufrgs.br/Alimentus/feira/prcerea/matinal/flux.htm Acessado em 27/04/06.

8. REFERNCIAS
(ANVISA), Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria, Disponvel em: <www.anvisa.gov.br > acesso em 13 de mar de 2005.

BALIONI, G. A; FERNANDES F. V.; SOARES, M. M. S. R.; RIBEIRO, M. C. Avaliao higinico-sanitria de alfaces agro-ecolgicas e cultivadas com agrotxico, comercializadas na regio de Campinas, SP. Revista Higiene Alimentar, v. 17, n. 112, p.74, set/2003.

BENEVIDES, C.M.J.; LOVATTI, R.C.C. Segurana alimentar em estabelecimentos processadores de alimentos. Revista Higiene Alimentar, v.18, n. 125, p. 24 e 26, out/2004.

BEYER, L., FONSECA, R., MESQUITA, J.: Fluxograma barra de cereais. Disponvel em: < http://www.ufrgs.br/alimentus/feira/prcerea/barracereal/flux.htm> acesso em 27 abr de 2006.

BOURGEOIS, C.M.; MESCLE, J.F.; ZUCCA, J. Microbiologia Alimentaria: Aspectos microbiolgicos de la seguridad y calidad alimentaria, v. 1, Ed. Acribia S.A Zaragoza, 1988, p. 64.

BRITO, I.P. de; CAMPOS, J.M.; SOUZA, T.F.L. de; WAKIYAMA, C.; AZEREDO, G.A. de, Elaborao e avaliao global de barra de cereais caseira. Boletim Centro de Pesquisa e Processamento de Alimentos Sistema Eletrnico de Revistas v.22, n.1, p. 35-50, UFPR-Curitiba, jan/jun 2004. Disponvel em: <www.ufpr.br> acesso em 18 mar de 2006.

BRUM, A. A. RIBEIRO, G. A.; Ocorrncia de Bacillus cereus em diferentes alimentos a base de amido no comrcio da cidade de Pelotas-RS (resultado parcial). In: XXI Congresso Brasileiro de Microbiologia, 21, AL-123, p. 397, Foz do Iguau, PR. Resumos... Foz do Iguau, Armazm das Letras, 2001.

DUC, H. L.; DONG, C. T.; LOGAN, A. N.; SUTHERLAND, D. A.; TAYLOR, J.; CUTTING, M. S. Cases of emesis associated with bacterial contamination of infant breakfast cereal product. International Journal of Food Microbiology, v.102, issue 2, p. 245-251, 2005. FORSYTHE, S.J. Microbiologia da Segurana Alimentar, Ed. Artmed, 2002, p. 14, 36, 39, 40, 176 e 177. FRANCO, B.D.G.M.; LANDGRAF, M. Microbiologia dos Alimentos, Ed. Atheneu, 1996, p. 52.

FRAZIER, W.C.; WESTHOFF, P.C.; Microbiologia de los alimentos, 4 ed., Ed. Acribia S.A Zaragoza, 1993, p. 229. HOBBS, B. C.; ROBERTS, D.; Toxinfeces e Controle Higinico-Sanitrio de Alimentos, Livraria Varela, 1993, p. 29 e 70.

(ICMSF), International Commission on Microbiological Specifications for Foods Ecologia Microbiana de los Alimentos: Productos alimentcios, v. 2, Ed. Acribia S.A. Zaragoza, 1980, p. 678-698.

JAY, J.M. Microbiologia moderna de los alimentos, 3 ed., Ed. Acribia S.A. Zaragoza, 1992, p. 279, 280 e 513.

KONEMAN, W. E.; ALLEN, D. S.; JANDA, M. W.; SCHRECKENBERGER, C. P.; WINN Jr., C. W. Diagnstico Microbiolgico - Texto e Atlas Colorido, 5 ed., Ed. Medsi, 2001, p. 209 e 668.

LACA, A.; ZOE, M.; DIAZ, M.; WEBB, C.; PANDIELLA, S. S. Distribution of microbial contamination within cereal grains. Journal of Food Engineering, v. 72, issue 4, p.332-338, 2006.

MATA,

M.

M.

Avaliao

Microbiolgica

de

Lingia

Suna

Frescal

Comercializada em feira-livre na cidade de Pelotas-RS, 2003, p.19, Monografia de concluso de curso, Universidade Federal de Pelotas, RS, McKEVITH, B. Nutrition aspects of cereals. Nutrition Bulletin British Nutrition Foundation, v. 29, issue 2, p. 111-142, 2004.

MURRAY, P. R.; ROSENTHAL, K. S.; KOBAYASHI, G.S.; PFALLER, M. A.; Microbiologia Mdica, 4 ed., Ed. Guanabara Koogan, 2004, p. 227.

OLIVEIRA, A. M.; GONALVES, M. O; SHINOHARA, N. K. S.; STAMFORD, T. L. M.; Manipuladores de alimentos: um fator de risco. Revista Higiene Alimentar, v. 17, n.114/115, 2003, p. 12. OLIVEIRA, L. H. Aveia, a primeira da turma. Revista Sade! vital, n. 273, maio/2006, p. 16.

PAULA

VANELLI:

Fluxograma

cereais

matinais.

Disponvel

em:

<http://www.ufrgs.br/Alimentus/feira/prcerea/matinal/flux.htm> acesso em 27 abr de 2006.

PELCZAR Jr., M J.; CHAN, E.C.S.; KRIEG, N.R. Microbiologia: conceitos e aplicaes, 2 ed., v.2, 1996, p.372.

ROITMAN, I.; TRAVASSOS, L.R.; AZEVEDO, J.L. Tratado de Microbiologia, Ed. Manole Ltda., v.1, 1988, p.15 e 30. SILVA, N.; JUNQUEIRA, V.C.A; SILVEIRA, N.F.A. Manual de mtodos de anlise microbiolgica de alimentos, So Paulo: Livraria varela, 1997, 119p.

TORTORA, G. J.; FUNKE, B. R.; CASE, C. L. Microbiologia, 6 ed., Ed. Artmed, 2003, p.664, 671 e 729.

ANEXOS

GUA PEPTONADA (0,1%) Peptona gua destilada pH 7,0 1,0g 1000mL

CALDO LACTOSE BILE VERDE BRILHANTE (2%) Bile de boi (oxgall) Peptona Lactose Verde Brilhante(13,3mL de soluo aquosa 0,1%) Diluir em 1000mL de gua destilada pH 7,2 20,0g 10,0g 10,0g 0,0133g

CALDO LACTOSADO Extrato de carne Peptona Bacteriolgica Lactose Diluir em 100mL de gua destilada pH 6,9 3g 5g 5g

CALDO EC Triptose Lactose Sais Biliares n3 Fosfato monocido de potssio Fosfato bicido de potssio Cloreto de Sdio Diluir em 1000mL de gua destilada pH 6,9 20g 5g 1,5g 4g 1,5g 5g

CALDO SELENITO CISTINA Triptona Lactose Fosfato dissdico Selenito cido de sdio L cistina Diluir em 1000mL de gua destilada pH 7,0 5,0g 4,0g 10,0g 4,0g 0,01g

CALDO TETRATIONATO Proteose peptona Sais biliares Tiossulfato de sdio Carbonato de clcio Diluir em 1000mL de gua destilada pH 8,4 suplemento Soluo de iodo Soluo 0,1% verde brilhante (opcional) 5,0g 1,0g 30,0g 10,0g

0,2mL/10mL base 0,1mL/10mL base

CALDO RAPPAPORT Peptona de farinha de soja Cloreto de magnsio hexahidrato Cloreto de sdio Fosfato dopotssico Dihidrogeno fosfato potssico Verde malaquita Diluir em 1000mL de gua destilada pH 5,2 CALDO URIA Peptona Dextrose Cloreto de sdio Fosfato monopotssico Uria Vermelho de fenol (6mL de soluo 0,2%) Diluir em 1000mL de gua destilada pH 6,8 1,0g 1,0g 5,0g 2,0g 20,0g 0,012g 4,5g 29,0g 8,0g 0,4g 0,6g 0,036g

GAR EOSINA AZUL DE METILENO (EMB)

Peptona Lactose Fosfato dipotssico Eosina amarela (20mL da soluo aquosa 2%) Azul de metileno (26mL da soluo aquosa 0,25%) gar Diluir em 1000mL de gua destilada pH 7,1

10,0g 10,0g 2,0g 0,4g 0,065g 15g

GAR XLD Extrato de levedura L lisina Xilose Lactose Sacarose Desoxicolato de sdio Citrato frrico amoniacal Tiossulfato de sdio Vermelho de fenol (40mL soluo 0,2%) gar Diluir em 1000mL de gua destilada pH 7,4 3,0g 5,0g 3,75g 7,5g 7,5g 2,5g 0,8g 5,0g 0,08g 15g

GAR TRPLICE ACAR DE FERRO (TSI) Extrato de carne Extrato de levedura Peptona Proteose peptona Dextrose Lactose Sacarose Sulfato ferroso Cloreto de sdio Tiossulfato de sdio Vermelho de fenol (12mL da soluo 0,2%) gar Diluir em 1000mL de gua destilada pH 7,4 3,0g 3,0g 15,0g 5,0g 1,0g 10,0g 10,0g 0,2g 5,0g 0,3g 0,024g 12,0g

GAR ENTRICO DE HECTOEN (HE) Proteose peptona Extrato de levedura Sais biliares n3 Lactose Sacarose Salicina Cloreto de sdio Tiossulfato de sdio Citrato frrico amoniacal Azul de bromotimol (32,5mL da soluo 0,2%) Fucsina cida gar Diluir em 1000mL de gua destilada pH 7,5 12,0g 3,0g 9,0g 12,0g 12,0g 2,0g 5,0g 5,0g 1,5g 0,65g 0,1g 14,0g

GAR LISINA DE FERRO (LIA) Peptona Extrato de levedura Dextrose Cloridrato de L lisina Citrato frrico amoniacal Tiossulfato de sdico Prpura de bromocresol (2mL soluo 1%) gar Diluir em 1000mL de gua destilada pH 6,7 5,0g 3,0g 1,0g 10,0g 0,5g 0,04g 0,02g 15,0g

GAR MANITOL GEMA DE OVO POLIMIXINA (MYP) Extrato de carne Peptona D manitol Cloreto de sdio Vermelho de fenol (12,5mL da soluo 0,2%) gar Diluir em 1000mL de gua destilada pH 7,1 GAR NUTRIENTE Extrato de carne Peptona Diluir em 1000mL de gua destilada pH 6,8 3,0g 5,0g 1,0g 10,0g 10,0g 10,0g 0,025g 15,0g