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A cromatografia em camada delgada (ou fina) uma tcnica de adsoro lquido-slido bastante
simples e barata, que consiste na separao de uma mistura atravs da migrao por capilaridade
diferencial de seus componentes sobre uma camada delgada de adsorvente retido sobre uma superfcie
plana.
Na cromatografia de camada delgada, a fase mvel (lquido) ascende por ao de capilaridade por
uma camada fina do adsorvente (fase estacionria) estendida sobre um suporte. O suporte mais tpico
uma placa de vidro. Sobre a placa espalha-se uma fina camada de adsorvente suspenso em gua ou outro
solvente e deixa-se secar. A placa coberta chama-se placa de camada fina ou placa cromatogrfica.
Quando a placa cromatogrfica colocada verticalmente em um recipiente fechado (cuba cromatogrfica)
que contm uma pequena quantidade de solvente, este eluir pela camada do adsorvente por ao capilar.
O fator de reteno pode ser alterado atravs de mudanas nas fases estacionria e/ou mvel;
mudanas na temperatura, no volume ou na concentrao da substncia aplicada.
(f) Que caractersticas deve ter um solvente para ser considerado um bom eluente de
desenvolvimento?
Para ser considerado um bom eluente, o solvente deve ser voltil, apresentar baixa viscosidade e
no interagir com o soluto.
(g) Quais artifcios podem ser utilizados quando suspeitamos que um componente da amostra a
ser analisada pode no ser visvel a olho nu?
Quando algum componente da amostra no visvel a olho nu, pode ser utilizada uma cuba
reveladora para sua visualizao. Essa cuba reveladora pode ser constituda de vapor de iodo que reage
com compostos orgnicos formando complexo colorido. Outras alternativas para se revelar a placa
cromatogrfica, seriam a utilizao de luz ultravioleta ou de reveladores energticos como cido sulfrico,
tricloreto de antimnio ou permanganato de potssio seguido de aquecimento para ocorrer a reao
cromognica.
2. Defina:
(a) eluio com gradiente: a composio da fase mvel variada durante a eluio, ou seja, a fase
mvel formada por dois ou mais solventes onde a razo entre estes variada durante o processo
de eluio.
(b) eluio isocrtica: eluio com composio da fase mvel constante, ou seja, eluio com um
nico solvente ou com uma mistura de solventes de composio constante.
(c) cromatografia em fase estacionria normal: a fase estacionria mais polar do que a fase
mvel.
(d) cromatografia em fase estacionria reversa: a fase mvel polar e a fase estacionria apolar.
a) e
Cromatografia por adsoro (ismeros)
4. Em uma coluna de slica gel, encontrou-se um composto com tempo de reteno de 28 min
quando a fase mvel era tolueno. Que solvente, tetracloreto de carbono ou clorofrmio,
aparentemente diminuiria o tempo de reteno? Explique.
Como a slica gel polar e utilizando o tolueno que um solvente apolar, o tempo de reteno de
28 minutos. Para que este diminua, deve ser usado um solvente mais polar do que a fase estacionria, ou
seja, do que a slica gel. Com isso, utilizando-se o clorofrmio que polar, o tempo de reteno ser menor
Como a fase estacionria do sistema (slica gel) polar, utilizando-se um solvente apolar, os
analitos polares ficaro retidos no sistema. Para que estes sejam eludos, deve-se aumentar a polaridade
da fase mvel e, para isso, deve-se diminuir a proporo de benzeno no gradiente j que este o
componente apolar da fase mvel, tornando-a mais polar.
7. Ctions inorgnicos podem ser separados por cromatografia lquida segundo sua
capacidade de formar complexos com ons cloreto. Para a separao, a fase estacionria
saturada com gua e o solvente transportador uma soluo de HCl em acetona. As
solubilidades relativas dos seguintes cloretos em cido clordrico concentrado so CuCl 2 >
CoCl2 > NiCl2. Prediga os valores relativos do fator de reteno dos trs sais.
Como se trata de uma cromatografia em papel, a fase estacionria saturada com gua que um
solvente polar, e a fase mvel tambm polar, sendo formada por uma soluo de HCl em acetona, o sal que
for mais solvel em HCl apresentar menor fator de reteno, ou seja, eluir mais. Assim, a ordem dos
fatores de reteno ser:
CuCl2>CoCl2>NiCl2
Como a fase estacionria (slica gel) polar, quanto maior a polaridade do eluente, ou seja, da fase
mvel, maior o fator de reteno do -naftol (mais polar do que a p-toluidina), portanto, ele vai eluir mais
sobre a placa cromatogrfica. O contrrio ocorre com a p-toluidina, que por ser menos polar, vai eluir
menos, ou seja, apresentar o menor fator de reteno.
Para as composies dos solventes dadas, a mais polar seria o cloreto de metileno contendo 50%
de acetato de etila e o menos polar o cloreto de metileno puro.
10. Um par de aminocidos foi separado em uma coluna na qual a fase estacionria est
saturada com gua e o solvente transportador o metanol, CH 3OH. Quanto mais polar for o
cido, mas fortemente ele adsorvido pela fase estacionria. Os aminocidos que foram
separados nessa coluna so: (a) HOOCH(NH2)CH2OH e (b) HOOCCH(NH2)CH3. Que
aminocido voc esperaria que tivesse o maior fator de reteno? Explique seu raciocnio.
Como a fase estacionria saturada com gua, que um solvente polar, e a fase mvel (metanol)
tambm polar, o aminocido mais polar apresentar maior afinidade pela fase estacionria, ou seja,
apresentar o maior fator de reteno e o maior tempo de eluio. Contudo, o aminocido A apresentar o
maior fator de reteno por ser o mais polar.
11. Como possvel verificar o fim de uma reao qumica utilizando-se a tcnica de
cromatografia em camada delgada (CCD)?
Para se verificar o fim da reao qumica utilizando cromatografia em camada delgada, deve-se
montar uma placa cromatogrfica contendo os padres dos reagentes separados e do produto a ser obtido
e determinar o fator de reteno correspondente a cada uma das espcies. Em seguida, acompanha-se a
reao qumica utilizando-se uma placa cromatogrfica at que se observe a formao de um produto com
o mesmo fator de reteno do padro que foi estudado anteriormente
13. Quais espcies podem ser separadas por Cromatografia Lquida de Alta Eficincia, mas no
podem ser separadas por Cromatografia Gasosa?
Substncias no-volteis ou termicamente frgeis podem ser separadas por Cromatografia Lquida
de Alta Eficincia e no por Cromatografia Gasosa.
14. Discuta por que a combinao da cromatografia gasosa com a espectrometria de massas
to vantajosa.
A combinao da cromatografia gasosa com a espectrometria de massas, por ser uma tcnica
hifenizada, pode ser usada para a identificao de misturas complexas, com tempos de reteno prximos.
Uma soluo foi preparada atravs da mistura de 12,49 mg de B com 10,0 mL de uma
amostra desconhecida, contendo apenas A, e diluindo a mistura formada a 25,0 mL. Foram
observadas reas de picos de 5,97 e 6,38 para A e B, respectivamente. Determine a concentrao de
A (mg/mL) na amostra desconhecida.
A cromatografia uma tcnica para analisar, identificar ou separar os componentes de uma mistura.
definida como a separao de dois ou mais compostos diferentes por distribuio entre fases, uma das
quais estacionria (fixa) e a outra, mvel. Essa tcnica baseia-se no princpio da adsoro seletiva.
Em todas as separaes cromatogrficas, a amostra transportada por uma fase mvel, que pode
ser um gs, um lquido ou um fluido supercrtico. Essa fase mvel , ento, forada a passar atravs de
uma fase estacionria imiscvel fixa, colocada em uma coluna ou sobre uma superfcie slida. As duas
fases so escolhidas de modo que os componentes da amostra distribuam-se entre as fases mvel e
estacionria em graus variados. Os componentes que so retidos mais fortemente na fase estacionria
movem-se mais lentamente no fluxo da fase mvel. Ao contrrio, os componentes que interagem mais
fracamente com a fase estacionria movem-se mais rapidamente. Como conseqncia dessas
velocidades de migrao diferentes, os componentes da amostra so separados em bandas ou zonas
discretas, que podem ser analisadas quantitativa ou qualitativamente.
Fase mvel a fase responsvel por arrastar os componentes das amostras de acordo com seu
grau de afinidade. J a fase estacionria comporta-se como um suporte para a fase mvel que deve ser de
polaridade diferente desta.
18. Como se classificam os mtodos cromatogrficos quanto forma fsica, modo de separao
e segundo a fase estacionria utilizada.
- Cromatografia em coluna:
Cromatografia Lquida
Cromatografia Gasosa
Cromatografia Supercrtica
- Cromatografia Planar:
Cromatografia Centrfuga
- Utilizao de gs:
- Utilizao de lquido:
- Utilizao de Gs Pressurizado:
21. Qual o princpio da cromatografia gasosa? Como a mesma classificada segundo a fase
estacionria?
22. Quais as misturas que podem ser separadas por cromatografia gasosa?
Podem ser separadas por cromatografia gasosa as misturas cujos constituintes sejam termicamente
estveis e volteis e que dissolva, pelo menos parcialmente, no gs da fase mvel.
O gs do sistema deve ser quimicamente inerte e apresentar alta pureza, o que evita reaes
indesejveis com o analito.
24. Diferencie coluna tubular de parede recoberta, de coluna tubular revestida com suporte.
Colunas de parede recoberta so simplesmente tubos capilares recobertos com uma fina camada
de fase estacionria. J as colunas com suporte revestido, a superfcie interna do capilar recoberta por
um filme fino de um material suporte. Esse tipo de coluna retm, muitas vezes, mais fase estacionria do
que uma coluna revestida tendo, portanto, maior capacidade de amostra.
26. Na cromatografia Gasosa, quais as propriedades desejveis para uma fase estacionria
lquida?
As propriedades desejadas para uma fase estacionria lquida so: baixa volatilidade, estabilidade
trmica, inrcia qumica e caractersticas do solventes apropriadas.
27. Se voc tivesse que realizar, numa anlise cromatogrfica de misturas complexas
(constituintes com volatilidade muito diferentes), qual o critrio voc utilizaria para escolher
a temperatura do sistema?
Um detector ideal em cromatografia gasosa deve apresentar sensibilidade adequada, boa estabilidade
e reprodutibilidade, resposta linear aos solutos que se estenda a vrias ordens de grandeza, faixa de
temperatura desde ambiente at, pelo menos, 400 oC, resposta rpida independente da vazo, alta
confiabilidade e facilidade de uso, similaridade de resposta a todos os solutos e no-destrutivo (no destrua
a amostra).
Vantagem: alta sensibilidade, ampla faixa linear de resposta, baixo rudo, fcil utilizao, resistncia,
resposta altamente dependente da vazo.
Vantagem: alta sensibilidade, seletividade para compostos que contm halognio e muitos outros.
Vantagem: alta sensibilidade para compostos que contenham fsforo e nitrognio, boa faixa linear.
Vantagem: faixa linear alta e detector mais sensvel para hidrocarbonetos aromticos e compostos
organossulfurados ou organofosforados.
A cromatografia lquida de alta eficincia a mais usada de todas as tcnicas analticas de separao
devido sua sensibilidade, fcil adaptao para medidas quantitativas apuradas, sua adequao
separao de espcies no-volteis ou termicamente frgeis e, acima de tudo, sua ampla aplicabilidade a
substncias de grande interesse para a indstria, para muitos campos da cincia.
(a) Adsoro ou lquido-slida: processo baseado em interaes eletrostticas, dipolares (Van Der
Waals) ou ligaes de hidrognio, que ocorrem entre grupos ativos presentes na superfcie da fase
estacionria slida e a fase mvel.
(b) Partio: a fase estacionria um segundo lquido que imiscvel com o lquido da fase mvel.
Quando a fase estacionria um lquido, espalhado na superfcie de um suporte slido e inerte ou nas
paredes de um tubo, o processo interfacial, ocorrendo por absoro ou partio, que se baseia nas
diferentes solubilidades dos componentes da amostra na fase estacionria.
(c) Troca inica: a fase estacionria constituda de uma matriz onde so adicionados grupos
funcionais ionizveis. A fase mvel geralmente uma soluo inica com propriedades tamponantes
escolhidas de forma a ser compatvel com o tipo de trocador usado.
(d) Excluso de tamanho: baseia-se em um processo puramente mecnico. A fase estacionria uma
matriz de composio inerte, com textura, superfcie e distribuio de tamanho dos poros controlados. Os
componentes presentes na fase mvel podem ser separados pela diferena de tamanho das partculas no
qual partculas menores conseguem penetrar nos poros da fase estacionria enquanto as partculas
maiores no.
A fase mvel no pode alterar a coluna, deve ser compatvel com o detector, dissolver a amostra
(diluir), permitir a recuperao da amostra, ser de alta pureza e no txica, ter baixa viscosidade.