Crescimento e Controle

dos Microrganismos

Profa. Raquel Soares Casaes

Nunes
ISPA-UFRA
 Por que Controlar o Crescimento
Microbiano?
O bem estar da humanidade depende em grande parte
da capacidade do homem em controlar a população dos
microrganismos, visando:

- Prevenir a transmissão de doenças.

- Evitar a decomposição de alimentos.

- Evitar a contaminação da água e do ambiente.

Esse como é possível controlar?

-Ação dos agentes físicos e químicos
Ação dos Agentes de Controle
• Inibição do crescimento
 Bacteriostático • Ausência de morte celular
• Inibidor de síntese protéica

• Morte celular
 Bactericida • Ausência lise celular
• Bactericida, Fungicida,
• Viricida

• Morte celular por lise

Bacteriolítico
• Inibidor de síntese da
parede celular
 Informações Gerais

Aspectos fundamentais que se deve aplicar aos agentes

ANTIMICROBIANOS

 Padrão de morte em uma população microbiana

 Condições que influenciam a atividade antimicrobiana

 Mecanismos de destruíção das células microbianas

 Informações Gerais

 Padrão de morte em uma população microbiana

•Microbiologia – MORTE – Perda da capacidade

reprodutiva
• Avaliação da eficiência – agente microbicida
Cultivo de uma amostra de material tratado para
determinar o número de sobreviventes
 Fatores que Influenciam o Controle
Microbiano

 Condições que influenciam a capacidade antimicrobiana

• Tamanho da população quanto > + tempo p

morrer
•Concentração do agente quanto < + tempo p
Microbicida morrer
• Tempo de exposição quanto > + cels mortas

• Temperatura quanto > - tempo p

morrer
• Particularidades do microrganismo específico
 Informações Importantes
 Mecanismo de destruição das células microbianas

• Predeterminar melhores condições para o agente

• Avaliar susceptibilidade das espécies para esse

agente
• Possíveis mecanismos associados com os principais
aspectos estruturais

• Alteração do estado físico do citoplasma, inativação de

enzimas, rompimento da membrana da parede celular
 Ações dos Agentes de Controle
Microbiano
PERMEABILIDADE DA MEMBRANA

Membrana Plasmática:
-localizada imediatamente no interior da parede celular
-regula ativamente a passagem de nutrientes para dentro da célula
e a eliminação de dejetos da mesma

Lesão na membrana: causa o vazamento do conteúdo celular no

meio.
Proteínas e ácidos nucléicos

Proteínas:
- Enzimas = vitais para o desenvolvimento celular
(ligações covalentes e pontes de hidrogênio são
rompidas por certos produtos químicos e calor).

DNA, RNA:
- Fonte de informação genética.
 Métodos de Controle Microbiano
Métodos Físicos

- Calor (seco ou úmido)

- Pasteurização
- Filtração
- Baixas temperaturas
- Ressecamento
- Pressão osmótica
- Radiação
 Agentes Antimicrobianos

 Agentes Físicos
Temperatura
 Dessecação
 Filtração
 Radiação

 Agentes Químicos
 Substâncias químicas
 Agentes Físicos – Temperatura

 Calor Úmido
Menos tempo – calor seco
 Desnaturação de proteínas
 Vapor, água fervente, água aquecida a temp. abaixo
do seu ponto de ebulição (100°C)
 Cels Vegetativas Bactérias = 5 - 10 min / 60-70°C
 Cels Vegetativas Fungos = 5 - 10 min / 50-60°C
 Esporos de Fungos = 5 - 10 min / 70-80°C
 Métodos Físicos
ESTERILIZAÇÃO – Destruição de todos os microrganismos
presentes, incluindo os esporos

Efeitos distintos – Ação ANTIMICROBIANA

 Esterilização em Autoclaves
Usada para esterilização de reatores pequenos
(30 L), vidrarias, meios de cultura, etc.
 Agentes Físicos – Temperatura
• Vapor d’água

Autoclave – Vapor d’água sob pressão

• Água Fervente

- Ponto de ebulição
- Endósporos podem resistir a 100°C por mais de 1 hora

• Temperatura abaixo do seu ponto de ebulição

- Aquecimento lento
- Oxidação dos constituintes orgânicos celulares

- Mata células vegetativas de patógenos

Pasteurização

Louis Pasteur: descobriu um método prático de prevenir a

deterioração da cerveja e vinho através de um leve
aquecimento (suficiente para matar microrganismos que
causavam a deterioração sem alterar o sabor do produto).

- Principalmente utilizado na Indústria de Laticínios

- Teste de eficiência: atividade da fosfatase (enzima
presente no leite que após a pasteurização deve estar
inativada).

Tratamento Clássico: 63 ºC por 30 min

Pasteurização de Alta Temperatura e Curto Tempo
(HTST – high – temperature short-time):
72 ºC por 15 s
 Agentes Físicos – Temperatura

Calor Seco

 Mais tempo que o calor úmido

 Materiais que não podem ser esterilizados por calor
úmido

 Incineração
 Prática de rotina
 Agulhas de semeadura microbiológicas no bico de
Bunsen
 Agentes Físicos – Temperatura

 Baixas Temperaturas
•Abaixo de 0°C – microrganismos permanecem em
estado latente

• Freezer doméstico: -20°C

• Freezer -70°C

• Nitrogênio líquido: -196°C

De modo geral, os microrganismos são mais
resistentes ao frio do que ao calor.
Com algumas exceções, a temperatura de
geladeira (4°C) pode ser empregada para
conservação de culturas.
O congelamento lento promove a formação de
cristais de gelo, que perfuram a membrana e a
parede celular.
O congelamento brusco a temperaturas inferiores
a -30°C seguido de dessecamento à vácuo –
liofilização – é usada na conservação de
microrganismos.
Filtração
Passagem de um líquido ou gás através de um material
semelhante a uma tela, com poros pequenos o suficiente
para reter os microrganismos.

- Filtro de Partículas de ar de Alta Eficiência (HEPA – high

efficiency particulate air). Ex: salas de hospitais com
pacientes queimados (0,3 µm).
- Filtro de Membrana – compostos por ésteres de celulose
ou polímeros plásticos (normalmente usa-se filtro de 0,2
µm).
 Agentes Físicos – Filtração /
Dessecação
 Filtração
• Membranas – Poros retem microrganismos
• Bactérias: 0,5 – 1,0 m
• Leveduras: 1,0 – 5,0 m

 Dessecação
• Interrupção das atividades metabólicas

•Liofilização – desidratação extrema em temperaturas

de congelamento mantidas em ampolas fechadas
Filtração
Membrana de
nitrocelulose
 Filtração
AR: fluxos laminares contém filtros HEPA (High Efficiency
Particulate Air filters): removem 99,97% de partículas de 0,3
µm.
 Agentes Físicos – Radiação

• Energia – Ondas eletromagnéticas

• Quanto < maior a energia
• Raio X, gama e luz UV
 Radiação Ionizante
- Alta energia – Ionização das moléculas ( H2O ---- H+ + OH- )
- Radicais Hidroxilas destroem DNA e proteínas

- Raio X, gama – penetra pacotes de produtos e esteriliza seus

interiores
- Mais utilizados – esterilização alimentos e equipamentos médicos
 Agentes Físicos – Radiação

 Radiação Não-Ionizante

 Excitação de elétrons – Maior dano - DNA

 Mata apenas microrganismos de superfície

 Luz Ultra-Violeta (Quando estes microrganismos são expostos à

radiação UV-C, ocorre a penetração na sua parede celular
chegando até o núcleo onde se encontra a sua informação
genética. Esta absorção provoca um rearranjo codificando a
cadeia de DNA, interferindo na sua capacidade de reprodução. Os
microrganismos atingidos pela irradiação UV-C tornam-se estéreis
e inativos como resultado de um dano fotoquímico do seu ácido
nucléico.)
 - Alta toxicidade para os microrganismos

- Solúvel em água

- Estabilidade elevada

Características - Inócuo para o homem e animais

dos Agentes - Ausência de afinidade por matéria orgânica
Químicos estranha

- Toxicidade para os microrganismos em temperatura

ambiente

- Capacidade de penetração

- Não ser corrosivo e nem manchar

 Agentes Químicos

 Aplicação de compostos químicos

• Redução n° microrg. superfície – Material Inanimado

• Lesões de pele – prevenção de infecções

•Eliminação de microrg. Patogênico – água potável /

piscinas

•Vantagens quando utilizados em especificas situações

•Modo de atuação nos microrganismos
 Agentes Químicos
 DESINFETANTE é um agente que mata as formas vegetativas, mas
não, necessariamente as formas esporuladas dos micro-organismos
patogênicos. Desinfecção é o processo de destruição dos agentes
infecciosos, pelo uso de substância química, radiação ultra-violeta,
água fervente ou vapor para tratar objetos inanimados.
 Desinfetante – Mata apenas formas vegetativas patogênicas;

 ANTISSÉPTICO: semelhante ao desinfetante, previne o crescimento

ou ação de micro-organismos, pela destruição dos mesmos ou pela
inibição de seu crescimento ou atividade
 Anti-séptico – Usualmente aplicado na superfície do corpo humano;
 Agentes Químicos
Agentes / Definições
Químicos

•SANEANTE é um agente que reduz a população

microbiana até níveis consideráveis, de acordo com as
exigências de saúde pública

•Saneador – matam 99,9% dos microrg. Contaminantes

de uma área ( Normas de saúde pública / população
microrg)

• Esterilizante – Estéril (termo absoluto), mata todas as

formas vivas ;
 Agentes Químicos
 Áreas de atuação
• Parede Celular
-Fenol, Hipoclorito, Mertiolate

• Membrana Citoplasmática
-Fenol, Álcoois, Detergentes
• Material Nuclear
- Óxido de Etileno, Glutaraldeído, β-Propilactona
• Ribossomos
- Sais de mercúrio, Glutaraldeído, fenol
• Citoplasma
- Hipoclorito, Iodo, Óxido de Etileno, Metais pesados
  
 Agentes Químicos
Agente Químico Concentração Aplicações Nível de
(%) Atividade
Compostos 0.5-3.0 Desinfecção de objeto inanimado Intermediário
Fenólicos
Álcoois 70-90 Anti-sepsia da pele, desinfecção Intermediário
de instrumentos cirúrgicos
Iodo 1 Anti-sepsia da pele, pequenos Intermediário
cortes, desinfecção da água
Compostos 0.5-5.0 Desinfecção da água, superfícies Baixo
Clorados não metálicas, equipamentos de
laticínios, materiais domésticos
Mercúrio 1 Anti-sepsia da pele, desinfecção Baixo
de instrumentos

Alta – Mata todas as formas de vida microbiana

Intermediário – Mata o bacilo da Tuberculose, Fungos e vírus, mas não os esporos
Baixo – Não mata o bacilo da tuberculose, nem os esporos e vírus em um tempo aceitável
 Agentes Químicos

 Principais Grupos de Desinfetantes e Anti-sépticos

• Fenol e Compostos Fenólicos;

• Mata rapidamente formas vegetativas;

• Tóxico e apresenta odor desagradável;

•Alteram a permeabilidade da membrana, desnatura

proteínas;

• Agente Bacteriostático ou Bactericida

 Fenóis e Derivados

-fenol: pouco usado como anti-séptico ou

desinfetante devido irritação da pele e odor
desagradável.

-compostos fenólicos: fenol com detergente ou

sabão, que reduz as qualidades irritativas com
aumento da atividade antibacteriana.
-mecanismo de ação: inativam enzimas e
desnaturam proteínas.
Derivados do Fenol: cresóis

Creolina
Desinfecção

Timol
Antissépticos
 http://www.3dchem.com/molecules.asp?ID=191

http://3.bp.blogspot.com

Triclosan
o

Sabonetes
antibacterianos
0,25% Triclosan:
sabonete http://media1.onsugar.com/files

http://www.mnn.com/health

http://glynnesoaps.com/soap_blog
 Alcoóis

Aplicação:desinfetante de nível intermediário. Ação:

ruptura da membrana celular e desnaturação das
proteínas.
Apresentação mais frequente: álcool etílico e álcool
isopropílico entre 60 e 90%.
 O etanol puro é menos efetivo que as soluções
aquosas (etanol + água), pois a desnaturação requer
água
 Alcoóis
Etílico, Metílico, Isopropílico, Propilenoglicol

ÁLCOOL ETÍLICO a 70 - 80%

Desnaturação das proteínas / Dissolução dos

lipídeos

Antissepsia e desinfecção
Bactericida para células vegetativas

- eliminam bactérias e fungos, mas não esporos e

vírus não envelopados.

- mecanismo de ação: denaturação de proteínas.

- desvantagem: evaporam muito rápido sem deixar

resíduos.
 Agentes Químicos
• Halogênios (Hipoclorito)
- Iodo, Cloro e Bromo – Fortes agentes oxidantes;

- Destruição dos componentes vitais da célula

microbiana;
- Inativação do aminoácido tirosina;
- Agente Microbicida
Halogênios

Iodo

-efeito
letal contra todos os tipos de bactérias, muitos
esporos, vários fungos e vírus.

-mecanismo de ação: inibição protéica.

-pode ser encontrado como tintura (iodo em solução

com álcool) ou como iodóforo (iodo com compostos

orgânicos, onde o iodo é liberado lentamente).

 Cloro

- largo uso como desinfetante.

- ação microbicida ocorre somente na forma de ácido
hipocloroso (HOCl), que se forma quando o cloro é
adicionada à água.

- mecanismo de ação: não totalmente conhecido, mas

sabe-se que o HOCl é muito oxidante, impedindo o
funcionamento do sistema enzimático da bactéria.
- Agente de baixo a alto nível
 Agentes Químicos
• Detergentes

- Desnaturação de proteínas celulares, interferência com processos

metabólicos e lesão da membrana citoplasmática

- Agente Bactericida

• Metais pesados e seus compostos

- Atividade de íons metálicos – inativação de certas enzimas que

combinam com o metal ( Moeda )
 Sabões e Detergentes

Quaternário de Amônia- Baixo nível

Agentes de superfícies de limpeza geral

Rompimento de membranas
citoplasmáticas
Cloreto de benzalcônio
Cloreto de cetilpiridínio
Biguanidas

Biguanidas - Clorexidina

Rompimento de membranas
citoplasmáticas
bactericida
atóxico, persistente.
assepsia (escovação cirúrgica)
bacteriolíticos
Metais pesados
Mercúrio, Prata, Cobre e Zinco-

Desnaturação de proteínas
Desinfetantes
Anti – sépticos
Desvantagens:
Baixo índice terapêutico
Intoxicação por absorção

Hidroxiquinolina de cobre
Hg: grande espectro de ação, com efeito bacteriostático. Como
desvantagem é tóxico, corrosivo e ineficaz na presença
de matéria orgânica.

http://ipochoclo.blogspot.com/2010/06/merthiolate.html
 Resumo: tipos de desinfetantes
 Álcoois
 Aldeídos
 Fenol e compostos fenólicos
 Halogênios
 Agentes oxidantes
 Compostos quaternários de amônia
 Biguanidas
 Metais pesados e seus compostos
 Agentes de superfície
Ácidos inorgânicos e
orgânicos

ÁCIDOS INORGÂNICOS

ÁCIDO BÓRICO
Desnatura proteína
Alta toxicidade
ÁCIDOS ORGÂNICOS
Ácido sórbico, Ácido acético, Ácido lático,
Ácido benzóico e Ácido propiônico

Desnaturação protéica

Conservantes de alimentos

Atividades bacteriostática e fungistática

 Agentes Químicos

 Esterilizantes químicos
• Óxido de Etileno

- Inativação de enzimas e proteínas que tem átomos de hidrogênio

- Seringas
• β-Propilactona
- Bactericida, Fungicida, Esporicida e Viricida

- Propriedades carcinogênicas
 Agentes Químicos

• Aldeídos: Glutaraldeído- Equipamentos

- Instrumentos urológicos e respiratórios
- Bactericida, Esporicida, Fungicida e Viricida

• Aldeídos: Formaldeído- equipamentos

- Extremamente tóxicos
- Inativação dos constituintes celulares ( Proteínas e Ácidos
nucléicos)
Crescimento in vitro: Meio de
Cultura
Material nutriente preparado no
laboratório para crescimento de
microrganismo

Agar nutriente Agar

Caldo nutriente inclinado

Prolab.com.pr
 Meios de Cultura
Critérios para escolha dos Meios
de Cultura:

 Componentes nutricionais corretos, em

quantidades e proporções

 Condições adequadas de incubação

 pH ajustado

 Estéril
 Meios de cultura
CLASSIFICAÇÃO DOS MEIOS DE
CULTURA:
 Meios de Cultura
Classificação de acordo com o Estado
Físico:
Líquidos ou caldos:
sem agente solidificante  nutrientes dissolvidos
em solução aquosa

não há formação de colônias

Utilizadopara aumentar o número de

microrganismos e para provas bioquímicas
 Meios de Cultura
Classificação de Acordo com o Estado
Físico:
Sólidos:
Adição de uma substância solidificante em
determinada quantidade (1 a 2%), o ágar

Superfície endurecida- permitem a formação de

colônias paradistinção da morfologia, isolamento de
colônias, conservação de cepas
 Meios de cultura
Classificação de Acordo com o Estado Físico:
Semi sólidos:
Adição de uma substância solidificante em menor
quantidade (0,5 a 0,8%)
 Estudos da mobilidade, testes bioquímicos

PROLAB
 Meios de cultura
Classificação de Acordo com o Estado Físico:
Agentes solidificantes

Ágar: polissacarídeo complexo de galactose,

extraído de algas marinhas

Gelatina: polissacarídeo extraído de cartilagem de

mamíferos

Sílica-gel:substância inorgânica inerte e inatacável

por enzimas microbianas
 Meios de cultura
Classificação Química:
Simples (ou básicos):

- permitem o crescimento bacteriano sem satisfazer

exigência em especial

Ex.: Caldo e Ágar simples

EX:
Componentes Quantidades
Glicose 5,0g
Fosfato de amônia monobásico 1,0g
Cloreto de sódio 5,0g
Sulfato de Magnésio 0,2g PROLAB
Fosfato de potássio dibásico 1.0g
Água 1 litro
 Meios de cultura
Classificação de acordo com a procedência dos
Constituintes:

Naturais (ou Complexos):

https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/R10101#/R10101

sem composição química definida, geralmente extratos

vegetais, animais ou de outros microrganismos

usados para microrganismos menos exigentes na nutrição

Ex.: Meio de Löwenstein Jensen (Mycobacterium

tuberculosis)

contém sais, ovos e pedaços de batata

 Meios de cultura
Meio Complexo
Ex: Ágar nutriente
Componentes Quantidades
Peptona (Proteína parcialmente digerida) 5,0G
Extrato de carne 3,0G
Cloreto de sódio 8,0G
Agar 15,0G
Água 1 Litro
 Meios de cultura
Classificação Funcional
 Meios de contagem: determinação quantitativa  Ágar de
Contagem em Placas, Ágar Baird-Parker

 Meios de estocagem ou manutenção: conservação de

microrganismos  Ágar Sabouraud

 Meios de triagem: caracterização e identificação 

 Tríplice açúcar e ferro

 Meios de identificação: provas bioquímicas e

verificação de funções fisiológicas  Ágar citrato, Caldo
nitrato
 Meios de cultura
Classificação Funcional

 Meios de Pré-Enriquecimento:

análise de material desidratado recuperação de organismos

danificados recuperação da célula antes da inoculação

Ex.: Água peptonada e caldo lactosado 

isolamento de Salmonella

PROLAB
 Meios de cultura
Classificação Funcional
 Meios de Enriquecimento:

proporcionam nutrientes ao crescimento de microrganismos

e assim inibi também a presença de microrganismos
competidores

Ex. Caldo Tetrationato e Selenito-Cistina  Salmonella sp.

Caldo Tioglicolato Clostridium perfringens.
37ºC por 24 horas

PROLAB
Meio de Enriquecimento

▪ Isolamento de bactérias presentes

em pequeno número junto com
outras que estão em grande
quantidade – geralmente é liquido e
contém todos os nutrientes
necessários para favorecer a
multiplicação da bactéria de
interesse
 Meios de cultura
Classificação Funcional

▪ Seletivo – elaborados com o objetivo de favorecer

o crescimento da bactéria de interesse e impedir
o crescimento de outras bactérias

▪ Diferencial – utilizado para fácil identificação da

colônia de bactéria de interesse quando existem
outras bactérias crescendo na mesma placa
 Meios de cultura
Classificação Funcional
 Meios Diferenciais:

permite estabelecer diferenças entre microrganismos

parecidos facilita a identificação da bactéria quando
existem outras bactérias crescendo no mesmo meio

Ex.: Ágar Sangue, que contém células vermelhas do

sangue, é muito utilizado pelos microbiologistas para
identificação de espécies bacterianas capazes de
destruir células sanguíneas.
▪ Exemplo: Agar MacConkey – Considerado
seletivo e diferencial

▪ Composição –Sais biliares e cristal violeta-

Inibidores do crescimento de bactérias gram-
positivas – Seletivo

▪Lactose – Permite diferenciar bactérias

fermentadoras de lactose ( colônias vermelhas
ou rosas) das não fermentadoras( colônias
incolores)
Agar MacConkey

Finalidade : Isolar Bactérias Gram negativas fermentadoras de lactose

Estufa bacteriológica a 37ºC
Jarra de Anaeróbiose
Os meios de cultura contendo
bactérias anaeróbias devem ser
incubados e seladas em jarras
contendo
Contendo substâncias químicas que
removam o oxigênio do ar e gerem
dióxido de carbono.

H2O 5% O2 e 18% CO2

Envelope contendo: CO2

Bicarbonato de sódio + H2 + O2 → H2O
Boroidreto de sódio

Catalisador
(Paládio)
Câmara de Anaerobiose
As culturas são introduzidos na
câmara através de um vedador de ar, e o técnico faz
uso de luvas acopladas para manipular as culturas.

85% N2, 10% H2 e 5% CO2

Métodos de Contagem Bacteriana

Profa. Raquel Casaes

ISPA/UFRA
 Métodos de Contagem Bacteriana

Contagens Microscópicas
Bactérias Totais
Métodos Turbidimétricos

Métodos de
Contagem
Bactérias Viáveis
Contagem em Placa
 Métodos de Contagem Bacteriana 250 cel. 0,02
mm3
250 cel. 0,00002
x cel. 1 mL
Câmara de contagem de células mL
x= 1,25 x 107
cel./mL
12.500.000
cel./mL
250 cel. = 25 X 10

0,02 mm3
 Métodos de Contagem Bacteriana

• É um método de contagem direto

• Contam células vivas e mortas;
• Mais adequado para amostras liquidas
• A amostra deve possuir pouco material
particulado
• População deve ser elevada;
• Mais fácil para culturas mono-
microbianas e de células isoladas;
• Não é adequado para bactérias móveis
• Rápido e com resultados imediatos;
• Resultados podem bastante ser
influenciados pelo executor;
 Métodos de Contagem Bacteriana

A turvação da amostra bacteriana é determinada

espectrofotometricamente;

Métodos
Turbidimétricos

Medida da Turvação por Comparação

com Escala Padrão
 Métodos de Contagem Bacteriana

maior a transmitância (T)

Quanto menor a quantidade de bactérias
menor a absorbância (Abs)

maior a absorbância (Abs)

Quanto maior a quantidade de bactérias
menor a transmitância (T)
 Métodos de Contagem Bacteriana

Abs Curva Padrão

Leitura

0,860

3.000

Contagem de Bactérias / mL
Métodos de Contagem Bacteriana

Tubo da Quantidade de Bactérias

Escala de McFarland Escala x 106 bactérias /mL
0,5 150 (1,5 x 108)
1 300 (3,0 x 108)
2 600 (6,0 x 108)
3 900 (9,0 x 108)
4 1200 (1,2 x 109)
5 1500 (1,5 x 109)
6 1800 (1,8 x 109)
7 2100 (2,1 x 109)
8 2400 (2,4 x 109)
9 2700 (2,7 x 109)
10 3000 (3,0 x 109)
Método de Contagem em
Placas

Guerra, 2016
Bibliografia