Cromatografia Gasosa e Lquida

Caroline Carriel Schmitt

Objetivo Geral

Conhecer e descrever os mtodos de anlises cromatogrficas liquida e gasosa e suas diferenas

Definio
A cromatografia um mtodo analtico usado para
Separar, Detectar, Quantificar grande quantidade de compostos. Os componentes a serem separados so distribudos entre duas fases: Fase estacionria, Fase mvel;

Tipos de Cromatografias
Cromatografia Gasosa; Cromatografia Lquida;

Cromatografia Gasosa
A Cromatografia Gasosa (CG) uma tcnica para separao e anlise de misturas de substncias volteis (PE ate 300C) e termicamente estveis.

Cromatgrafo Gasoso

Aplicaes
Vinhos; Analgsicos; Solventes; Derivados do petrleo;

Cromatgrafo Gasoso

1 - Reservatrio de Gs e Controles de Vazo / Presso. 2 - Injetor (Vaporizador) de Amostra. 3 - Coluna Cromatogrfica e Forno da Coluna. 4 - Detector. 5 - Eletrnica de Tratamento (Amplificao) de Sinal. 6 - Registro de Sinal (Registrador ou Computador).

Cromatograma

Instrumentao Bsica
Reservatrio de Gs de
Arraste
Onde fica armazenada a Fase

Mvel
A vazo do gs de arraste, deve ser constante durante a anlise.

Fase Mvel
Os gases devem ser de alta pureza e quimicamente inertes; Os gases mais empregados so H2, He e N2;

O Hlio o mais utilizado, por apresentar baixa densidade, diminuindo o tempo de escoamento e, consequentemente, reduzindo o tempo necessrio para a anlise.

Sistemas de Injeo da amostra

Injeo direta com seringa; Metodo mais utilizado;

Injecao com valvula de amostragem;

Injeo com seringa

Amostras gasosas e lquidas; A amostra injetada em uma camara exclusiva e vaporizada. A temperatura da camara deve ser superior a temperatura da coluna.

1
2 3 4

Injeo com seringa

Os volumes variam de 0,1 l a 3,0 l de amostra Para os injetores de CGAR apenas uma frao do volume injetado (tipicamente entre 1/10 e 1/300) chega coluna

1 - Septo (silicone) 2 - Alimentao de gs de arraste) 3 - Bloco metlico aquecido 4 - Ponta da coluna cromatogrfica

1 - Ponta da agulha da microseringa introduzida no incio da coluna. 2 - Amostra injetada vaporizada instantaneamente no incio da coluna. 3 - Plug de vapor de amostra forado pelo gs de arraste a fluir pela coluna.

Colunas Cromatogrficas:
E o local onde ocorre a interao entre a amostra e a FE (recheio)
Existem dois tipos bsicos para CG: Colunas empacotadas Colunas capilares

EMPACOTADA

CAPILAR

Colunas Empacotadas
O material mais empregado como suporte a diatomite; Os materiais mais usados para os tubos de colunas so o ao inox e o vidro; Quanto maior a coluna, maior a eficincia; entretanto, tambm aumenta o tempo de anlise = 3 a 6 mm L = 0,5 m a 5 m
Recheada com slido pul-verizado (FE slida ou FE lquida depositada sobre as partculas do recheio)

Colunas Capilares
Separao de fraes de petrleo, essncias, amostras biolgicas, anlises de interesse ambiental,etc. Aplicabilidade mais abrangente que as colunas empacotadas Material empregado: tubos metlicos, de vidro ou de slica fundida (flexibilidade e inrcia qumica);

= 0,1 a 0,5 mm L = 5 m a 100 m

Paredes internas recobertas com um filme fino (frao de 0,1 a 3,0 m) de FE lquida ou slida

Fases Estacionrias
E o recheio da coluna; As FE lquidas so as mais empregadas em CG; FE slidas (carvo ativo, slica, peneiras moleculares e polmeros porosos) so aplicadas para separao de gases e compostos de baixo massa molar;

Parmetros para escolha da FE Lquida para CG

Ser pouco voltil; Termicamente estvel; Bom solvente para os componentes da amostra (caso contrrio os compostos ficaro quase que o tempo todo no gs de arraste, sendo eludos muito rapidamente e sem separao); Ser quimicamente inerte em relao amostra; Mesma polaridade da amostra e da FE. Ex: Analise de hidrocarbonetos FE Esqualano

FE mais utilizadas:
Silicones: So polmeros estveis e inertes. Empregados na separao de misturas das mais diversas polaridades. Poliglicis: So FE moderadamente polares, adequados para separao de lcoois, aldedos, teres, etc; Polisteres:So fases altamente polares. As fases mais comuns desta categoria so o succinato de dietilenoglicol (DEGS) e o adipato de dietilenoglicol (DEGA).

Detectores
Dispositivo que indica e quantifica os componentes separados pela coluna; Detectores universais: Apresentam resposta para qualquer substncia diferente Detectores especficos: Respondem somente a compostos que
contenham um determinado elemento qumico em sua estrutura

 Detector por ionizao de chama

Apenas substncias no inflamveis (CCl4, H2O) ou algumas poucas que no formam ons na chama e no do sinal. considerado um detector universal.

Detector por ionizao de chama

A chama fica entre dois eletrodos, polarizados por uma voltagem constante ; Ao injetar um composto orgnico, ele queimado e so formados ons na chama, que passa a conduzir corrente eltrica. A corrente eltrica resultante, amplificada e constitui o sinal cromatogrfico;

Eletrodos a uma voltagem constante

H2
O2

Entrada da amostra com o gas de arraste

Detector por condutividade Trmica

Enquanto passar gs de arraste puro pela cela, a taxa de perda de calor constante e a temperatura no varia. Quando um componente injetado na coluna, ele sai misturado com o gs de arraste e passa pelo detector. O aquecimento do filamento causa uma variao na sua resistncia eltrica, gerando o cromatograma. Considerado um detector universal;

Detector Fotomtrico de Chama

Permite medies sensveis e seletivas de enxofre voltil e compostos de fsforo; Utiliza-se N2 como gs de arraste; Um tubo fotomultiplicador mede a emisso de quimiluminescncia
caracterstica dessas espcies; Considerado um detector especifico;

Cromatgrafo Gasoso

1 - Reservatrio de Gs e Controles de Vazo / Presso. 2 - Injetor (Vaporizador) de Amostra. 3 - Coluna Cromatogrfica e Forno da Coluna. 4 - Detector. 5 - Eletrnica de Tratamento (Amplificao) de Sinal. 6 - Registro de Sinal (Registrador ou Computador).

Cromatografia Lquida
As amostras so separadas por partio entre um lquido mvel e uma FE slida;

Cromatografia Lquida

Aplicaes
Indstria Farmaceutica -Anlise de frmacos Anabolizantes; Pesticidas; Vitaminas; Antibiticos;

cidos e steres Organicos;

Vantagem
No limitado pela volatilidade ou pela estabilidade do composto da amostra; Separao, a identificao, a purificao , e a quantificao de vrios compostos; No destri a amostra no final da anlise;

Tipos de anlises
Cromatografia Lquida Planar - Camada Delgada
Anlises Qualitativas Rpidas e purificao de amostras

- CD de Alta Eficincia
Anlise Clnica (drogas no sangue) e Anlise Ambiental

- Papel
Anlise de cosmticos, metais, drogas, carboidratos, etc.

Cromatografia Lquida em Coluna - Adsoro; - Absoro; - Troca inica;

Separao de traos de metais

- Excluso
(Anlise de resduos de pesticidas);

Cromatografia Lquida de Alta Eficincia (CLAE)

Vantagens
Maior poder de resoluo; Maior velocidade de separao; Medio quantitativa exata; Requeridas apenas pequenas quantidades de material;

Cromatgrafo Lquido de Alta Eficiencia

Instrumentao Bsica
Bomba de alta presso:
Tempo de reteno e reprodutilibilidade; Presso e vazo controlados; Impulsiona a FM;

Fase Mvel
Depende do tipo de amostra que ser analisada; As FM da CLAE devem possuir alto grau de pureza e estar livres de oxignio e outros gases, sendo filtradas e desgaseificadas antes do uso; Lquidos de baixa viscosidade; Pode ser a mistura de vrios solventes;

Sistema de injeo da amostra

O efluente preenche a serpentina de volume conhecido e o acionamento da vlvula transfere este volume para a corrente da Fase Mvel; Os volumes variam 5-50 L para injees analticas ;

Coluna
Feitas de ao inox; Dimetro de 0,45 cm; Comprimento de 30 cm; Slica geralmente empregada como FE;

Fases Estacionrias:
Grande nmero de fases estacionrias existentes, possibilitando anlises e separaes de uma ampla gama de compostos com alta eficincia

Fase Estacionria
LUNA

Aplicacao
Uso Geral Farmacutica
Anlise de Protenas e Peptdeos Anlise de Polmeros de baixa a alta temperatura 25 140C Anlise de Anions Anlise de Carboidratos Sacardeos Oligossacardeos cidos Orgnicos lcoois

BIOSEP PHENOGEL

STAR-ION REZEX

Detector
Os detectores de cromatografia lquida no so destrutivos, isto , as amostras podem ser coletadas para testes qualitativos posteriores de caracterizao.
Detectores Seletivos: Respondem a estruturas moleculares diferenciadas (Absorbncia e Fluorescncia); Detectores Universais: Responde de modo similar a muitos compostos (ndice de Refrao);

Detectores de Fluorescncia
Absorbncia e Fluorescncia so os detectores mais usados; Detectores de fluorescncia detectam 100ppt por 10 L;

Detector de Ultravioleta/visivel (UV-Vis)

Detectores de ultravioleta/visvel (UV-Vis) podem detectar 100ppb em amostras de 10L;

Detector por ndice de Refrao

Eletroqumico

Principais diferencas
Cromatografia FM Lquido FE Slido Detector N Destrutivo Coluna 30cm Analitos Diversos

Lquida

Gasosa

Gas inerte

S/L

Destrutivo

3m

Organicos

Cromatograma
Para CG e CL:

O principio basico de quantificacao e que a area dos picos registrados e proporcional a massa dos compostos injetada; Para identificao dos compostos, emprega-se uma curva de calibrao com padres contendo massas conhecidas dos compostos a serem quantificados (padronizao externa). Faz-se a sobreposio de grficos para a qualificao dos compostos da amostra; Mistura-se a amostra a ser analisada com um padrao de concentracao conhecida (referente ao encontrado nas analises anteriores) para verificacao dos picos encontrados.

Demonstracao das impurezas do Metanol Comercial

1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. Fazer a injecao da amostra a ser analisada; Usar como referencia o tempo de retencao de cada pico para qualificacao das impurezas; Montar um padrao com concentracao conhecida com solventes de tempo de retencao proximos ao da amostra; Injetar novamente a amostra para quantificacao grosseira dos compostos; Montar um padrao mais especifico para a amostra; Injetar o padrao; Injetar a amostra para quantificacao das impurezas presentes; Sobreposicao dos graficos para confirmacao qualitativa; Injecao da mistura das duas amostras para confirmacao do resultado;

Demonstracao das impurezas do Metanol Comercial

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Metanol
Etanol Propanol Iso-Butanol Butanol

FIM!