TESTE DE COOMBS DIRETO

Antonio Altair M. Oliveira Domenico H.G.P.Barbieri Lcia Helena M. Bruneri Primavera Borelli

1. PRINCPIO Os anticorpos ditos incompletos imunes, quando em contato com hemcias que contenham o antgeno correspondente, fixam-se na membrana das mesmas, bloqueando o antgeno; no tm, entretanto, a capacidade de aglutinar estas hemcias. O soro de Coombs (soro antiglobulina humana) capaz de promover a aglutinao dessas hemcias, ditas sensibilizadas. Atravs do Teste de Coombs Direto pode-se evidenciar os anticorpos contra antgenos dos eritrcitos, isto , se in vivo h anticorpos incompletos aderidos membrana eritrocitria. 2. TCNICA a) preparar uma suspenso salina (5%) das hemcias a serem testadas; b) colocar 2 gotas desta suspenso em 1 tubo de 12 x 75 mm, adicionar soluo fisiolgica e centrifugar a 3.000 r.p.m. por um minuto; c) desprezar (com cuidado) o sobrenadante deixando o boto de hemcias no fundo do tubo; d) repetir a operao mais duas vezes. Na ltima operao, com auxlio de papel de filtro, procurar desprezar toda a soluo salina. Quando se tratar de sangue umbilical, lavar as hemcias no mnimo oito vezes; e) adicionar duas gotas de soro de Coombs; f) centrifugar baixa rotao (1.000 r.p.m) por 15 segundos; g) leitura: agitar levemente o tubo e observar se h aglutina dos eritrcitos. 3. INTERPRETAO No h aglutinao .......................... Teste de Coombs Direto NEGATIVO

Presena de aglutinao (de a + a ++++): Teste de Coombs Direto POSITIVO

TESTE DE COOMBS INDIRETO

1. PRINCPIO Quando um soro que contenha anticorpos incompletos for incubado, em um timo de temperatura, com hemcias que contenham o antgeno correspondente, os anticorpos fixa-se superfcie destas hemcias e bloqueiam o antgeno. As hemcias assim bloqueadas (sensibilizadas) sero reveladas pelo soro de Coombs (soro antiglobulina humana). Atravs do teste de Coombs Indireto, pesquisa-se a presena de anticorpos incompletos ou imunes presentes no soro. 2. TCNICA a) preparar uma suspenso salina a 5% com hemcias conhecidas quanto ao antgeno e cujo anticorpo correspondente se deseja detectar (o mais comum a deteco de anticorpos anti- Rh positivo, anti-D). As hemcias devem ser compatveis com o soro quanto ao sistema ABO (comumente empregam-se hemcias do grupo O, Rh positivo); b) colocar duas gotas da suspenso em um tubo de 12 x 75 mm e lavar trs vezes com soluo salina; c) adicionar duas gotas do soro a ser testado; d) misturar e incubar em banho a 37oC, durante 30 a 45 minutos; e) a seguir, lavar as hemcias trs vezes com soluo salina e adicionar o soro anti-globulina humana (duas gotas); f) agitar e centrifugar a 1.000 r.p.m. por 15 segundos; g) proceder a leitura h) presena de aglutinao: Teste de Coombs Indireto Positivo ausncia de aglutinao; Teste de Coombs Indireto Negativo OBSERVAES: 1. aconselhvel o emprego de controles positivos e negativos. 2. Nos casos da prova de Coombs Indireta ser positiva, o soro dever ser diludo em salina (1/2, 1/4, 1/8, 1/16, etc) e repetir a prova em cada um dos tubos. O ttulo ser dado pela ltima diluio com resultado positivo (cuidado com o fenmeno de zona ). 3. a pesquisa de anticorpos poder ser feita em meio salino (sem emprego do soro de Coobs); em meio albuminoso (albumina) ou ainda utilizando-se hemcias previamente tratadas por enzimas (tripsina, etc).

3. PRECAUES Tanto para as determinaes do Fator Rh em tubo, provas de Coombs Direta e Indireta, necessrio que se tome uma srie de cuidados. a) no colocar hemcias em excesso na suspenso, pois poder haver formao de um boto muito grande, levando eventualmente, a um resultado falsamente positivo. b) o tempo de incubao no dever ser inferior a 30 minutos. c) a centrifugao final no deve exceder ao tempo e a r.p.m. preconizados, pois o boto poder aderir ao fundo do tubo, dificultando a leitura e podendo provocar um resultado falsamente positivo.