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REVISO DE MICROSCOPIA
2005
Tipos de microscopia
Histrico
Desde a antiguidade povos como os egpcios, gregos e romanos
conheciam a arte de talhar e polir cristais de rochas e usam essas primeiras lupas
primitivas como objetos decorativos. No entanto, somente em meados do sculo
XIII, um monge chamado Alejandro Spina divulgou o segredo e a construo da
fabricao de lentes corretivas. Os primeiros estudos cientficos datam do sculo
XVII conduzidos por Johanes Kepler que estudou os fenmenos ticos e a
formao de imagens no olho.
Atansio Kircher (1601-1680) foi o primeiro a usar a palavra
microscopium nome dado ao microscpio daquela poca (Gato, 2005).
Muitos atribuem a inveno do microscpio a Galileu, porm foi Antonie
van Leeuwenhoek, (1632-1723), quem realmente aperfeioou o instrumento e o
utilizou na observao de seres vivos. Seu microscpio era dotado de apenas
uma lente de vidro, permitindo um aumento de at 300 vezes. Com este
instrumento Leeuwenhoek estudou os glbulos vermelhos do sangue e constatou
a existncia dos espermatozides (Embrapa, 2005).
Robert Hooke, em 1665 publicou seu livro intitulado Micrographia
onde descreveu o microscpio e como ele havia descoberto a circulao do
sangue nos peixes. Em seu microscpio, Robert Hooke incorporou o ajuste fino
e acrescentou mais uma lente (Embrapa, 2005).
Aps o aprimoramento, os microscpios ficaro constitudos por 2
sistemas de lentes de cristal (oculares e objetivas) que produzem ampliaes de
imagem que vo em geral de 100 a 1000 vezes (Embrapa, 2005).
Em 1932, surgiu o microscpio eletrnico permitindo aumentos de 5 mil
a 500 mil vezes. A diferena bsica entre os microscpios tico e eletrnico
que neste ltimo no utilizada a luz, mas sim feixes de eltrons. No
microscpio eletrnico no h lentes de cristal e sim bobinas, chamadas de lentes
eletromagnticas. Estas lentes ampliam a imagem gerada pela passagem do feixe
de eltrons no material e a projetam em uma tela onde formada uma imagem
de pontos mais ou menos brilhantes. No entanto, impossvel observar material
vivo neste tipo de microscpio. O material a ser estudado passa por um
complexo processo de desidratao, fixao e incluso em resinas especiais,
muito duras, que permitem cortes ultrafinos por meio das navalhas de vidro de
ultramicrtomo (Embrapa, 2005).
Na histria da microscopia, 200 anos foram necessrios para que o
microscpio deixasse de se ser um instrumento extico e pouco acessvel para
ser usado em uma escala mais ampla. Ento, a partir do sc. XIX, graas aos
estudos realizados por microscopistas puderam afirmar o conceito de clula
como verdade cientfica, surgindo a cincia da biologia celular (Melo, 2002).
Unidades de medida utilizada em microscopia
Em geral, podem-se dividir as unidades de estruturas biolgicas em
macroscpicas e microscpicas, sendo essa ltima invisvel a olho humano nu.
As unidades de medida em microscopia compreende o micrmetro ( m), em
microscopia tica e ( m) e o angstrom ( ), na microscopia eletrnica.
As unidades de medida geralmente usadas em microscopia so as seguintes:
Unidade de medida Smbolo
Valor
Micrmetro
m
0,001 mm (milsima parte do milmetro)
Nanmetro
nm
0,001 m (milsima parte do micrmetro)
Angstrom
0,0000001 mm (10 -7 mm)
O aumento total do objeto observado calculado multiplicando-se os valores do
aumento da objetiva e da ocular.
Ocular
Objetiva
Aumento
Dimetro do Campo
10 x
10x (pequeno aumento
100x
1.500 m
10 x
40x (grande aumento a seco)
400x
375 m
10 x
100x (imerso em leo)
1.000x
150 m
Microscopia de luz
Microscpios so aparelhos nos quais lentes de vidro so associadas de
tal forma que se consiga reproduzir para o olho humano, uma imagem
aumentada e detalhada de objetos, clulas, tecidos e rgos, que vista
desarmada no seria possvel de se observar mais detalhes (Taboga, 2001).
O microscpio de luz assim chamado devido sua fonte luminosa que
uma luz branca oriunda de um filamento de tungstnio (Melo, 2002). O conjunto
de lentes formado pelas objetivas e oculares. A objetiva, a primeira lente e a
que est mais prxima do objeto, capta a luz filtrada pelo condensador e projeta
e. Microscopia de fluorescncia
A microscopia de fluorescncia , provavelmente, a mais verstil e
poderosa tcnica para localizar protenas dentro da clula pela microscopia de
luz (Lodish et al., 2003).
Fluorescncia a propriedade de algumas substncias para, aps serem
excitadas com radiao de baixo comprimento de onda, emitirem radiao de
maior comprimento de onda. Algumas substncias absorvem a energia da
radiao ultravioleta emitindo depois radiao dentro do espectro de luz visvel.
Microorganismos corados por um corante fluorescente aparecem como objetos
luminosos quando observados com luz ultravioleta. com os recursos desta
tcnica que se evidenciam, por exemplo, os antgenos quando associados a
anticorpos acoplados a molculas fluorescentes, e quantifica-se pelo processo de
fluorometria os objetos de estudo da citoqumica normal e patolgica (Taboga,
2001).
Os fluorocromos, quando
Na
microscopia
de
fluorescncia
pode-se
detectar
compostos
g. Microscopia de polarizao
Esse microscpio apresenta dois prismas, ou filtros, chamados de
polarizador e analisador. Esses filtros se posicionam entre a fonte de luz e o
condensador (filtro polarizador) e entre a objetiva e a ocular (filtro analisador)
(Figura 10). Os filtros polarizadores promovem a seleo de apenas um plano de
direo de vibrao de ondas luminosas, conhecido por plano da luz polarizada
(PPL). Sob o efeito do PPL, os componentes macromoleculares birrefringentes
(anisotrpicos) apresentam brilho colorido ou no, promovendo um realce destes
materiais em detrimento a outros no birrefringentes (isotrpicos), que se
distinguem em fundo escuro (Taboga, 2001).
Nesta frmula
(6,62559 x 10
-34
- Comprimento de onda ( m)
0,1
0,0053
0,0038
0,00087
inveno
do
microscpio
de
fora
atmica
contribuiu
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