XI Encontro Latino Americano de Iniciao Cientfica e

VII Encontro Latino Americano de Ps-Graduao Universidade do Vale do Paraba

5
PROPRIEDADES ESPECTROSCPICAS DA FEOFITINA E CLOROFILA

Adriana Lima
1
, Augusto Gracetto
2
, Vagner Batistella
2
, Adriana Passarela
Gerola
2
, Noboru Hioka
2
, Divinomar Severino
3
, Antnio Eduardo da Hora
Machado
4
, Mira R. Rodrigues
5
, Hueder P. M. de Oliveira
5

1
Universidade do Vale do Paraba/ FCS. Av. Shishima Hifumi, 2911 So Jos dos Campos SP
2
Universidade Estadual de Maring /Departamento de Qumica. Av. Colombo, 5790 Maring
PR
3
Universidade de So Paulo / Instituto de Qumica. Av. Prof. Lineu Prestes, 748, So Paulo SP.
4
Universidade Federal de Uberlndia/Instituto de Qumica Laboratrio de Fotoqumica. Av. Joo
Naves de vila, 2121 Bloco 1D 38408-100 Uberlndia, MG
5
Universidade do Vale do Paraba/ IP&D. Av. Shishima Hifumi, 2911 So Jos dos Campos SP
drikalima00@hotmail.com, mrr@univap.br, hueder@univap.br

Resumo: Com o intuito de verificar a influncia do solvente no comportamento fotofsico da
clorofila e da feofitina, corantes com alto potencial para uso em Terapia Fotodinmica (TFD),
estudos espectroscpicos de fluorescncia foram feitos em misturas gua/etanol. Por ser
hidrofbicas, as caractersticas espectroscpicas desses compostos so melhor visualizadas em
proporo maior de etanol. Em altas concentraes de gua, tanto a clorofila quanto a feofitina,
tendem a formar agregados dimricos ou com estruturas maiores, dificultando sua aplicao em
TFD, uma vez que o fenmeno de auto-agregao diminui a capacidade de formao de oxignio
singlete. importante o desenvolvimento de novos estudos para mostrar uma melhor adequao
da proporo de solventes para uma melhor absoro/emisso dessas molculas, para eventuais
aplicaes futuras no ramo da biomedicina.

Palavras chave: Clorofila e feofitina, fluorescncia, agregao.

rea de conhecimento: Qumica e Engenharia Biomdica.

Introduo

A clorofila um derivado porfirnico
classificado como clorina, sendo metalada
com o on Mg
2+
, possuindo ainda cadeia
longa e apolar, acarretando em carter
hidrofbico. um importante pigmento,
participando na fotossntese das plantas. O
processo de fotossntese serve para a
produo de matria orgnica e para
liberao de oxignio em todas as plantas
autotrficas (DOLPHIN, 1978).
Outras clorofilas podem ser
sintetizadas por meio da substituio do on
Mg
2+
por Zn
2+
e Cu
2+
. Particularmente, a
feofitina o derivado no-metalado da
clorofila. Clorofila e feofitina apresentam alta
absoro de luz dentro da janela teraputica,
o que favorece a aplicao em Terapia
Fotodinmica (TFD). Os compostos geram
oxignio singlete com bons rendimentos
qunticos (de 0,60 a 0,85) quando so
excitadas em solventes orgnicos puros
(NYMAN e HYNNINEN, 2004).
Neste trabalho, estudou-se a
influncia do solvente nas propriedades da
Clorofila e da feofitina.

Materiais e Mtodos

Foram utilizadas onze solues
contendo clorofila ou feofitina (50 L da
soluo estoque com concentrao de
5,885x10
4
mol/l-clorofila 3,95x10
-4
mol/l-
feofitina) em 2 mL de diferentes propores
gua/etanol. As medidas foram feitas a 298
K. A gua empregada no preparo das
solues era de grau Milli-Q, enquanto que o
etanol era de grau espectroscpico. Ambos
os pigmentos fornecidos pela UEM
Os espectros de excitao e emisso
foram obtidos em um espectrofluormetro
Jobin-Yvon Spex FloroMax-2. Os espectros
de emisso foram tomados a partir dos picos
de mximo de intensidade dos espectros de
excitao das amostras. As amostras foram
acondicionadas em cubetas de quartzo 1x1
cm. Os espectros de excitao foram feitos
para a obteno do valor do comprimento de
onda de excitao e conseqentemente os
espectros de emisso das porfirinas.
Estudos de RLS (Espalhamento de
luz ressonante) foram realizados por meio da
varredura simultnea de monocromadores de
emisso e excitao, no intervalo de 200 a
800 nm com de 0 nm, a fim de verificar o
processo de auto-agregao.

Resultados e discusso

Os espectros de fluorescncia so
largos e apresentam a mesma estrutura, e as
intensidades das bandas variam com a
proporo de solventes. Para ambos os
corantes, os dados evidenciam uma
dependncia da fluorescncia com a
proporo de gua.
A figura 1 ilustra a relao entre a
intensidade de absoro para a clorofila e
a porcentagem de gua. possvel perceber
uma maior intensidade de absoro em
etanol puro, com o composto apresentando-
se na forma monomrica. Na medida em que
a proporo de gua na mistura cresce, a
intensidade de absoro cai, fato associado
com o fenmeno da auto-agregao da
porfirina.
400 450 500 550 600 650 700
0
1x10
5
2x10
5
3x10
5
4x10
5


I
n
t
e
n
s
i
d
a
d
e

(nm)
0%degua
10%degua
20%degua
30%degua
40%degua
50%degua
60%degua
70%degua
80%degua
90%degua
100egua

Figura 1: Variao na absoro de luz pela
clorofila em misturas gua/etanol.

As figuras 2 e 3 ilustram a emisso
de fluorescncia para a clorofila em mistura
gua/etanol. possvel perceber que o pico
da intensidade de fluorescncia apresenta
um decrscimo gradativo a partir de 40% de
gua, sendo que a 50% a banda apresenta
baixa intensidade em relao s amostras
com teor menor de gua. A partir de 60% de
gua, a fluorescncia da clorofila
praticamente desaparece, o que justifica que
a partir dessa porcentagem a porfirina est
completamente agregada.
Durante a formao da espcie
agregada, as unidades monomricas se
associam e se estabelecem de maneiras
diversas, sendo possveis diferentes
orientaes de momentos dipolares de
transio de cada monmero (KASHA, 1963;
ARBELOA et al 1982).
Na figura 3, possvel perceber a
total supresso da fluorescncia da clorofila
, a partir de 60% de gua.
660 680 700 720 740 760
0
1x10
5
2x10
5
3x10
5


I
n
t
e
n
s
i
d
a
d
e

(nm)
0%degua
10%degua
20%degua
30%degua
40%degua
50%degua
60%degua
70%degua
80%degua
90%degua
100%degua

Figura 2: Variao de emisso da clorofila
em misturas gua/etanol.

0 20 40 60 80 100
0
1x10
4
2x10
4
3x10
4
4x10
4


I
n
t
e
n
s
i
d
a
d
e

d
e

E
m
i
s
s

o
% de gua

Figura 3: Variao da intensidade de
emisso da clorofila em funo da
porcentagem de gua.

A figura 4 apresenta o espectro de
excitao da feofitina. Em etanol puro, o
comportamento o mesmo: elevada
intensidade de fluorescncia, sugerindo a
XI Encontro Latino Americano de Iniciao Cientfica e
VII Encontro Latino Americano de Ps-Graduao Universidade do Vale do Paraba

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presena apenas de monmeros na soluo.
A partir de 50% de gua, a intensidade de
excitao praticamente nula.

400 450 500 550 600 650 700
0,0
5,0x10
4
1,0x10
5
1,5x10
5


I
n
t
e
n
s
i
d
a
d
e

(nm)
0%de gua
10%de gua
20%de gua
30%de gua
40%de gua
50%de gua
60%de gua
70%de gua
80%de gua
90%de gua
100%de gua
Figura 4: Variao no espectro de excitao
da feofitina em misturas gua/etanol.

Com o mximo de excitao da
feofitina (Figura 4), obtiveram-se as emisses
para as misturas (Figura 5), de acordo com o
volume de gua.

660 680 700 720 740 760
0
1x10
4
2x10
4
3x10
4


I
n
t
e
n
s
i
d
a
d
e

(nm)
0% de gua
10%de gua
20%de gua
30%de gua
40%de gua
50%de gua
60%de gua
70%de gua
80%de gua
90%de gua
100% de gua
Figura 5: Variao da emisso da feofitina
em misturas gua/etanol.

A feofitina apresentou o fenmeno da
auto-agregao com uma quantidade menor
de gua, quando comparada clorofila. A
figura 6 ilustra o decrscimo e a dependncia
de gua no mximo de intensidade de
emisso da feofitina.



0 20 40 60 80 100
0
1x10
4
2x10
4
3x10
4
4x10
4


I
n
t
e
n
s
i
d
a
d
e

d
e

E
m
i
s
s

o
% de gua

Figura 6: Variao da intensidade de
emisso da feofitina em funo da
porcentagem de gua.

A adio do solvente orgnico, o
etanol, favorece a existncia da clorofila e da
feofitina na forma monomrica, manifestando
altas intensidades de excitao e emisso.

Concluso

Ambos os corantes apresentam
caractersticas favorveis para aplicao em
Terapia Fotodinmica como a absoro de
luz na faixa teraputica entre 660 e 670 nm,
com elevadas absortividades molares.
Devido alta hidrofobicidade, o processo de
auto-agregao ocorre facilmente de acordo
com o aumento no teor de gua, sendo que
para a feofitina isso ocorre antes que para a
clorofila , muito possvelmente em funo
da sua no-metalao. Estes dados serviro
de apoio para estudos posteriores, com o
intuito de definir a proporo adequada de
solvente orgnico para uma melhor
emisso/absoro da clorofila e da feofitina,
levando em considerao o fenmeno de
auto-agregao.

Agradecimentos

Ao suporte financeiro fornecido pela
FAPESP (Projeto de auxlio a pesquisa
06/56701-3), FAPEMIG (EDT-515/05 e CEX-
652/05) e CNPq (Universal). A. Lima (IC),
Antonio E.H. Machado (PQ 1-C) e N. Hioka
(PQ 2) agradecem ao CNPq pelas bolsas
concedidas.

Referncias

XI Encontro Latino Americano de Iniciao Cientfica e
VII Encontro Latino Americano de Ps-Graduao Universidade do Vale do Paraba

7
XI Encontro Latino Americano de Iniciao Cientfica e
VII Encontro Latino Americano de Ps-Graduao Universidade do Vale do Paraba

8
-Dolphin, D.; The porphyrins. Physical
Chemistry. Part C (vol v). Academic Press
Inc., New York, EUA, 1978.

- Nyman, E. S. and Hynninen, P. H.
Research advances in the use of tetrapyrrolic
photosensitizers for photodynamic therapy
Journal of photochemistry and
photobiology B- biology 73 (1-2): 1-28 JAN
23 2004
- Kasha, M., Radiaton Research, 20, p.55-
71 1963.
- Arbeloa, I. L.; Ojeda, P. R. Chem. Phys.
Letters, 87(6), p.556-560.
1982.