EXPERIMENTAO NO ENSINO DE QUMICA

Catalisando a Hidrlise da Uria em Urina

Vanessa Vivian de Almeida, Elton Guntendorfer Bonaf, Flvia Braidotti Stevanato, Nilson Evelzio
de Souza, Jeane Eliete Laguila Visentainer, Makoto Matsushita e Jesu Verglio Visentainer
Neste artigo, proposto um experimento simples realizado com material de fcil aquisio para ilustrar a
hidrlise da uria em urina catalisada pela urease extrada de sementes de melancia.
semente de melancia, urina, uria

Recebido em 4/9/06, aceito em 1/4/08

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a natureza, constatamos
transformaes qumicas
ocorrendo o tempo todo
ao nosso redor. Enquanto algumas
dessas transformaes acontecem
rapidamente (como a exploso da dinamite), outras so mais demoradas
como, por exemplo, a formao do
petrleo. Podemos destacar ainda as

transformaes que se desenvolvem

numa velocidade moderada, como a
deteriorao dos alimentos por bactrias. Por sua vez, a velocidade das
reaes de degradao de alimentos
de origem vegetal (como frutas e verduras) pode ser mais ou menos rpida, dependendo de fatores existentes
no meio como, por exemplo, atividade

Figura 1: Efeito do uso de catalisadores na velocidade da reao qumica.

A seo Experimentao no ensino de Qumica descreve experimentos cuja implementao e interpretao contribuem
para a construo de conceitos cientficos por parte dos alunos. Os materiais e reagentes usados so facilmente encontrveis,
permitindo a realizao dos experimentos em qualquer escola. Neste nmero, a seo apresenta dois artigos.
QUMICA NOVA NA ESCOLA

Catalisando a Hidrlise da Uria em Urina

de gua, temperatura e composio

do alimento.
A Cintica Qumica uma cincia
que estuda a velocidade das reaes
qumicas e os fatores que as influenciam. Dentre os diversos fatores que
interferem na velocidade de uma
reao (temperatura, concentrao
de reagentes, superfcie de contato,
entre outros), podemos destacar a
presena de catalisadores.
Catalisadores so substncias
que aumentam a velocidade das reaes qumicas e no so consumidos
durante o processo, sendo regenerados no final. Eles atuam diminuindo
a barreira de energia necessria aos
reagentes para que ocorra a transformao qumica, como mostra a
Figura 1. Essa energia chamada
de energia de ativao, ou seja, a
energia mnima necessria para que
os reagentes possam se transformar
em produtos. Caso a reao ocorra
sem a presena de um catalisador, a
energia de ativao maior, diminuindo assim a velocidade da reao.
Ao atingir a energia de ativao,
formado o complexo ativado, que
uma estrutura intermediria entre
os reagentes e os produtos, com
N 28, MAIO 2008

ligaes intermedirias entre as dos

de ons de nquel ativa o stio da
reagentes e as dos produtos. O comurease e essencial tanto para a
plexo ativado apresenta uma eneratividade funcional como para a ingia mais alta para a
tegridade estrutural
molcula ou o eledessa enzima.
Catalisadores so
mento original. Esse
Alm de ter sido
substncias que aumentam
aumento de energia,
a primeira enzima
a velocidade das reaes
chamado de entalpia
isolada na forma crisqumicas e no so
de ativao H, retalina, em 1926, a
consumidos durante
presenta exatamente
urease uma subso processo, sendo
a energia necessria
tncia extensamente
regenerados no final.
para quebrar as liestudada, devido
gaes na molcula
sua aplicabilidade na
e formar o complexo ativado, que
agricultura e na medicina. Atualmente
se decompe posteriormente nos
a urease utilizada em procedimentos
produtos.
de diagnsticos clnicos, na determiSendo catalisadores celulares
nao de uria em fludos biolgicos
poderosos, as enzimas so protenas
como urina e sangue. A hidrlise da
especializadas em acelerar reaes
uria, empregando essa enzima como
biolgicas e geralmente atuam espebiocatalisador, na temperatura de
cificamente em um dado substrato. O
20C, at 1014 vezes mais rpida que
substrato liga-se enzima num stio
a hidrlise realizada em meio cido a
especial desta, chamado stio ativo,
uma temperatura de 60 C (Souza e
onde ocorre a reao enzimtica.
Fatibello-Filho, 2006).
Essa a regio da enzima que possui
A urina humana constituda de 2
certos aminocidos que se ligam ao
a 5% em uria. Essa a forma utilizada
substrato por ligaes no covalentes
pelo metabolismo do organismo para
(Motta, 2006).
eliminar os resduos nitrogenados
indesejveis produzidos a partir das
Caractersticas da urease
protenas. Atualmente, a uria utiliA urease uma enzima que, em
zada como suplemento na alimentameio aquoso, catalisa a hidrlise da
o de animais, na agricultura (como
uria em amnia e dixido de carbofertilizante), na fabricao de plstino (Figura 2) e ocorre em algumas
cos, na indstria farmacutica, entre
sementes, tais como soja, melo,
outros (Peruzzo e Canto, 1999).
melancia, entre outras. Algumas enInfluncia do meio sobre a atividade
zimas requerem um componente no
enzimtica
protico para sua atividade denominado cofator. O cofator enzimtico
A estrutura e a forma do stio ativo
da urease o on metlico Ni2+ (Ciurli
das enzimas so decorrentes da estrue cols., 1999), portanto, a presena
tura tridimensional da enzima e podem

Figura 2: Reao de decomposio da uria e carter bsico da amnia em meio

aquoso.
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Catalisando a Hidrlise da Uria em Urina

ser afetadas por quaisquer agentes

capazes de provocar mudanas conformacionais na estrutura protica. Isso
torna a atividade enzimtica dependente do meio em que se encontra, notadamente do pH e da temperatura.

Efeito do pH sobre a atividade

enzimtica
Geralmente as enzimas so ativas
em uma estreita faixa de pH e, na
maioria dos casos, h um pH timo
definido. A Figura 3 apresenta a curva
do efeito do pH na atividade enzimtica. Podemos verificar que o pH timo
da enzima definido pelo mximo da
curva. Um estudo sobre purificao
de urease obtida de sementes de
melancia verificou que essa enzima
possui atividade tima em pH 8,0
(Mohamed e cols., 1999).
O efeito do pH sobre a atividade
enzimtica se deve s variaes no
estado de ionizao dos componentes do sistema e medida que o pH
varia. Como as enzimas so protenas,
contm inmeros grupos ionizveis e
existem em diferentes estados de ionizao. Por isso, a atividade cataltica
restrita a uma pequena faixa de pH.
importante destacar, contudo,
que a estabilidade da enzima ao pH
timo depende inclusive de muitos
fatores como temperatura, fora
inica, concentrao de ons metlicos, concentrao de substratos ou
cofatores da enzima, contaminantes
(metais pesados e fluoreto, acima de
2,0 mg/dL, so inibidores da urease),
entre outros (Bioclin, 2006).

Efeito da temperatura sobre reaes

enzimticas
O efeito da temperatura sobre a
cintica de reao enzimtica resultado de dois eventos simultneos.
O primeiro evento caracterizado pelo aumento na velocidade da
reao catalisada em resposta ao
aumento da temperatura do sistema.
A elevao da temperatura provoca
o aumento da energia cintica das
molculas componentes do sistema.
Esse efeito observado em um intervalo de temperatura compatvel com
a estrutura espacial da enzima.
No segundo evento, temperaturas
mais altas levam desnaturao enziN 28, MAIO 2008

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Figura 3: Curva do efeito do pH na atividade enzimtica.

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mtica por alterarem as ligaes que

conservam a estrutura tridimensional
da enzima. Aps o rompimento das
ligaes de hidrognio, que so termolbeis, desencadeia-se uma srie
de alteraes na estrutura enzimtica,
levando a uma nova conformao
ou a um estado conformacional indefinido.
A maioria das protenas (incluindo
as enzimas) passvel de desnaturao irreversvel a temperaturas acima
de 40C ou 50C, porm a temperatura tima de uma enzima um
termo sem significado at que seja
registrado o tempo de sua exposio
a essa temperatura, assim como a
composio do meio em anlise,
pH e fora inica, por exemplo (Morris, 1972). No estudo sobre urease
extrada de sementes de melancia,
Mohamed e colaboradores (1999)
acompanharam o comportamento
dessa enzima submetida temperatura de 40C durante 30 minutos em
pH 7,5 e verificaram que no houve
perda significativa da atividade enzimtica. A mesma enzima, submetida
a 80 C por 5 minutos, teve perda total
da atividade cataltica.
O experimento proposto neste artigo utiliza materiais de fcil
acessibilidade e ilustra a reao de
decomposio da uria em urina
humana, catalisada por urease obtida
de sementes de melancia. Contudo,
a utilizao de urina deve ser tratada
com devida ateno pelo professor,
pois se trata de um substrato que
apresenta diferenciados valores de
pHs e concentrao de sais. A reao
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pode ser lenta caso o meio reacional

interfira no stio ativo enzimtico, devido ionizao de aminocidos na
molcula que provoquem mudana
da conformao da enzima.

Material e reagentes
Estante para tubos de ensaio
4 tubos de ensaio
Pipeta 5,0 mL
Extrato de repolho roxo
Sementes de melancia
Soluo aquosa de uria 1,0%
(a uria pode ser facilmente
adquirida em lojas de produtos
agropecurios)
Urina humana
Liquidificador
Filtro de papel
Funil
Erlenmeyer
lcool etlico (comercial)

Procedimento
a) Para identificao, enumerar 4
(quatro) tubos de ensaio.
b) A dicionar aproximadamente
100 mL de gua e cerca de 40
sementes de melancia em um
liquidificador e triturar por 15
segundos. Filtrar a mistura e
recolher a parte lquida. Dividir
a frao lquida em duas partes iguais e levar uma delas a
fervura a 100C por 1 minuto
(inativao enzimtica). Deixar
em repouso para atingir a temperatura ambiente.
c) Para a obteno do extrato de
repolho roxo, triturar no liquidificador 3 folhas de repolho roxo
Catalisando a Hidrlise da Uria em Urina

picadas com aproximadamente

100 mL de lcool etlico comercial. Filtrar a mistura e utilizar o
extrato alcolico como indicador
cido-base. A extrao das antocianinas (pigmentos da classe
dos flavonides, responsveis
pelas cores azul, violeta, vermelho e rosa de flores e frutas
e indicadores cido-base naturais) pode inclusive ser realizada
por imerso da folha de repolho
roxo em etanol, seguido de repouso por 24 ou 48 horas (Terci
e Rossi, 2002; Couto e cols.,
1998).
d) Tubo 1 No tubo de ensaio
nmero 1, adicionar 1,0 mL
de extrato de repolho roxo, 2,0
mL de urina recm-coletada e
acrescentar 1,0 mL da frao
lquida resultante da triturao
de sementes de melancia em
gua (sem fervura). Agitar e
observar a cada 10 minutos.
e) Tubo 2 No tubo de ensaio
nmero 2, adicionar 1,0 mL
de extrato de repolho roxo, 2,0
mL de urina recm-coletada e
acrescentar 1,0 mL do lquido
resultante da triturao de sementes de melancia (fervido).
Agitar e observar a cada 10
minutos.
f) Repetir os procedimentos (acima) para os tubos 3 e 4, substituindo a urina pela soluo de
uria a 1%.

Resultados e discusso
Tubos de ensaio 1 e 3
A enzima urease (ativa), em meio
aquoso e em contato com o substrato, decompe a uria em amnia
(NH3) e dixido de carbono (CO2).
Pela estequiometria dessa reao
qumica, verifica-se que a decomposio de um mol de uria, em meio
aquoso, origina a formao de dois
mols de NH3 e um mol de CO2, conforme a reao:
1(NH2)2CO (s) + 1H2O (l)
2NH3 (g) + 1CO2 (g)
Sabe-se que o gs carbnico
est presente na atmosfera e advm
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naturalmente da respirao de animais, da decomposio de resduos

orgnicos e indiscriminadamente
da queima de combustveis fsseis.
Alm de ocasionar o efeito estufa,
o gs carbnico (e outros gases
poluentes) acidificam as guas das
chuvas. O carter cido da molcula
de CO2, em gua, se deve formao
do cido carbnico:
CO2 (g) + H2O (l) H2CO3 (aq)
H2CO3 (aq) H+ (aq) + HCO3- (aq)
Em razo da presena de CO2 no
meio reacional, poderamos esperar
que houvesse uma variao do pH
do meio para nveis inferiores ao pH
7,0 (neutro). Contudo, a mudana de
colorao do indicador (passando
de violeta para verde) indicou que o
pH da soluo aumentou para um
nvel igual ou superior ao pH 11,0
(indicando um pH maior do que sete
soluo bsica). A Tabela 1 apresenta
a variao de cores do extrato de
repolho roxo em diferentes pHs.
Podemos atribuir, portanto, o aumento do pH da soluo presena
de amnia que, em meio aquoso, se
ioniza, disponibilizando para a soluo ons hidroxilas (OH):

Tabela 1: Mudanas de cores do extrato

de repolho roxo nas faixas de pH.
COR
FAIXA DE pH
Vermelho
1-4
Violeta
5-8
Azul
9-10
Verde
11-12
Amarelo
>13
Fonte: Bernardino e cols., 2000.

Os resultados esperados nesse

experimento podem ser observados
na Figura 4.

Notas
De acordo com o site Diagnsticos
da Amrica (2006), normalmente o pH
urinrio varia entre 5,0 a 7,0. Valores
elevados podem ser encontrados
em dietas com grande ingesto de
vegetais e frutas ctricas, na presena
de clculos renais e infeco das vias
urinrias. Valores baixos de pH podem
ser encontrados devido perda de potssio, dieta rica em protenas, infeco
das vias urinrias por Escherichia coli,
uso de anestsicos e de cido ascrbico, assim como de outras drogas.

Questes propostas
1. Apresente suas observaes
sobre o aspecto visual das so-

lues observadas nos tubos de

ensaio.
2. Se durante a decomposio da
uria formado, alm da amnia,
dixido de carbono, sendo este
um dos responsveis pela acidez das chuvas, qual a razo do
meio ficar bsico? Proponha uma
explicao para o fenmeno.
3. De acordo com o experimento
e as observaes feitas, como
voc poderia definir uma enzima? Pesquise a definio de
enzima e compare-a com sua
resposta.
Vanessa Vivian de Almeida (va_vivian@yahoo.
com.br), licenciada e bacharel em Qumica pela
Universidade Estadual de Maring (UEM), mestre
em Qumica (UEM), professora do Ensino Mdio
no Colgio Estadual Pedro Viriato Parigot de Souza,
em Marialva - PR. Elton Guntendorfer Bonaf aluno
do curso de licenciatura em Qumica (UEM). Flvia
Braidotti Stevanato bacharel em Qumica (UEM)
e mestre em Qumica (UEM). Nilson Evelzio de
Souza, licenciado em Qumica (UEM), mestre em
Cincia de Alimentos (UEL), doutor em Qumica
(UNICAMP), docente do Departamento de Qumica
da UEM. Jeane Eliete Laguila Visentainer, graduada em Farmcia Bioqumica (UEM), mestre em
Cincias Biolgicas (UEM), doutora em Cincias
Mdicas (UNICAMP), docente do Departamento
de Anlises Clnicas (UEM). Makoto Matsushita,
licenciado em Qumica (UEM), doutor em Ecologia
de Ambientes Aquticos (UEM), docente do
Departamento de Qumica da UEM. Jesu Verglio
Visentainer, licenciado em Qumica (UEM), mestre
em Cincia e Tecnologia de Alimentos (UFV), doutor
em Cincia de Alimentos (UNICAMP), professor
do Departamento de Qumica da UEM.

NH3 (g) + H2O (l) NH4OH (aq)

NH4OH (aq) NH4+ (aq) + OH (aq)
Como a reao de decomposio
da amnia libera quantidade de amnia duas vezes superior quantidade
de gs carbnico, o carter predominante do meio reacional ser bsico,
o que confere a colorao verde, observada nos tubos de ensaio 1 e 3.
Tubos de ensaio 2 e 4
Como a frao lquida da mistura
de gua e sementes de melancia foi
submetida ao aquecimento, a enzima
urease foi inativada pelo calor. Portanto, a reao representada na Figura
1 pode ocorrer, contudo, em menor
velocidade. No havendo liberao
da hidroxila (OH-) em soluo, o pH
resultante no ser alterado, portanto,
no esperado mudana na colorao do indicador utilizado.
QUMICA NOVA NA ESCOLA

Figura 4: Resultados esperados nesse experimento.

Catalisando a Hidrlise da Uria em Urina

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Referncias
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Para saber mais

FONSECA, M.R.M. Interatividade
qumica: cidadania, participao e
transformao: volume nico. So Paulo:
FTD, 2003.
SILVA, E.R.; NBREGA, O.S. e SILVA,
R.H. Qumica: transformaes e aplicaes. So Paulo: tica, 2001.
http://www.ciagri.usp.br/~luagallo/
Enzimas2.htm. (Acesso em dezembro
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http://www.enq.ufsc.br/labs/probio/
disc_eng_bioq/lista_exerc/enzimas_
aspectos_gerais.pdf. (Acesso em
dezembro 2006).

Abstract: Catalyzing urea hydrolysis in urine. In this article it is proposed a simple essay carried out with material of easy acquisition to show the urea hydrolysis from human urine catalyzed by
urease extracted of watermelon seeds.

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Keywords: watermelon seeds, urine, urea

Resenha
O mesmo e o no-mesmo
O autor, Roald Hoffmann, professor de
cincias mdicas da
Universidade de Cornell. Nasceu em uma
cidade da Polnia em
1937, hoje pertencente
Ucrnia, vindo de uma famlia de origem
judia. Imigrou para os EUA em 1949,
tendo se bacharelado pela universidade
de Columbia e se doutorado pela universidade de Harvard em 1960, onde trabalhou
orientado pelo Nobel de Qumica, William
Lipscomb. Em 1981, dividiu o prmio Nobel de Qumica com Kenichi Fukui.
O livro O mesmo e o no-mesmo tem
341 pginas e divido em dez captulos.
Nessas pginas, Hoffmann vai desenvolvendo suas argumentaes tentando
explicar a um pblico hipoteticamente
leigo sobre o que os qumicos fazem e
o que ele considera que seja o objetivo
epistemolgico da cincia Qumica.
Uma explicao sobre o motivo do
ttulo:
[...] quer um ser humano racional possa ser ambivalente em relao aos produtos
qumicos, neles vendo coisas benficas e
prejudiciais, no um sinal de irracionaliQUMICA NOVA NA ESCOLA

dade, mas de humanidade. A utilidade e o

perigo so os dois plos de uma dualidade
[...]. Dano ou proveito, dano ou proveito, so
apenas uma das polaridades que tornam a
qumica interessante. (p. 14)
O corao da atividade da cincia
Qumica criar molculas. Existem
catalogadas cerca de 10 milhes de
novas molculas que no existiam
nesse nosso mundo natural (p.125). A
quantidade aproximada de nitrognio
fixado pelo processo Haber-Bosch
equivalente a todo o nitrognio fixado
por processos biolgicos em todos os
tempos (p. 287). Cerca de do PIB dos
pases industrializados produzido pela
indstria Qumica (p. 260). Sem dvida,
a Qumica mexe de maneira indelvel
com a natureza e com o destino das
pessoas. Se todo esse nitrognio no
fosse fixado, no haveria certamente alimento para todos. Se esses milhes de
novas molculas no existissem, nossa
vida seria diferente, para pior ou melhor?
Hofmann argumenta que a cincia e
a tecnologia mudaram o mundo para
melhor (com poucas conseqncias
ruins). E vai mais alm afirmando que a
Qumica tem uma natureza democratizante. O mundo brutal e hostil do passado foi transformado para melhor de
maneira a proporcionar uma vida com
Catalisando a Hidrlise da Uria em Urina

mais qualidade para um maior nmero

de pessoas.
O livro de Hoffmann tambm traz outras discusses importantes como o tema
da reduo da Qumica (item quatro), o
qual ele se coloca como contrrio, argumentando que o que a Qumica faz substancialmente diferente do que a Fsica faz.
Discute tambm a idia de representao
e realidade e afirma que o mais relevante
nessa discusso a comunicao entre
os qumicos, no exatamente saber se o
que representamos a realidade.
Por fim, acreditamos que esse livro
deva ser uma leitura obrigatria para
todos os qumicos: professores de
nvel mdio, formadores de professores,
professores universitrios e pesquisadores em geral. No entanto, o desejo de
Hoffmann que seu livro atinja os leigos
em Qumica, o cidado comum que,
de posse de informaes e reflexes
contidas nesse livro, possa formar uma
opinio mais qualificada sobre o que
que a cincia Qumica faz e, assim, poder
fazer seu prprio julgamento.
Nelson Rui Ribas Bejarano (UFBA)
Hoffmann, Roald. O mesmo e o
no-mesmo. So Paulo: Ed. UNESP, 2007.
344p. ISBN: 9788571397613.
N 28, MAIO 2008