INTRODUO:

Tecnologias de sequenciamento de nova gerao (a partir de 2005); Estudos de genmica funcional e estrutural; Sequenciar milhes de pares de bases em uma nica corrida;

Plataforma 454 FLX da Roche e a Solexa da Illumina.

The GS Junior System brings the power of 454 Sequencing Systems

O SEQUENCIADOR 454 GS FLX:

Sequencia at 500 milhes de pares de bases de DNA (10 horas); Gera informaes muitas vezes maior que o sequenciamento de Sanger; Sequenciamento de genomas rpido e barato ;

Clonagem in vitro em suporte slido ( clones bacterianos, separao em gel)

The GS Junior System includes a high-performance desktop computing station and a complete suite of point-andclick data analysis software.

GS FLX Titanium

- Leitura de fragmentos de DNA de 450pb (outros pirosequenciadores 250pb);

- Leituras por corrida: 1.000.000pb;

- Preciso: 99,995%; - Tempo de corrida: 10 horas

Suporte de sequenciamento

SEQUENCIADOR 454 GS FLX:

Fonte: www.roche-applied-sciense.com

Fonte: www.roche-applied-sciense.com

(a)

(b)

(c)

Biblioteca de DNA

DNA genmico

(a) O DNA mecanicamente fragmentado em sequncias de 300-800pb. (b) O DNA ligado a adaptadores A (3) e B (5) em suas extremidades.

(c) Separao das fitas e os fragmentos A/B so selecionados para o sequenciamento.

- Ligao de adaptadores a fragmentos

de DNA fosforilados;

-Somente os fragmentos A-B so especificamente ligados s microesferas. - OBS: O sistema de preparo de amostra mais simplificado em relao ao sistema de Sanger, o que contribui para diminuir os custos.

TCNICA DO PIROSEQUENCIAMENTO:

Fig. 1: Combinao de reaes enzimticas, que se inicia com a liberao de um PPi, oriundo da adio de um desoxinucleotdeo cadeia. O PPi convertido em ATP, pela ATP sulfurilase, sendo este utilizado pela luciferase para oxidar a luciferina, produzindo um sinal de luminoso.