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Aplicaes Enzimticas

Maria Alice Zarur Coelho Priscilla Filomena Fonseca Amaral Programa de Ps-graduao em Tecnologia de Processos Qumicos e Bioqumicos

Aplicaes Enzimticas
Introduo
Enzimas podem ser aplicadas em vrias reas: Indstria de curtumes, Indstria txtil, Indstria de papel e celulose, Produo de detergentes,
- Panificao, - Cervejaria, - Sucos - Vinho - Laticnios - Modificao de Protenas

Indstria de alimentos, leos e gorduras, Produo de lcool, Indstria de Cosmticos, Biossensores, Em anlises, Em medicina

Aplicaes Enzimticas
Introduo
Principais indstrias consumidoras de enzimas:

Indstria Detergentes Processamento do amido Laticnios Cervejarias Suco de frutas e vinho Panificao Txtil e papel Couro Outras

Consumo em % 40 45 20 25 12 15 24 35 12 46 12 6 10

Aplicaes Enzimticas
Produo de detergentes
Aplicao mais conhecida das enzimas (desde os anos 60) Detergentes industriais com enzimas: - Lavagem de roupas em domiclio segmento mais importante - Lavagem de roupas industriais e institucionais - Lavagem de pratos e talheres em domiclios Enzimas em detergentes atuam em condies drsticas de meio reacional - Presena de tensoativos, alcalinizantes, perfumes, pigmentos,... - elevado pH, - elevada temperatura No Brasil: - Organon (1968) - Biopresto (Unilever) - Henkel Viva (1978-1984) - Gessy lever: Omo (1989) lder de mercado

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Produo de detergentes
Tipos de enzimas usadas em detergentes Proteases: - Mais utilizadas em detergentes - Removem manchas de ovo, sangue, suor, extratos vegetais,... - Detergentes sem enzimas: ineficiente para remover manchas de ptn - Proteases Alcalinas: Possuem pH timo alcalino e atuam em T elevada (Europa) - Microrganismo produtor: Bacillus sp. Fermentao submersa - Ex.: savinase, alcalase, subtilisin novo - Atuao sinergstica: Hidrlise limitada: manchas mais acessveis Protenas agem como cola

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Produo de detergentes
Tipos de enzimas usadas em detergentes Lipases: - Lavagem de roupas em T baixa: difcil remoo de leo e gorduras - Primeira lipase em detergente: produzida por Humicola lanuginosa - Engenharia gentica: gen introduzido em Aspergillus oryzae - LIPOLASE (Novo Nordisk) - 1988 Remove manchas de batom, frituras, azeite, molhos, etc lipase TG cidos graxos, mono, di- glicerdeos e glicerol - Estveis em pH alcalino

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Produo de detergentes
Tipos de enzimas usadas em detergentes Lipases: - LIPOLASE ULTRA (Novo Nordisk) - 1995 Desempenho melhor em baixas temperaturas (10C, da [lipolase] requerida) Engenharia de protenas: Lipolase: enzima com 269 aminocidos; Modificao de um aa prximo ao centro ativo Alterao da fora inica na zona de contato com o lipdeo
Posio 96: Asparagina Leucina neutra Molcula mais hidrofbica

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Produo de detergentes
Tipos de enzimas usadas em detergentes Amilases: - Remoo de resduos de alimentos que contm amido - Amido: atua como cola - Produo por: Bacilus licheniformis, B. amyloliquefaciens - Hidrolisam amido transformando em oligmeros de cadeia curta - Resistncia a pH alcalino e T elevadas

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Produo de detergentes
Tipos de enzimas usadas em detergentes Celulases: - Produzida por Bacillus sp. ou Humicola sp. - pH timo = 7; resistente a pH mais elevado - Modificao das fibrilas celulsicas (algodo) Degradam o tecido das roupas de algodo: remoo das fibrilas de celulose - Efeitos: Intensificao da cor Amaciamento Remoo de partculas de sujeiras

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Produo de detergentes
Tipos de detergentes industriais Detergente em p: - Dcada de 60: Enzima em p adicionada Problema: formao de poeira reaes alrgicas - Aperfeioamento das tcnicas T-granulado: enzima revestida com substncia inerte altamente resistente a impacto e abraso no forma poeira Tamanho do grnulo: similar s partculas do detergente para no segregar durante o transporte Partculas devem se dissolver rapidamente no lquido

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Produo de detergentes
Tipos de detergentes industriais Detergente lquido: - Mais difcil preservar a estabilidade da enzima Condies favorveis a Alta atividade da gua autodigesto das proteases pH alcalino (exceto pH 7-8) Compostos inicos desnaturantes - Europa: concentrao 4-10 g/L com alvejante lavagem com aquecimento - EUA e Japo: concentraes mais baixas alvejante separado

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Produo de detergentes
Tipos de detergentes industriais Detergente para mquinas de lavar loua (automtica): - Formulao: metasilicato, fosfatos e cloro alvejante - Metassilicato substitudo por disilicato (reduo do pH) abandonados (razo ambiental)

- Alvejante de cloro e fosfatos

Prejuzo no desempenho da lavagem

Adio de enzimas (remoo de amido e manchas de protenas)

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Produo de detergentes
Performance de Lavagem Quantificao do efeito das enzimas: difcil - Lavagem teste: manchas artificiais (leite, sangue, cacau, etc) aplicao em tecidos de algodo ou poliester - EMPA 116: estudo de remoo de protena roupa de algodo com leite, sangue e tinta (tinta colada pelas ptns) Hidrolise da protena necessria para remoo da tinta
Quantidade de tinta deixada aps lavagem enfraquecimento da cor indicador da contribuio da enzima

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Indstria de Curtumes
Couros crus e peles contm protenas e gorduras entre as fibras de colgeno; Cabelo - alfa-queratina: estrutura fibrosa resduos de cistena, conformao em alfa-hlice Pele Glicina, alanina, prolina, - colgeno, - alfa-queratina, hidroxiprolina; trplice hlice - elastina - albumina, - globulina, - glicoprotenas Uso de enzima: hidrlise seletiva dos constituintes no-colagenosos da pele

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Indstria de Curtumes
Pele Couro cru Salga gua Surfactantes Remolho Desengraxe CaI Na2S Depilao Purga Cromo Tanino Curtimento Couro wet-blue Proteases Lipases Proteases Tripsina

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Indstria Txtil
Fibras naturais: algodo, l, seda; Fibras sintticas: polyester, nylon, lycra Matria-prima Limpeza Fibra Fiao Fio

Tecido Acabado

Chamuscagem Desemgomagem Purga Alvejamento Tingimento

Tecido Cru

Engomagem Tecelagem

Costura Roupa Roupa Acabada Lavagem

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Indstria Txtil
Limpeza: Remover sujeiras do algodo e tornar as fibras paralelas - Liberao de fibras celulsicas: destruio da parede secundria (substncias pcticas) - Tradicional: soda custica sob presso e temperatura elevada; Problema: segurana e poluio ambiental

- Enzimtico: uso de enzimas pectinolticas Busca por microrganismos produtor de pectinase e com baixa atividade de celulases Penicilium

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Indstria Txtil
Fibras naturais: algodo, l, seda; Fibras sintticas: polyester, nylon, lycra Matria-prima Limpeza Fibra Fiao Fio

Tecido Acabado

Chamuscagem Desengomagem Purga Alvejamento Tingimento

Tecido Cru

Engomagem Tecelagem

Costura Roupa Roupa Acabada Lavagem

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Indstria Txtil
Desengomagem: Remover goma (fcula de mandioca ou goma sinttica) aplicada ao tecido antes da tecelagem - Tradicional: produtos qumicos fortes: cidos, bases ou agentes oxidantes; Problema: segurana e poluio ambiental - Enzimtico: uso de enzimas que hidrolisam amido No causam estragos no tecido Mais utilizadas: alfa-amilases bacterianas termotolerantes

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Indstria Txtil
Desengomagem:

Tipo de enzima

temperatura de operao (C) 55-65

pH

inibidores

ativadores

Amilase de malte

4,5-5,5

ons metlicos, alcali, contaminantes do amido ons metlicos, cidos ons metlicos, alcali, sequestrantes sequestrantes, surfactantes aninicos surfactantes aninicos

ons clcio

Amilase de pncreas Amilase fngica Amilase bacteriana Amilase bacteriana termoestvel

40-55 50-55 60-75 85-110

6,5-7,0 4,5-5,5 5,5-7,0 5,0-7,5

ons clcio ons clcio ons clcio

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Indstria Txtil
Fibras naturais: algodo, l, seda; Fibras sintticas: polyester, nylon, lycra Matria-prima Limpeza Fibra Fiao Fio

Tecido Acabado

Chamuscagem Desengomagem Purga Alvejamento Tingimento

Tecido Cru

Engomagem Tecelagem

Costura Roupa Roupa Acabada Lavagem

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Indstria Txtil
Alvejamento: Branqueamento do pano - Tradicional: Hipoclorito de sdio, perxido de hidrognio; Problema: resduo pode interferir no processo de tingimento - Enzimtico: Catalase para decompor o perxido de hidrognio em gua e oxignio.

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Indstria Txtil
Fibras naturais: algodo, l, seda; Fibras sintticas: polyester, nylon, lycra Matria-prima Limpeza Fibra Fiao Fio

Tecido Acabado

Chamuscagem Desengomagem Purga Alvejamento Tingimento

Tecido Cru

Engomagem Tecelagem

Costura Roupa Roupa Acabada Lavagem

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Indstria Txtil
Tingimento: - Biopolishing: Tratamento enzimtico com celulases (em algodo) Confere uma aparncia mais regular e lustrosa Remove o fuzz: filamentos minsculos da fibra que se projetam para fora da superfcie do fio

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Indstria Txtil
Tingimento: - L: Composta de protenas Facing up: franzimento da superfcie de tecidos de l Tratamento com proteases

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Indstria Txtil
Acabamento do jeans: - Tradicionalmente: Feito pela abraso com pedra-pomes - Bio-lavagem:Tratamento enzimtico com celulase dissoluo da tinta azul-ndico do brim reduz a quantidade de pedra necessria menor dano s roupas e s mquinas - Celulases usadas: Produzidas por Trichoderma sp. Humicola sp.

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Indstrias de Papel e Celulose
Matria-prima: madeira - Celulose - Hemicelulose - Lignina Pequenas fraes de extrativos

Processo de remoo da celulose: desintegrao da madeira e formao de suspenso de fibras

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Indstrias de Papel e Celulose

Processo Kraft: Cavacos + NaOH + Na2SO4 pH = 8 11; T = 55-65oC

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Indstrias de Papel e Celulose
Descascamento: - Remoo das cascas - Enzimas pectinolticas: poligalacturonase

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Indstrias de Papel e Celulose
Processo Kraft: - Cavacos + NaOH + Na2SO4 T elevada - Dissoluo da lignina - Liberao das fibras de celulose - Pasta de celulose marrom, pH = 8 11; T = 55-65oC

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Indstrias de Papel e Celulose

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Indstrias de Papel e Celulose
Branqueamento de polpa: - Cloro: mais barato, formao de substncias cloradas = presso para reduo do uso - Hemicelulose: polmeros de xilana (polmero de xilose) inibidor do branqueamento (re-precipita sobre as fibras) - Tratamento enzimtico: Xilanases sobre a polpa KRAFT - Possibilita: Retirar mais lignina Celulose mais susceptvel aos branqueadores qumicos Reduz a necessidade de agentes qumicos - Xilanase alcalina e termoestvel

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Indstrias de Papel e Celulose

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Indstrias de Papel e Celulose
Reduo do teor de resinas: - Pitch: resinas orgnicas e seus depsitos (cidos graxos, resinas cidas, steres de cidos graxos, graxas e ceras) - Glbulos de pitch: perfurao de mquinas, alterao na qualidade do papel, velocidade de produo, etc - Tratamento enzimtico: Lipases - Possibilita: Reduzir os depsitos de pitch aumento na produtividade e qualidade

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Indstrias de Papel e Celulose

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Indstrias de Papel e Celulose
Reciclagem de papel: - Celulases e hemicelulases: processamento de fibras secundrias Atuam sobre a superfcie das fibras (peeling) - Destingimento Remoo da tinta: soluo altamente alcalina escurecimento da celulose Tratamento enzimtico: Celulases alcalinas No agem sobre a tinta, Agem sobre a celulose que retm as partculas de tinta do papel (microfibrilas)

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Indstria de Alimentos
Panificao Clulas dos gros de cereais da farinha Quantidades: nem sempre ideais
Casca

contm enzimas

amilase proteases

adio necessria
Fibras, protenas, vitaminas e minerais Fonte de enzimas
Transformado em farinha no processo de moagem

Trigo

Amido Glten Triticum durum Triticum aestivum Glutenina: tenacidade e elasticidade


Gliadina: extensibilidade e viscosidade

Gluten Amido

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Indstria de Alimentos
Panificao

GLTEN

GLIADINA

GLUTENINA

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Indstria de Alimentos
Panificao O papel das amilases
Ligao -1,4

Grnulos de amido amilose 15 a 30% amilopectina 70-85%

Amilose: polissacardeo de cadeia linear 500 unidades de glicose (ligaes do tipo alfa-1,4); estrutura tridimensional: tores ou desdobramentos
Ligao -1,6

Amilopectina: Ramificaes de 20 a 40 unidades de glicose ligadas entre si atravs de ligaes alfa-1,4, ligada cadeia principal por ligaes alfa-1,6;

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Indstria de Alimentos
Panificao O papel das amilases

a-amilase: hidrolise do amido em dextrinas -amilase: Obteno de maltose

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Indstria de Alimentos
Panificao Fabricao do po

Farinha de trigo gua Acar Sal Fermento


Forno

CO2

Problemas:
a-amilase a-amilase po mole demais e aberto po solado

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Indstria de Alimentos
Panificao Fabricao do po

Farinha de trigo gua Acar Sal Fermento


Forno

CO2

Soluo:
Adio de a-amilase de origem fngica ou de malte

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Indstria de Alimentos
Panificao Cor da casca do po Amiloglicosidase

Massas refrigeradas e congeladas

a -Amilase Amiloglicosidase

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Indstria de Alimentos
Panificao Retardamento do processo de envelhecimento Melhoramento da massa Biscoitos Proteases Exoamilase maltognica bacteriana Pentosanase

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Indstria de Alimentos
Cervejaria
MALTEAO
RECEBIMENTO DE MALTE MOAGEM DO MALTE

COZIMENTO DO MALTE

FILTRAO DO MACERADO

FERVURA DO MOSTO

SEPARAO DO TRUB

RESFRIAMENTO DO MOSTO

FERMENTAO / MATURAO

FILTRAO DE CERVEJA

ARMAZENAMENTO / ENVIO DE CERVEJA FILTRADA

ENVASAMENTO

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Indstria de Alimentos
Cervejaria Maltagem: - Macerao: elevao da umidade - Germinao: ponto timo radcula da semente = 2/3 do gro produo enzimtica grande - Secagem: interrupo da germinao sem destruir as enzimas ( - e -amilases)
( -Glucana) Casca Endosperma (Amido) Epicotiledone

Cotildone

Radcula

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Indstria de Alimentos
Cervejaria Malteao Malte modo para tornar elementos constituintes acessveis ao enzimtica
Componentes Massa do gro (mg) Umidade (%) Amido (%) Acares (%) Nitrognio total (%) Nitrognio solvel (% Ntot) Poder diastasico, %L -Amilase (unidades de DE produzidas) Atividade Proteoltica Cevada 32 36 10 14 55 60 0,5 1,0 1,8 2,3 10 12 50 60 Traos Traos

aquecido e filtrado

Mosto

Malte 29 33 46 50 55 8 10 1,8 2,3 35 50 100 250 30 60 15 30

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Indstria de Alimentos
Cervejaria Malte: nico agente sacarificante permitido na fabricao da cerveja; Propostas atuais: substituio por enzimas puras ou substituio por cevada (processo de malteao caro) Ao das enzimas do malte: a-amilase, -amilase e maltase - a-amilase: tem ao sobre as cadeias da amilopectina nas extremidades noredutoras dando origem a dextrinas (ligaes a-1,6), glicose e maltose Preparao do material para a ao da -amilase - -amilase: tem ao sobre as dextrinas, somente nas ligaes a-1,4, gerando maltose, e dextrinas menores - maltase: atua sobre a maltose, gerando glicose. Dextrinas: do corpo a cerveja, aroma e sabor

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Indstria de Alimentos
Cervejaria Uso de enzimas: - Degradao do amido Enzimas especficas para as ligaes (1-6): ENDO (1-6) GLUCANASES (pululanases e isoamilases) EXO (1-6) GLUCANASES (exopululanases) Enzimas especficas para as ligaes (1-4) e (1-6): Glicoamilases - Aperfeioamento da filtrao A filtragem lenta: presena de certos polissacardeos, principalmente glucanas e pentosanas, encontrados na cevada e no malte de cevada pobremente modificado Soluo: adio de uma -glucanase macerao ou no incio da fermentao

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Indstria de Alimentos
Cervejaria Uso de enzimas:
Cerveja Light
Sob condies normais na produo de cerveja, as enzimas naturais do malte no podem hidrolisar todo amido em acares fermentveis. Cerca de 1/3 do amido convertido em dextrinas no fermentveis, que so repassadas cerveja final. As dextrinas so carboidratos, o que significa calorias. A fim de hidrolisar as dextrinas em glicose, as enzimas tambm podem ser adicionadas durante a macerao ou fermentao. A glicose quase completamente transformada em etanol e CO2 pelas leveduras. Se isto for levado em considerao na preparao do mosto, isto , se o mosto for ajustado para um extrato mais baixo, torna-se possvel produzir uma cerveja com teor normal de lcool, mas com 1/3 a menos de calorias. Esta cerveja com baixo teor de carboidratos do interesse no somente dos diabticos, que precisam limitar seu consumo de carboidratos, mas tambm a de todos os consumidores de cerveja que queiram manter a forma fsica.

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Indstria de Alimentos
Indstria de Sucos
Estrutura da parede celular vegetal
celulose

Lamela mdia Parede primria

pectina hemicelulose

Membrana plasmtica

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Indstria de Alimentos
Indstria de Sucos

Poligalacturonase

Pectinesterase

Pectina liase

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Indstria de Alimentos
Indstria de Sucos

Protopectina Macerao e Liquefao


Prensagem, viscosidade, rendimento

Pectina Poligalacturonase e Celulases

Digesto das Polpas


Reteno parcial suco na polpa Presena de arabana gelatinizao

Pectinases Hemicelulases

turvao no concentrado

Aplicaes Enzimticas
Indstria de Alimentos
Indstria de Sucos

Clarificao dos Sucos


Floculao e precipitao do complexo materiais suspensos polifenis Filtrao Problema Protopectina impedem e/ou floculao e a do complexo e pectina diminuem a precipitao

Soluo:
Pectinases Gelatina Bentonita ou Terra Diatomcea

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Medicamentos e anlises clnicas
Caractersticas adequadas: Baixa afinidade imunolgica, com afinidade dirigida ao problema em questo. Serem provenientes de organismos no patognicos, que contenham pouca ou nenhuma toxina. Alta atividade e estabilidade em pH fisiolgico, com reteno da atividade e estabilidade em soro animal.

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Medicamentos e anlises clnicas
Caractersticas adequadas: Alta afinidade pelo substrato (baixo KM) Pouca inibio pelos produtos ou constituintes normais encontrados em fluidos corporais. No tenham necessidade de cofatores exgenos Terem efetiva irreversibilidade da reao enzimtica sob condies fisiolgicas

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Medicamentos e anlises clnicas
Enzimas em medicamentos
Enzima Amilase Asparaginase Bromelina Celulase Papana Quimiotripsina Hialuronidase Lisozima Pancreatina Uroquinase Fonte Pncreas bovino ou suno Fngica Microbiana Abacaxi Fngica Mamo Mamo Testculos de bovinos Clara de ovo Pncreas bovino ou suno Urina humana Cultura de clulas Utilizao Auxiliar digestivo Leucemia Auxiliar digestivo Auxiliar digestivo Debridamento de feridas Hrnia de disco Agente dispersante Infeces Insuficincia pancretica Agente fibrinoltico

Aplicaes Enzimticas
Medicamentos e anlises clnicas
Enzimas em medicamentos Tratamento de leucemia: Degradao da L-asparagina (no plasma: essencial para sobrevida das clulas tumorais) Uso de L-asparaginase Tratamento de tromboembolias (inclusive infarto do miocardio) Streptoquinase e uroquinase: dissoluo de cogulos por ativao da fibrinolisina Condies inflamatrias: tripsina e quimotripsina

Aplicaes Enzimticas
Medicamentos e anlises clnicas
Enzimas utilizadas em diagnsticos
Enzima lcool desidrogenase Colesterol oxidase Esterase Glicose 6-fosfato desidrogenase Glicose oxidase Glicerol desidrogenase Hexoquinase Nitrato redutase Ureato oxidase Urease Fonte Levedura Fngica Fgado suno Levedura Fngica Bacteriana Levedura Fngica Bacteriana Feijo-de-porco (Jack bean) Substrato Medido Etanol, lcoois e aldedos Colesterol Triglicerdeos Glicose Glicose Glicerol ATP, glicose Nitrato Ureatos Uria

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