Estruturas extracelulares das bactrias e endosporos

Estruturas extracelulares das bactrias

Cpsula Pilis comuns Pilis sexuais Flagelos Endosporos

A cpsula bacteriana

Colorao da cpsula bacteriana com tinta da China e fucsina

Clula Cpsula

Observao da cpsula bacteriana com anticorpos fluorescentes anti-antignio capsular (K)

Observao da cpsula bacteriana em microscopia de contraste de fase e fundo brilhante

Streptococcus pneumoniae: diplococos extracelulares com cpsula

Diplococos Gram + rodeados por cpsula (zona clara)

Neutrfilos

Funes da cpsula
A cpsula confere proteco s bactrias contra a aco de:
Sistema do complemento Bacterifagos Anticorpos IgG Bacteriocinas (ex. colicinas)

A cpsula tem carga negativa repelindo as macromolculas aninicas e impedindo a ligao e penetrao de protenas de carga negativa cujos receptores se encontram na membrana externa (ex. colicinas e componentes do soro, incluindo as IgGs e os factores do complemento).

Funes da cpsula: proteco contra a fagocitose

fagocitose (2).lnk

cpsula protege da fagocitose.lnk

Camadas mucosas e glicoclice

So estruturas que recobrem a parede celular mas que no tm uma organizao bem definida como a cpsula. So tambm constitudos por polissacridos. Tm um papel importante na adeso das bactrias a tecidos dos hospedeiros. Tal como a cpsula, a sua presena nas bactrias poder dificultar a fagocitose e, eventualmente, a aco de anticorpos. Podem ainda ter uma funo importante ao nvel da preveno da dissecao uma vez que possuem um contedo grande em gua, tal como a cpsula.

Bactrias empacotadas em glicoclice

Camadas S
So estruturas de natureza proteica que recobrem a parede celular Existem em bactrias Gram + e Gram - . Tm uma estrutura complexa mas nitidamente diferente da estrutura capsular. Podem ter como funes a proteco da clula bacteriana contra ies e flutuaes de pH, stress osmtico, enzimas, etc. Pode tambm contribuir para a virulncia de algumas espcies bacterianas.

Pilis comuns e pilis sexuais

A- Fotografia de microscopia electrnica de E. coli em colorao negativa mostrando flagelos ondulantes e numerosos pilis comuns, estruturas tipo cabelo mais pequenas e rgida.

B- Fotografia de microscopia electrnica de E. coli em colorao negativa mostrando o pili sexual (pili F) que bastante mais comprido que os pilis comuns. O pili sexual pode ser distinguido dos outros pilis pela infeco das bactrias por um bacterifago que se ligue especificamente ao pili sexual.

Pilis comuns/Fmbrias
So estruturas encontradas em bactrias Gram negativas, que recobrem a superfcie celular e no esto, em geral, envolvidas na mobilidade das bactrias. Uma clula bacteriana pode estar envolvida por mais de 500-1000 fmbrias. So compostos por um nico tipo de protena_ pilina_ e tm vrios m de comprimento. So determinados por genes cromossomais.

Tipos de pilis comuns existentes em bactrias

invasinas

Membrana da clula hospedeira

Movimentos de contraco e distenso

Pilina secreo secreo

Membrana externa Periplama Membrana citoplasmtica

Pili tipo IV

Pili tipo II

Pili tipo III

A adeso s clulas da uretra por pilis do tipo IV impede a remoo das bactrias pela urina

Pilis tipo III e invaso das clulas do hospedeiro pelas bactrias

http://www.cat.cc.md.us/courses/bio141/lecguide/unit1/bacpath/invade.html#pen

Shigella a passar pela membrana mucos e invadindo as clulas epiteliais da mucosa

A proposed model for invasion of epithelial cells of the colon. 1) The Shigella first cross the mucosa by passing through specialized cells called M cells. The M cell passes the Shigella on to a macrophage from which it subsequently escapes - possibly by inducing apoptosis, a programmed cell suicide. 2) The Shigella then uses its invasins to enter the mucosal epithelial cells from underneath. The invasins cause actin polymer rearrangements in the cell's cytoskeleton resulting in the bacterium being engulfed and placed in an endocytic vesicle in a manner similar to phagocytic cells. Once inside, the Shigella escape from the vacuole into the cytoplasm and multiply. 3) The Shigella are able to move through the host cell and spread to adjacent host cells by a unique process called actin-based motility. In this process, actin filaments polymerize at one end of the bacterium, producing comet-like tails that propel the Shigella through the cytoplasm of the host cell. 4) When they reach the boundary of that cell, the actin filaments push the Shigella across that membrane and into the adjacent cell.

Pili sexual
Existem cerca de 1-10 por clula So maiores que as fmbrias e so determinados por plasmdios sexuais (ou plasmdio F) que participam na conjugao bacteriana . Alguns bacterifagos (ex. bacterifago M13) contm os seus receptores nos pilis sexuais.

O pili sexual fundamental para O fenmeno da conjugao

Pilis comuns (Fmbrias)

Pili sexual

Flagelos e mobilidade bacteriana

Composio e estrutura dos flagelos

Os flagelos so apndices bacterianos de natureza proteica, que se projectam para o exterior da clula. So rgos de locomoo bacteriana Tm 15-20 m de comprimento Tm 14-20 nm de espessura So constitudos por subunidades proteicas: flagelina

Localizao dos flagelos

Consoante a sua posio classificam-se em: Montrico Vibrio sp.,
Pseudomonas sp., Aeromonas sp.

Anftricos Loftricos Pertricos

Salmonella sp. Escherichia coli

Colorao de Leifson para observao de flagelos

P. mirabilis

V. parahaemolyticus Flagelao pertrica

Constituio do flagelo
Filamento (flagelina) Gancho Corpo basal- Sistema de anis que se inserem no: LPS (Gram -) _ Anel L Peptidoglicano_ Anel P Membrana citoplasmtica_ Anel S-M Protenas Mot (motor flagelar) e Fli (ligao do motor)

Anel L

Anel P

Anel S-M

A rotao dos flagelos consome energia e depende do complexo Mot

Energia protes que atravessam a membrana atravs do complexo Mot
Mot Mot Fli

ROTAO DO FLAGELO
1000 protes 1 rotao

Flagelos montricos (polares) e movimentao polar

Movimentao com flagelos pertricos

Movimentao para a frente

Rotao sobre si prpria ou movimentao pertrica

Mobilidade bacteriana sem flagelos

Pode ocorrer por deslizamento, no caso das Cianobactrias (bactrias fotossintticas). Pode ocorrer por movimentos de contraco e distenso
devido existncia de um filamento co-axial, no caso das espiroquetas (exs. Treponema pallidum e T. denticola) devido existncia de pilis do tipo IV em bactrias Gram negativas.

Existe ainda a mobilidade invasiva (swarming) que depende de flagelos laterais, diferentes dos flagelos que vimos at aqui.

Mobilidade invasiva (swarming)

da Aeromonas caviae (causa diarreias em crianas)

Clulas pequenas, mveis e vegetativas de uma colnia diferenciam-se em clulas alongadas e hiperflageladas (flagelos laterais) que se agrupam formando jangadas e migrando para longe da colnia.

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Mobilidade invasiva dos Proteus sp.

Condies ptimas para observar crescimento invasivo

Aeromonas sp.

Meio ptimo: Eiken Agar 0,5% (wt/vol)

Os genes laf so essenciais para a flagelao lateral

Os genes lafA1 e lafA2 codificam para os flagelos laterais na espcie Aeromonas caviae As bact bactrias laf+ laf+ apresentam mobilidade invasiva e possuem flagela flagelao lateral As bact bactrias laflaf- no apresentam mobilidade invasiva e possuem apenas flagelos polares

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mobilidade invasiva pode constituir uma adaptao que facilite a colonizao das clulas do hospedeiro, uma vez que permite o movimento superfcie e em ambientes altamente viscosos.

O endosporo bacteriano

So estruturas particularmente resistentes formadas por algumas bactrias Gram +. Os endosporos so muito resistentes s seguintes condies de stress ambiental:
Calor Radiao U.V. Desinfectantes qumicos Dissecao

A posio do endosporo na clula difere de acordo com as espcies bacterianas sendo, portanto, um elemento til de identificao. Assim os esporos podem ter localizao:
Central Subterminal Terminal

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 constitudo por cidos nucleicos, cido dipicolnico e a maior parte do potssio, clcio, mangansio e fsforo presente no Parede dode esporo endosporo. Cerca 15% do peso seco do endosporo constitudo por cido dipicolnico complexado com ies de clcio. Exsporo No protoplasto tambm esto presentes quantidades substanciais de protenas bsicas de baixo peso molecular, as SASPs, que so rapidamente degradadas durante a germinao do endosporo. constitudo principalmente porEstas protenas constituem 10-20% peptidoglicano, da quantidade total de protenas do em que 45-60% dos esporo dormente. resduos de cido murmico no tm o substituinte peptdico ou N-acetil normais formando, alternativamente, uma amida interna conhecida por lactmico murmico.

Invlucros do esporo
OsCitoplasma invlucros do esporo constituem a maior parte do esporo e so sobretudo de natureza proteica. Podero conter pequenas quantidades de lpidos e carbohidratos Cortex complexos e quantidades elevadas de fsforo. O invlucro externo confere resistncia aos compostos alcalinos.

Diferenas entre endosporos e clulas vegetativas

Caractersticas
Estrutura

Clula vegetativa
Clula Gram (+) tpica

Endosporo
Crtex espesso Invlucro Exosporo

Aspecto microscpico Contedo em clcio cido dipicolnico Actividade enzimtica Metabolismo (utilizao de oxignio) Sntese de macromolculas ARNm Resistncia ao calor Resistncia a radiaes Resistncia a compostos qumicos Colorabilidade Aco da lizosima Contedo em gua Protenas SASPs PH citoplasmtico

No refrctil Reduzido Ausente Elevada Elevado Presente Presente Reduzida Reduzida Reduzida Corvel Sensvel Elevado, 80-90% Ausente Prximo de pH7

Refrctil Elevado Presente Reduzida Reduzido ou ausente Ausente Reduzido ou ausente Elevada Elevada Elevada Corvel somente com mtodos especiais Resistente Reduzido, 10-20% do 'core' Presente Prximo de pH5.5-6.0 (no 'core')

Adaptado de: Madigan, M.T., Martinko, J.M., Parker, J. 1997. Brock Biology of Microorganisms. pp. 97,Prentice Hall.

Resistncia intrnseca dos endosporos bacterianos aos biocidas

Os endosporos so as formas bacterianas mais resistentes aos agentes biocidas. Tanto os invlucros do esporo como o cortex so importantes na resistncia do esporo aos biocidas. As SASPs parecem ser determinantes para a resistncia do endosporo s radiaes ultravioletas e aos biocidas qumicos (ex. perxido de hidrognio). Alguns biocidas actuam sobre o endosporo durante a fase de germinao (fase inicial da passagem do endosporo forma vegetativa). o caso dos derivados fenlicos e dos parabenos. Outros agentes biocidas actuam ao nvel do crescimento do endosporo (fase final da passagem do endosporo forma vegetativa bacteriana). o caso da clorhexidina e dos compostos de amnio quaternrio. O glutaraldedo actua em ambas as fases.

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Resistncia do endosporo no calor

devida a vrios factores:
Estabilizao do ADN por intermdio de formao de complexos com o dipicolinato de clcio Desidratao do protoplasto Maior estabilidade das protenas

Endosporulao e passagem do endosporo forma vegetativa

A endosporulao um processo complexo com sete passos que comea normalmente quando o crescimento bacteriano pra devido falta de nutrientes. Dura cerca de 10h no Bacillus megaterium. Por sua vez, a passagem de um endosporo a uma clula vegetativa ocorre em apenas trs fases:
1) Activao Processo reversvel que prepara o esporo para a germinao e que normalmente resulta de tratamentos diversos como, por exemplo, o aquecimento. 2) Germinao Caracterizada pelo inchao do endosporo, ruptura do invlucro do esporo, perca de resistncia ao calor e a outros stress ambientais, libertao de componentes do endosporo e aumento de actividade metablica. A germinao pode comear, aps a activao induzida pela adio de nutrientes (ex. aminocidos e aucares). 3) Crescimento o protoplasto fabrica novos componentes, emerge do invlucro e origina-se uma nova forma vegetativa.

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