Microbiologia Geral

Tcnicas de microscopia e colorao

Prof Thas Silveira

 Etimologia

Microscpio
mikro + skopos
(pequeno + olhar para)

Instrumento ptico utilizado para ampliar um

objeto tornando-o visvel
 Os trs pilares da observao
microscpica

Aumento
Contraste
Resoluo
Aumento
Aumento
 Contraste
Capacidade de distinguir o objeto do fundo
 Contraste

Voc consegue ler? Voc consegue ler? Voc consegue ler?

Voc consegue ler? Voc consegue ler? Voc consegue ler?

 Resoluo
Capacidade de distinguir dois pontos adjacentes
Ou seja, ver dois pontos como dois, e no como um
s
Resoluo
Resoluo
 Aumento vazio
Aumento sem resoluo
Tipos de microscopia
Lente simples (lupa)
Microscpio tico
Microscpio tico
Microscpio tico
Microscpio tico
Microscpio tico
 Microscpio tico
Clculo de aumento total (quantas vezes o
objeto foi ampliado):
Aumento da lente ocular aumento da lente objetiva

Exemplo:
Ocular = 10
Objetiva = 40
Aumento total = 400
 Microscopia tica
Campo claro Campo escuro Contraste de fase
 Microscopia tica: contraste
interferencial diferencial (DIC)
 Microscopia tica: fluorescncia
GFP: Green Fluorescent Protein

Fluorforos
Microscopia tica: fluorescncia
Microscopia tica: fluorescncia
 Microscpio eletrnico
Construdos primeiramente na dcada de
1930
Utiliza eltrons e no luz (ftons), para
interferir com o objeto e criar a imagem
No produz imagens coloridas
Tem maior poder de aumento
No utiliza lentes de vidro, mas bobinas
eletromagnticas
 Microscpio eletrnico
operado sob vcuo
As amostras devem estar sem gua
Amostras biolgicas: 70 % gua
No pode ser utilizado para observar amostras
vivas
MUITO caros!
Microscopia eletrnica de transmisso
Microscopia eletrnica de transmisso

Fonte de e- (alta voltagem)

Lente condensadora

Lente objetiva

Lente Observador
projetora
Grade
Binocular

Tela fluorescente
Cmera
Microscopia eletrnica de transmisso
Microscopia eletrnica de varredura
Microscopia eletrnica de varredura
Canho de e-

Feixe de e- Anodo

Lentes magnticas

Detector de e-
Detector de e-
Espcime Suporte
Microscopia eletrnica de varredura
 Colorao de Gram
Desenvolvida em 1884
Utilizada para classificar as bactrias em
Gram-positivas (roxas) ou Gram-negativas
(rosas)
Revelam as caractersticas ultraestruturais da
parede celular no padro da colorao
Colorao de Gram
Colorao de Gram
 Endoesporos
Formas quiescentes (latente, em descanso) de
bactrias Gram-positivas
Desidratados e com baixo metabolismo
Resistncia a calor, radiao, dessecao, pH
 Endoesporos
Membrana do
endoesporo: antiga
membrana celular
Crtex: peptideoglicana
Capa: semelhante a
queratina; rica em
cistena
Exosprio: lipoprotena
e carboidrato
 Colorao de endosporos
Verde malaquita (Schaeffer-Fulton)
Colorao de Ehrlich (cido-resistente)
Bactrias cido-resistentes
Carbolfuccina (vermelho) a quente
Utilizada para identificar bactrias com parede
cerosa
Mycobacterium tuberculosis (tuberculose)
Mycobacterium leprae (lepra)
Nocardia (flora oral)
Colorao de Ehrlich (cido-resistente)
Colorao de cpsula
 Colorao de flagelos
Espessamento artificial dos flagelos para que eles
possam ser observados em microscopia ptica