CENTRO PAULA SOUZA

ETEC CONSELHEIRO ANTONIO PRADO

TCNICO EM QUMICA

ANLISE QUMICA INSTRUMENTAL

DETERMINAO DE CAFENA EM BEBIDAS POR CROMATOGRAFIA LQUIDA DE ALTA EFICINCIA (CLAE)

Ana Laura - N 02 Arnaldo - N 04 Hosana - N 15 Lucas Oliveira - N 22 Lucas Stefano - N 23 3 TD - Noite

CAMPINAS SP

Maio 2012

CENTRO PAULA SOUZA

ETEC CONSELHEIRO ANTONIO PRADO
TCNICO EM QUMICA

DETERMINAO DE CAFENA EM BEBIDAS POR CROMATOGRAFIA LQUIDA DE ALTA EFICINCIA (CLAE)

Requisito para a matria de Anlise Qumica Instrumental, Prof. Paulo Costa Ana Laura - N 02 Arnaldo - N 04 Hosana - N 15 Lucas Oliveira - N 22 Lucas Stefano - N 23 3 TD - Noite

CAMPINAS SP
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Maio 2012 SUMRIO

1 INTRODUO 2 REVISO BIBLIOGRFICA 2.1 A Cafena 2.2 O Caf 2.3 A Coca-Cola 2.4 O Refrigerante de Guaran 2.5 Curiosidades: Cafena 2.6 Questo: Por que a cafena estimula o crebro humano? 2.7 CLAE (Cromatografia Lquida de Alta Eficincia) 3 PROCEDIMENTO 3.1 Determinao de cafena em bebidas por CLAE 4 RESULTADOS 5 DISCUSSO DOS RESULTADOS 6 CONCLUSO 7 ANEXOS 7.1 Figuras e Imagens 7.2 Tabelas adicionais 8 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS 37 28 17

4 6 6 8 11 13 15

20 28

30 32 34 35 35

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1 INTRODUO:

De todas as drogas existentes, a cafena a mais consumida no mundo atualmente. O ser humano aprecia tanto as bebidas que contm esse composto, que uma das principais refeies dirias foi nomeada em sua homenagem: caf da manh. As bebidas cafeinadas exercem um fascnio na raa humana desde os primrdios da civilizao. Seus efeitos estimulantes eram conhecidos antes mesmo da inveno da escrita, e o estudo de seu uso nos remete a uma viagem que vai desde Pr-Histria at a sociedade contempornea. A cafena pode ser encontrada, no somente no caf, mas em muitas outras bebidas como chs, refrigerantes do tipo cola, refrigerantes do tipo guaran, bebidas energticas, chimarro, milk-shakes, chocolate quente, achocolatados, entre muitas outras. O consumo da cafena est de tal forma difundido em nossa sociedade, que a maioria dos brasileiros adultos consome doses dirias acima de 300 mg, e um grande nmero deles so viciados. Muito se tem discutido sobre o real efeito deste alcaloide no organismo, e muitos mitos foram criados ao longo dos sculos, muitos advindos da sabedoria popular. H algumas questes fundamentais para quem deseja estudar o assunto. Algumas delas so: o que a cincia sabe atualmente sobre a cafena? Qual seu efeito no organismo? seguro ingerir cafena? Ela pode causar dependncia? Porque essa droga to popular? Qual a quantidade de cafena presente em alimentos que consumimos diariamente? Essa quantidade pode causar algum efeito indesejvel?

Buscar a resposta para essas e muitas perguntas, fornecer dados precisos atravs da anlise por HPLC (High-Performance Liquid Chromatography) ou CLAE (Cromatografia Lquida de Alta Eficincia) e lanar discusses pertinentes so os objetivos deste relatrio, bem como abordar o real papel da cafena, descobrindo o verdadeiro impacto na sade do ser humano e desmistificando a imagem de vil absoluta que foi atribuda a esse composto nas ltimas dcadas pelos adeptos do viver saudvel, sem contudo subestimar o seu potencial de alcaloide vegetal.

2 REVISO BILBIOGRFICA 2.1 A CAFENA

A Cafena um alcalide vegetal presente em plantas do gnero Cola (Cola ntida, Cola vera, Cola acuminata) plantas da famlia do caf (Coffea arabica e a Coffea canephora) entre outras. Entre os vrios alcalides existentes na natureza, encontram-se as metilxantinas, da qual a cafena faz parte. Existem 3 metilxantinas particularmente importantes: a 1,3,7trimetilxantina (cafena), a 1,3-dimetilxantina (teofilina) e a 3,7-dimetilxantina (teobromina). Todos so derivados da purina (o grupo xantina a 2,6-dioxopurina) e inibem a enzima fosfodiesterase. Teobromina e teofilina so duas dimetilxantinas, com dois grupos metilas somentes, em contraste cafena, que possui trs. Ambas tm efeitos similares cafena, porm bem menos acentuados. A teobromina encontrada no chocolate, no ch, na noz moscada, mas no no caf. No cacau, a concentrao de teobromina 7 vezes maior do que de cafena! A teofilina possui mais efeitos no corao e na respirao, sendo, por isso, mais empregada em medicamento para asma, bronquite e enfisemas do que a cafena. encontrada, tambm, no caf. No organismo, estes compostos so facilmente oxidados para o cido rico e outros derivados. A cafena um p branco cristalino muito amargo. Na medicina, esse composto utilizado como um estimulante cardaco e tambm como um diurtico. A cafena conhecida popularmente por fornecer energia rpida, ou uma acentuao no estado de alerta. Graas a essa fama, milhares de profissionais que travam

batalhas contra o sono - motoristas e estudantes, por exemplo - tomam grandes quantidades de caf para permanecerem acordados. A cafena uma droga que causa dependncia tanto fsica como psicolgicamente. Ela opera atravs de mecanismos similares aos das anfetaminas e da cocana. Seus efeitos, entretanto, so mais fracos do que estas drogas, muito embora ela aje nos mesmos centros receptores do sistema nervoso central (SNC). Sentir necessidade diria de tomar caf pode significar o incio do vcio.

2.2 O CAF

A infuso realizada com as sementes do caf torradas uma das bebidas mais consumidas no mundo todo. S no Brasil foram consumidas mais de 17 milhes de sacas de caf em 2007. Mas nem sempre foi assim. No incio, at o ano 1.000 d.C., o caf, originrio da Etipia, era usado somente para alimentar os rebanhos durante as longas viagens, para reduzir a necessidade de descanso que o rebanho possua. Estava ali sendo descoberta sua poderosa ao estimulante, conseguida atravs (entre outros compostos) da cafena. Diz uma das lendas sobre o caf que um dia um pastor da Absnia (local que atualmente chama-se Etipia), chamado Kaldi, resolveu levar at um monge conhecido seu, o fruto de uma planta que, segundo ele, deixava o rebanho alegre e disposto quando a ingeriam, permitindo-os locomover-se por longas distncias sem descanso. O monge intrigado resolveu experimentar uma infuso daqueles frutos amarelo-avermelhados e percebeu que realmente a infuso dos frutos lhe ajudava a ficar mais tempo acordado durante suas meditaes. A partir da o fruto comeou a ser utilizado como alimento cru e estimulante, mas ainda demoraria um pouco at que seu uso se disseminasse. No h corroborao histrica para esse mito, mas o fato que o caf comeou a ser cultivado pela primeira vez em monastrios islmicos no Ymen, Pennsula Arbica. Dali ele foi levado at Constantinopla pelo Imprio Otomano, local onde foi fundada a primeira cafeteria do mundo, chamada de Kiva Han. No sculo XIV, quando chegou ao continente europeu, o caf era chamado de vinho da Arbia pois os rabes lhe chamavam de qahwa, que em sua lngua significa vinho. Mas o caf torrado como consumimos hoje, s surgiu no sculo XVI.
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O mundo rabe aceitou prontamente a disseminao da nova bebida. Uma vez que sua religio no permite o consumo de bebidas alcolicas, o caf passou a ser consumido at mesmo nos cultos religiosos. Desta forma, foram surgindo locais especializados em servir a bebida, principalmente na cidade de Meca, onde logo foram surgindo inmeras Kaveh Kanes, as primeiras cafeterias. At o sculo XVIII o caf era considerado uma preciosidade pelos rabes que sabiam de seu potencial energtico e eram os nicos que tinham cincia das tcnicas necessrias para cultivar a planta com sucesso e dominavam a produo da bebida a partir das sementes. Mesmo com tanto protecionismo, o caf conseguiu romper as barreiras geogrficas e culturais e seu comrcio (bebida e gros) chegou Europa levada pelos vienenses que fundaram a Botteghe del Caff, principal responsvel pela popularizao do hbito de torrar e moer o caf. Foram os vienenses tambm, que inventaram o costume de beber o caf coado, adoado e com leite. Da vem o nome recebido: caf vienense. Os habitantes dos Pases Baixos foram, contudo, os pioneiros ao levar a planta at a Europa e a conseguir cultivar as primeiras mudas, vindas de Mokha na Pennsula Arbica, no jardim botnico de Amsterd. igualmente mrito dos holandeses, levar o caf para o novo continente (onde alcanaria sua maior popularidade), para a Amrica do Norte, na chamada Nova Amsterd (atual cidade de Nova York) e para o estado da Filadlfia. A partir de ento, o caf se alastrou rapidamente para o resto do mundo. Primeiramente para as colnias holandesas em Java, depois, para Sumatra, e ento para as ilhas francesas de Sandwich e Bourbon, at chegar ao Brasil que se tornaria, mais tarde, o maior produtor mundial de caf e um dos maiores consumidores de seus gros torrados e modos.
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2.3 A COCA-COLA

A Coca-Cola foi lanada em 1886, em uma criao de John Pemberton, farmacutico de Atlanta, quando ele criou uma bebida com o intuito de curar dores de cabea. Levou a bebida a uma farmcia, a Jacobs Pharmacy, onde o xarope era misturado

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com gua carbonatada e oferecido pelos clientes pelo valor de US$ 0,05. Frank Robinson, contador de Pemberton, batizou a bebida de Coca-Cola escrevendo o nome mo mesmo. Cem anos depois, Pemberton vendeu a empresa para Asa Gringgs Candler, sem ter idia do sucesso que sua bebida faria. Candler batizou a empresa de The Coca-Cola Company tornando-se o primeiro presidente e o primeiro a dar visibilidade marca. Asa Candler rapidamente popularizou a Coca, fornecendo aos farmacuticos relgios, balanas e calendrios com a marca. Em 1894, Joseph Biedenharn, tem a brilhante idia de colocar a bebida em garrafa, no comeo Candler no coloca muita f, mas anos depois a novidade veio para ficar at que uma empresa de Indiana inicia a fabricao de garrafas contour (embalagem de vidro), possibilitando ao consumidor reconhecer a marca at de olhos vendados. Robert Woodruff assumiu a presidncia da The Coca-Cola Company em 1918 quando Candler a vendeu. Ele era um gnio do marketing e fez a bebida se tornar ainda mais conhecida. Durante a Segunda Guerra Munidal, Woodruff determinou que a CocaCola fosse vendida para todo combatente norte-americano onde quer que ele estivesse a US$ 0,05. Europeus tambm experimentaram a bebida, resultando na exploso da bebida na Europa, logo aps a Guerra. At os dias de hoje a Coca-Cola um sucesso de vendas, com tantas parcerias, encontra-se em qualquer canto do mundo todo e ainda busca perfeio a cada nova inveno que cria. A Coca-Cola tradicional tem em sua composio aromatizantes naturais, gua gaseificada, acar, cafena, extrato de noz de cola, corante caramelo IV, acidulante cido

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fosfrico (INS 338). No contem glten e no contm quantidades significativas de protenas, gorduras totais, gorduras saturadas, gorduras trans e fibras alimentares.

2.4 O GUARAN:

O guaran, de nome cientfica Paullinia cupana, uma fruta tpica do estado do Amazonas. A rvore que d essa fruta pode chegar 10m de altura e seus frutos assumem a forma de cachos.
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Desde da poca dos ndios o fruto era apreciado pelas suas caractersticas estimulantes. Moam as sementes at virar uma pasta, moldavam em forma de basto, deixavam secar at ficar duro e depois raspavam. Obtendo um p, usado para a produo de uma bebida. Acreditava-se que essa bebida garantia vida longa. Refrigerante produzido industrialmente, a partir de gua mineral e acar, podendo conter edulcorantes, extrato ou aroma sintetizado de fruta ou outros vegetais e gs carbnico.No sculo XVI, a fabricao e elaborao do mesmo s podia ser feita por farmacuticos, pois eram os nicos que tinham conhecimento de qumica e medicina. O processo de processamento de xarope de fruta teve inicio em 1905, e em 1906 foi lanado, pela F. Diefenthaller, uma fbrica de refrigerantes de Santa Maria, no Rio Grande do Sul, o Guaran Cyrilla.Em 1921 foi lanado no Brasil Guaran Champagne Antrtica atualmente o Guaran Antrtica. Com o passar do tempo os mtodos foram aperfeioados desde o plantio at a produo do refrigerante.

Informao Nutricional: Poro de 200 ml (copo) Quantidade poro Valor 80 KCal = 336 KJ 4 Energtico Carboidrato Sdio 20 g 11 mg 7 0 por% VD*

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* Valores dirios de referncia com base em uma dieta de 2000 Kcal ou 8400 KJ. Seus valores dirios podem ser maiores ou menores, dependendo de suas necessidades energticas. No contm quantidades significativas de protenas, gorduras totais, gorduras saturadas, gorduras trans e fibra alimentar. Pesquisas feitas mostram que o venda de refrigerantes cresce a cada ano. Famlias passaram a consumir os mesmos de forma irregular, causando doenas como diabetes, acelerao cardiovascular entre outras prejudicando a sade. Guaran Antrtica a segunda marca mais vendida no Brasil e est entre a 15 marcas mais vendidas no mundo.

2.5 CURIOSIDADES: CAFENA

Retirado do banner 15 Things You Should Know About Caffeine* (15 coisas que voc deveria saber sobre cafena ver anexos) *Traduo nossa

Isolada do caf pela primeira vez em 1820, cafena a droga escolhida por um grande nmero de pessoas, visto que pode ser encontrada em vrios tipos de bebidas e

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medicamentos. No so todos, entretanto, que param para analisar o que ela e faz ao nosso organismo.

O delicioso nome qumico da cafena 1,3,7-trimetilxantina. A cafena encontrada naturalmente em 60 tipos diferentes de plantas, entre elas: sementes de caf (a fonte mais comum na Amrica), folhas de ch, guaran (fonte de cafena para energticos), erva-mate, noz-de-cola.

A cafena extrada atravs do cozimento das sementes e das folhas em alta presso com CO2 para obter o composto em p.

90% dos americanos consomem cafena de alguma forma todos os dias. A cafena aumenta seus nveis de dopamina, o que faz voc se sentir mais feliz, e bloqueia os receptores de adenosina, o que impede que voc fique sonolento.

A cafena apresenta uma melhora temporria na capacidade de aprendizagem. Isso inclui compreenso, memria, reflexos, clareza de pensamentos.

A cafena trabalha nas mesmas partes do crebro que a cocana, as anfetaminas e a herona. Ela apenas tem efeitos mais suaves.

Por outro lado, a cafena tambm tem efeitos colaterais:

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Insnia: o efeito estimulante da cafena mantm o crebro, evitando assim, o sono.

o Da mesma forma, as propriedades diurticas da cafena impedem voc de dormir, pois tem que urinar o tempo todo. o Diarreia: A cafena acelera o processo de digesto forando o alimento para fora do tubo digestrio rpido demais. A cafena beneficia os atletas: 5 mg por kg melhora a resistncia por reduzir a queima de glicose e aumentar a queima de gordura. O Comit Olmpico Internacional baniu a cafena das competies.
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Uma dose alta de cafena pode ser letal: a dose letal de cafena para um ser humano algo em torno 150-200 mg por quilograma de massa corporal. Isso corresponde a 100 xcaras de ch em 4 horas. Em 2007, um homem morreu aps uma overdose de plulas No-Doz (suplementos de cafena. N. do T.).

A cafena completamente absorvida depois de 30 a 40 minutos, e seus efeitos diminuem aps 3 horas.

Estima-se que 12.000 toneladas de cafena so consumidas todo ano, sendo 54% proveniente de cafs, 43% de chs e 3% de alimentos e outras fontes. A mdia de consumo dos americanos de 280 mg de cafena por dia, 2 ou 3 xcaras de caf.

A cafena causa dependncia fsica. O perodo de abstinncia tem inicio entre 12 e 24 horas e pode durar de 2 a 9 dias. Os sintomas incluem: dor de cabea, cansao, depresso, irritabilidade e perda de energia.

Produtos descafeinados ainda possuem cafena em sua composio. Nos Estados Unidos, Descafeinado significa que menos de 2,5% do produto cafena.

Hitler recebeu injees de glicose e cafena para manter a energia durante os ltimos dias da Segunda Guerra Mundial.

2.6 QUESTO: POR QUE A CAFENA ESTIMULA O CREBRO HUMANO?

Um neurotransmissor natural chamado adenosina, ao ligar-se aos seus receptores, diminui a atividade neural, dilata os vasos sanguneos, entre outros. A cafena se liga aos receptores da adenosina e impede a ao da mesma sobre o Sistema Nervoso Central. A cafena estimula a atividade neural e causa a constrio dos vasos sanguneos, pois bloqueia a ao da adenosina. Muitos medicamentos contra a dor de cabea, tal como a
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Aspirina Forte, contm cafena, que por provocar a constrio dos vasos sanguneos, aliviar a dor. Com o aumento da atividade neural, a glndula pituitria "pensa" que algum tipo de emergncia est ocorrendo, e libera grandes quantidades de adrenalina, que causa uma srie de efeitos no corpo humano, como a taquicardia, aumento da presso arterial, abertura dos tubos respiratrios (por isso muitos medicamentos contra a asma contm cafena), aumento do metabolismo e contrao dos msculos, entre outros. Outro mecanismo de ao da cafena atua atravs do bloqueio da enzima fosfodiesterase, responsvel pela quebra de mensageiros AMP cclico (monofosfato cclico de adenosina) do crebro, fazendo com que os sinais responsveis pela excitao da adrenalina persistem por muito mais tempo, ou seja, demorem mais para serem degradados pelo organismo. A cafena, a adenosina e o monofosfato cclico de adenosina possuem frmulas estruturais extremamente similares (ver anexos). A ingesto da cafena tambm responsvel pelo aumento da concentrao de dopamina no sangue (de modo anlogo ao das anfetaminas e da cocana), por provocar uma diminuio da recaptao desta no Sistema Nervoso Central. A dopamina tambm um neurotransmissor (relacionado com o prazer) e mdicos e pesquisadores suspeitam que seja justamente este aumento dos nveis de dopamina que leve o individuo a viciar-se em cafena. A cafena, em curto prazo, impede que voc durma porque bloqueia a recepo de adenosina; lhe d mais "energia", pois causa a liberao de adrenalina, e traz uma sensao de bem estar, devido manipulao da produo de dopamina. Os nicos problema decorrentes do consumo de cafena (excetuando-se os de grau alrgico) s podem ser observados a longo prazo. O mais importante o efeito que a cafena tem sobre o sono. A recepo de adenosina muito importante para o sono,
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principalmente para o sono profundo. O tempo de meia-vida da cafena no organismo de 6 horas. Portanto, quando uma pessoa bebe uma quantidade x de caf (200 mg de cafena, por exemplo) por volta das 15:00h, cerca de 100 mg desta cafena ainda estaro em seu corpo s 21:00h. Isso no impede que o sono acontea, mas provavelmente no haver proveito integral dos benefcios que somente o sono profundo traz. No dia seguinte, a quantidade de cafena necessria para que acontea o mesmo efeito ser maior, e assim gradativamente, este crculo vicioso continua, dia aps dia. Ao tentar parar o consumo de cafena, podero ser observados sintomas de depresso e, em alguns casos, cefaleia intensa - causada pela excessiva dilatao dos vasos sanguneos no crebro. Estes efeitos colaterais negativos fazem com que o corpo procure consumir mais cafena. Esta a principal razo que leva os fabricantes de refrigerantes a adicionar cafena aos seus produtos - o consumidor, caso no controle a ingesto deste tipo de bebida, se torna viciado, sente necessidade constante de ingerir cafena, passa a fazer disto um hbito e, consequentemente, as vendas aumentam exponencialmente. Existem alguns estudos indicam que o consumo de cafena durante a gravidez pode ser prejudicial para o feto, porm os cientistas garantem que os males s aparecem se o consumo for exagerado. A cafena pode ser letal, se ingerida em grande quantidade. A dose necessria para matar 50% de certo grupo de indivduos de 75mg/kg. As estatsticas so muitas, e variam bastante, mas para matar um adulto de cerca de 80 Kg, seriam necessrias mais de 40 xcaras de caf.

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2.7 CLAE (CROMATOGRAFIA LQUIDA DE ALTA EFICINCIA) ou HPLC (High-Performance Liquid Cromatography)

INTRODUO A cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE) um tipo de cromatografia lquida que emprega pequenas colunas, recheadas de materiais especialmente preparados e uma fase mvel que eluda sobre altas presses. Ela tem a capacidade de realizar separaes e anlises quantitativas de uma grande quantidade de compostos presentes em vrios tipos de amostras, em escala de tempo de poucos minutos, com alta resoluo, eficincia e sensibilidade. Somente a partir dos anos 70 se conseguiu um avano considervel da cromatografia lquida moderna que at ento era essencialmente
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subdesenvolvida, apesar de que um dos primeiros experimentos sobre cromatografia, no inicio do sculo, foi o tipo que hoje chamado cromatografia lquida clssica. O avano foi gradual e atingiu o atual nvel de sofisticao que a CLAE apresenta, devido ao revolucionrio desenvolvimento tecnolgico da prtica deste tipo de cromatografia. Desde 1968 tornou-se possvel rechear colunas com partculas de pequeno tamanho, necessrias para alta resoluo e, tambm, adquirir equipamentos que funcionam nas altas presses necessrias para obter uma boa velocidade de eluio. Nos ltimos dez anos ocorreu o desenvolvimento de vrios detectores espectrofotomtricos que operam em comprimentos de onda varivel at 190 nm, e houve um aumento na utilizao dos detectores por fluorescncia, eletroqumicos, e por fluorescncia induzida por laser, bem como acoplamento com o espectrmetro de massas. Com estes, tornou-se possvel a deteco da maioria dos compostos e a anlise de traos em amostras complexas, como sangue, urina, solo, alimentos, petrleo, etc. Hoje em dia so comuns estudos com partculas pequenas, a execuo da CLAE com fase reversa e, particularmente, o uso de equipamentos para uma perfeita eluio com gradiente, bem como de mtodos especiais, tais como a formao de pares inicos. Como resultado, dificuldades anteriores ou separaes difceis de compostos como corantes polares, ismeros, drogas bsicas e seus metablitos so agora rotina.

O PROCESSO CROMATOGRFICO O processo cromatogrfico consiste na partio dos componentes de uma mistura entre a fase mvel e a fase estacionria. No caso da cromatografia gasosa o fluido um gs e na cromatografia lquida o fluido um solvente. Na cromatografia lquida a fase estacionria constituda de partculas slidas empacotadas em uma coluna, a qual atravessada pela fase mvel. So as foras fsicas e qumicas que atuam entre os solutos e
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as duas fases so responsveis pela reteno dos solutos sobre a coluna cromatogrfica. A diferena na magnitude dessas foras que determina a resoluo e portanto a separao dos solutos individuais. As foras elementares que agem sobre as molculas so de cinco tipos:

Foras de disperso de London ou foras de Van der Waals; Interaes de dipolo induzido; Ligaes de hidrognio; Interaes dieltricas; Interaes eletrostticas e coulombianas.

As variveis que afetarem essas foras intermoleculares iram influenciar o grau de separao obtido pela passagem dos solutos atravs da coluna cromatogrfica.

CARACTERSTICAS DAS FASES ESTACIONRIAS EM CLAE Considerando as suas propriedades fsicas, os recheios para CLAE podem ser classificados de acordo com os seguintes aspectos: a) Slidos rgidos, semi-rgidos ou no rgidos; b) Partculas porosas ou peliculares; c) Partculas esfricas ou irregulares; d) Partculas com diferentes dimetros. Slidos rgidos a base de slica so os recheios mais usados atualmente. Esses recheios podem resistir a presses relativamente altas, resultando em enchimento estvel e colunas eficientes de partculas pequenas. Slidos semi-rgidos so geralmente constitudos de partculas porosas de poliestireno entrecruzadas com divinilbenzeno. 0 semi-rgido tem sido usado para presses at 350 bars. O maior interesse no semi-rgido atualmente para aplicaes na
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CLAE por excluso com fase mvel orgnica; contudo eles tambm so usados na troca inica. Slidos no rgidos, tais como agarose ou dextrose, usados em cromatografia por excluso, so aplicados exclusivamente para a separao de molculas grandes, solveis em gua, como as protenas. Contudo, estes slidos no rgidos no podem resistir as presses usadas na CLAE. Os dois tipos de materiais, peliculares e porosos, diferem em algumas de suas propriedades e tm muitas outras em comum. Ambos podem ser introduzidos na coluna com certa facilidade, obtendo-se colunas muito eficazes. Elas podem ser utilizadas em cromatografia lquido-slido, dependendo da atividade da sua superfcie ou pode ser recoberto com alguma fase lquida e obter-se uma coluna para CLAE com fase quimicamente ligada. Alm destes tem-se os materiais de recheio do tipo pelicular ou poroso para cromatografia por troca inica. Os adsorventes peliculares, com dimetro de partcula entre 30 e 45 m, apresentam eficincia, rapidez, reprodutibilidade e custo similar aos adsorventes porosos (5 - 10 m), mas tm menor capacidade e, por isto, o seu emprego tem diminudo notavelmente nos ltimos anos.

Figura 1- Formas mais comuns de partculas para cromatografia de lquidos.

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Figura 2- Diferentes formas e tamanhos dos materiais para empacotamento de colunas. Para obter distribuio homognea do recheio em toda extenso da coluna, o que aumenta a eficincia da separao, as partculas devem ter a menor variao de dimetro possvel. As partculas esfricas so melhores do que as irregulares, mas estas tm menor custo. O tamanho da partcula controla o processo de difuso das molculas da amostra ao penetrar e sair dos poros da partcula. Quanto maior o tamanho da partcula porosa, mais lento o processo de difuso e, como conseqncia, mais lenta a transferncia de massa entre a fase estacionria e a fase mvel. Isto acontece porque, medida que aumenta o tamanho da partcula, aumenta tambm a profundidade dos poros e conseqentemente a amostra demora mais tempo para sair destes poros profundos. Ao mesmo tempo deve-se considerar que um aumento da vazo da fase mvel, para obter-se anlises rpidas, faz com que as molculas da amostra nesta fase migrem rapidamente, em comparao com as da fase estacionria (independente dos poros). Isto resulta no alargamento dos picos. Conforme diminui o tamanho da partcula, a profundidade dos

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poros diminui e a sada dos poros acontece mais rapidamente, permitindo obter anlises rpidas, sem perda na eficincia. Estas explicaes justificam porque na CLAE utilizam-se somente materiais porosos cujas partculas tem tamanho menor do que 30 m, com exceo da troca inica. Outros tipos de materiais utilizados so partculas esfricas, geralmente vtreas, no porosas, recobertas por uma camada muito fina de um adsorvente poroso. Este tipo de material e denominado de pelcula de camada porosa, de porosidade superficial ou de centro no poroso.

AS TCNICAS DA CLAE H cinco tipos de fases estacionrias com diferentes mecanismos que regem as separaes cromatogrficas na CLAE. Mediante a simples troca de coluna e fase mvel possvel utilizar um deles.

CROMATOGRAFIA LQUIDO-SLIDO OU POR ADSORO O mecanismo de separao da cromatografia lquido slido (CLS), ou adsoro, se baseia na competio que existe entre molculas da amostra e as da fase mvel em ocupar os stios ativos na superfcie de um slido (fase estacionria). Para que a molcula do soluto possa ser adsorvida na fase estacionria, primeiro uma molcula da fase mvel deve ser deslocada da superfcie. Se assumir que o adsorvente possui uma superfcie polar (por exemplo: slica ou alumina), grupos apolares (por ex.; hidrocarbonetos) tero pouca afinidade por essa superfcie e no iro deslocar a molcula da fase mvel; por isso, no sero retidos. Grupos funcionais polares capazes de formar pontes de hidrognio tero fortes afinidades pela superfcie e sero fortemente retidos. Molculas polarizveis (por ex.: molculas aromticas) iro apresentar interao
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dipolo induzido-dipolo com a superfcie do adsorvente e, portanto, tambm sero retidas; o grau de reteno depende da polarizao de cada molcula ou grupo funcional. importante que as partculas da fase estacionria apresentem uma grande rea de superfcie, isto , um grande nmero de stios ativos. A atividade da superfcie de muitos slidos (incluindo a slica e alumina) se encontra com freqncia afetada pela reteno de certas molculas de alta polaridade como lcoois, fenis, gua, etc., e, devido a eles, em determinadas ocasies, difcil reproduzir os resultados obtidos nas anlises, porque as propriedades da superfcie sofrem mudanas. Em conseqncia, a superfcie da slica empregada na CLAE habitualmente submetida a determinados processos de desativao com o propsito de diminuir a reteno de molculas muito polares e, assim, se mantm a superfcie em condies uniformes, o que contribuir para melhorar a reprodutibilidade das anlises. Muitas vezes, devido a uma forte adsoro ou reteno de alguns componentes da amostra no slido ativo, necessrio aumentar a polaridade da fase mvel de uma maneira constante e uniforme, com o qual se consegue um incremento de solubilidade dos componentes da amostra na fase mvel. A essa variao d-se o nome de eluio por gradiente ou programao da fase mvel. Para a maioria das separaes realizadas por adsoro (CLS) usa-se partculas porosas, na faixa de 5-10 m, alem de se empregar, s vezes, os materiais maiores (30-40 m), como pelcula porosa. Quase todas estas separaes so limitadas a alguns tipos de adsorventes: slica e alumina. A reteno e a separao nestes adsorventes so geralmente similares, os componentes mais polares da amostra sero retidos preferencialmente. Na modalidade de cromatografia por partio com fase lquida, prefervel usar suportes que sejam inertes; mas no existem suportes inertes com rigidez e uniformidade requeridas pela CLAE. Usa-se a slica, sabendo-se que tem pontos adsorventes que
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necessitam ser completamente cobertos ou inativados, como em CG. Os poros devero ser suficientemente grandes para permitir total acesso das molculas do soluto fase estacionria contida dentro da estrutura dos poros, mas suficientemente pequeno para resistir a remoo do lquido estacionrio pelo arraste mecnico da fase mvel.

CROMATOGRAFIA LQUIDO-LQUIDO OU POR PARTIO A cromatografia lquido-lquido (CLL) foi desenvolvida por Martin e Synge em 1941 para separao de vrios aminocidos, usando fase estacionria de gua em slica e clorofrmio como fase mvel. 0 mecanismo de separao neste tipo de cromatografia, ou mecanismo de distribuio como tambm chamado, baseia-se nas diferentes solubilidades que apresentam os componentes da amostra na fase mvel e na fase estacionria. Ento, os componentes mais solveis na fase estacionria so seletivamente retidos por ela, enquanto os menos solveis so transportados mais rapidamente pela fase mvel. 0 maior inconveniente desta tcnica a solubilidade da fase estacionria na fase mvel, o que rapidamente deteriora a coluna, levando a no reprodutibilidade nas separaes repetitivas. Isto pode ser resolvido de duas maneiras. A primeira saturando a fase mvel com a fase estacionria por meio de uma pr-coluna, colocada antes do injetor, que contenha uma alta percentagem de fase estacionaria. A segunda utilizando materiais que contenham a fase estacionria, quimicamente ligada a um suporte slido.

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3 PROCEDIMENTO 3.1 Determinao de cafena em bebidas por CLAE

O procedimento para realizao desse experimento tem incio com a preparao de 5 bales contendo uma quantidade x em mL da Soluo de Estoque de Cafena que foi devidamente preparada pelo professor. Para cada balo volumtrico, adicionou-se uma alquota diferente da soluo padro. Segue abaixo uma tabela com as quantidades adicionadas em mL e o valor terico da cafena contida nessas alquotas utilizadas nessa soluo:

Padro 1 2 3 4

Concentrao Terica (g/mL) 10 20 30 40

mL da soluo padro utilizada 2 4 6 8

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50

10

A preparaes do padres foi realizada da seguinte maneira: Encheu-se uma bureta de 25 mL com a Soluo de Estoque de Cafena e transferiu a quantidade j descrita na tabela acima para o primeiro balo, repetindo o procedimento para todos os bales. Aps isso, adicionou-se gua destilada at atingir o menisco e homogeneizaram-se as solues. Com isso, a preparao dos padres finalizada. Adio dos padres no HPLC (CLAE Cromatografia Liquida de Alta Eficincia). Antes da injeo da primeira alquota de soluo padro no equipamento foi necessrio criar uma pasta onde as informaes de leitura do equipamento estariam salvas, bem como conferir se as condies do equipamentos estavam corretas para a analise da cafena. As condies que devem estar em parmetros corretos so: Soluo Isocrtica uma soluo que contem dois tipos de solventes mas com a mesmas concentraes. A soluo utilizada para a analise da cafena a soluo metanol/gua

Fluxo da fase mvel a 0,6 mL/min a quantidade da que o equipamento ira injetar a soluo durante cada minuto da analise.

Deteco em UV a 273 nm a onda de comprimento onde o pico da cafena ira sair.

Aps isso era possvel adicionar as alquotas das solues padro no equipamento, o que feito atravs da utilizao de uma seringa (de uso especfico para o equipamento).
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Aspirou-se um volume em torno de 2mL dos padres e adicionou-se no injetor. Aps essa injeo, anlise j poderia ser iniciada. O mesmo procedimento foi repetido com as amostras diludas de Coca-Cola, Caf e Guaran Antrtica. O pico das amostras e dos padres (resultado da anlise pertinente ao nosso estudo) aparece aps aproximadamente 9 minutos e com isso podemos dizer que para cada amostra e padres foram utilizado cerca de 5,4 mL da soluo Etanol/gua.

4 RESULTADOS

Tabela 1 Resultados da curva de calibrao utilizando o padro cafena. Concentrao em:

Tabela 2 Concentrao real das solues padro em mg

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Tabela 3 Concentrao das amostras analisadas em mg/350mL. (Volume de 1 Latinha)

Grfico 1

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Grfico 2 Curva de calibrao do padro cafena

5 DISCUSSO DOS RESULTADOS:

Conforme espervamos, o caf apresentou os maiores ndices de concentrao de cafena, visto que a mesma um composto muito solvel em gua a quente. Durante a preparao do caf por infuso, ocorre uma melhor dissoluo do composto devido elevada temperatura da gua (prxima ao ponto de ebulio, 100C). Como todas as outras amostras de bebidas analisadas so preparadas e consumidas a frio (entre 8C e 20C), o teor de cafena menor, j que a faixa trmica no permite concentraes to altas do alcaloide. Pensou-se na possibilidade de as indstrias informarem no rtulo dos produtos a concentrao de cafena contida, para que o consumidor tenha conhecimento da quantidade que est ingerindo, pois ainda que seja largamente consumido, o composto
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ainda um alcaloide que, se ingerido em grandes quantidades, trs malefcios sade. Observou-se, porm, que as bebidas a base desse composto apresentam em suas informaes nutricionais, apenas quantidades de carboidratos, sdio, entre outros, no fornecendo qualquer dado quantitativo ou alerta quanto ao efeito da cafena no organismo. De acordo com estatsticas oficiais, o caf est presente em 95% das residncias brasileiras. O consumo mdio per capita de caf em nosso pas atingiu (em 2010) um recorde de 4,81 kg/ano, o que representa cerca de 81 litros de caf por habitante, marca muito abaixo dos pases escandinavos (nrdicos) mas j acima de grandes consumidores da bebida, como Itlia e Estados Unidos, de acordo com o Ministrio da Agricultura. Considerando o valor obtido em nossas anlise por cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE) juntamente com estatsticas do Departamento de Qumica da Universidade Federal de Santa Catarina UFSC, observa-se que o brasileiro consome cerca de 138 mg de cafena por dia. Nvel relativamente alto, embora no totalmente danoso se considerarmos que est bem distante da quantidade necessria para causar morte, que vai de 5 a 10 g, dependendo da massa corporal do indivduo. Seria necessrio, para isso, tomar mais de 40 xcaras de caf em uma nica ocasio. Quando as concentraes de cafena no plasma sanguneo atingem nveis acima de 15 mg/L de sangue podem haver reaes txicas, e a ingesto de altas doses do composto (overdoses de cafena) so uma causa relativamente comum de emergncias de envenenamento, com 4.183 casos relatados em 2007 pela Associao Americana de Centros de Controle de Venenos. Dentre todos esses casos, houve apenas uma morte.

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Logo, conclumos que a cafena realmente um potente alcaloide vegetal que pode trazer inmeros problemas de sade se, e somente se, consumido em excesso. O consumo ocasional, ou mesmo dirio em pequenas doses, aparentemente no causa nenhum efeito colateral permanente, alm da excitao temporria do sistema nervoso central.

6 CONCLUSO

O mtodo de Cromatografia Lquida de Alta Eficincia (CLAE) foi extremamente adequado e eficiente para separar e determinar a quantidade de cafena presente nas bebidas analisadas: refrigerante do tipo cola (a saber, Coca-Cola), refrigerante do tipo guaran (da marca Guaran Antrtica), e infuso de p de caf da marca Pilo. As principais vantagens do mtodo so: a simplicidade, as amostras no precisam ser tratadas e/ou purificadas de uma maneira especial, como na tcnica de Espectroscopia por UV/Visvel, e uma certa rapidez: ocorre uma ntida separao em 11 minutos aproximadamente. A cafena atua sobre o sistema nervoso central, apresentando sintomas como excitao, disposio, mas tambm irritabilidade e ansiedade, por isso necessrio um
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controle da quantidade dessa substncia nos alimentos e bebidas, como tambm a indicao de suas quantidades nos respectivos rtulos. Entretanto, quando ingerida em quantidade moderada no apresenta riscos sade.

7 ANEXOS 7.1 Figuras e Imagens

FIGURA 1 Esquema de um cromatgrafo lquido como o utilizado no experimento.

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FIGURA 2 Estrutura molecular da cafena

FIGURA 3 Estrutura molecular da adenosina

FIGURA 4 - Estrutura molecular do Monofosfato cclico de adenosina

FIGURA 5 - Estrutura molecular da dopamina

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FIGURA 6 Corte de uma semente de caf

7.2 Tabelas Adicionais

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8 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

http://g1.globo.com/economia/mercados/noticia/2012/01/consumo-de-cafe-nobrasil-cresceu-311-em-2011-segundo-abic.html Acesso em 14/05/2012 s 23:53 http://noticias.r7.com/economia/noticias/consumo-de-cafe-no-brasil-bate-recordehistorico-20110324.html Acesso em 14/05/2012 s 23:58 http://noticias.uol.com.br/ciencia/ultimas-noticias/redacao/2011/01/28/mito-ouverdade-cafeina-em-excesso-pode-matar.htm Acesso em 14/05/2012 s 12:17 http://www.qmc.ufsc.br/qmcweb/artigos/cafeina.html Acesso em 13/05/2012 s 17:42

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http://www.infoescola.com/curiosidades/historia-do-cafe/ Acesso em 11/05/2012 s 10:30 http://analuciacava.files.wordpress.com/2011/04/cafc3a9.jpg 13/05/2012 s 15:42 CIOLA, R. Fundamentos da Cromatografia a Lquido de Alto Desempenho, Ed. Edgard Blcher LTDA, So Paulo, 1998 COLLINS, C. H. Fundamentos de Cromatografia. Editora Unicamp. Campinas SP. 2006 Acesso em

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