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DISCIPLINA
MICROBIOLOGIA GERAL
Constituio Do M.O.C.
Atualmente, o microscpio ptico composto (M.O.C.) constitudo por duas partes uma
parte mecnica e uma parte ptica. Cada parte engloba uma srie de componentes
constituintes do microscpio (fig. 1).
Ocular
Tubo Revlver
Objetiva
Coluna
Platina
Diafragma
Condensador
Fonte de luz
A parte mecnica serve para dar estabilidade e suportar a parte ptica. Esta parte
constituda por:
Brao ou Coluna pea fixa base, na qual esto aplicadas todas as outras partes
constituintes do microscpio.
Revlver disco adaptado zona inferior do tubo, que suporta duas a quatro objetivas
de diferentes ampliaes: por rotao possvel trocar rpida e comodamente de
objectiva.
Fonte Luminosa existem vrios tipos de fontes luminosas, podendo ser uma lmpada
(iluminao artificial), ou um espelho que reflita a luz solar (iluminao natural).
Posio do Observador
- Se o M.O.C. possuir uma ocular, deve olhar por ela com o olho esquerdo, mantendo os
dois olhos abertos. Se o M.O.C. tiver duas oculares, deve olhar por ambas.
Focalizao
- Deve-se pegar no M.O.C. pelo brao, com a mo direita, enquanto se suporta a base
com a mo esquerda;
- No se deve tocar no sistema ptico com os dedos;
- A lente das objetivas no deve tocar na lamela;
- O M.O.C. deve estar completamente pousado numa mesa desocupado, e afastado da
borda da mesa.
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Material Necessrio
Objetivos da aula
A) B)
C) D)
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B) COLORAO DE BACTRIAS
COLORAO DIFERENCIAL:
Nesta colorao utilizamos geralmente 2 corantes, alm do mordente e do diferenciador. Baseia-se na
diferena qumica existente entre as bactrias e consequentemente na reao diferente que as bactrias
podem apresentar frente a um determinado corante. utilizada para distinguir diferentes tipos de bactrias.
Os mtodos de Gram (1884) e de Ziehl-Neelsen (1882) so exemplos de colorao diferencial.
lo com uma gota de gua destilada ou salina estril (colocada anteriormente sobre a lmina com auxlio de
uma ala de platina estril) at obter-se uma leve opalescncia. Espalhar com movimentos circulares at
formar uma fina camada sobre a lmina. Deixar a lmina secar ao ar, em repouso. A secagem ao ar evita a
formao de aerossis que acontecem quando fixamos a lmina antes que a mesma esteja seca. Os
aerossis se constituem de fonte de contaminao, pois nestes esto contidos os microrganismos presentes
no material.
Aps seca, a lmina dever ser fixada, antes de iniciarmos o processo de colorao. A fixao
evita que as clulas dos microrganismos sejam lavadas e perdidas durante o processo de colorao. Alm
disto, a fixao permite a aderncia das clulas lmina, matando os microrganismos atravs da coagulao
seus protoplasmas, preservando suas estruturas na forma e posio originais. O calor o mtodo de fixao
freqentemente utilizado. Para fixarmos, passamos a lmina com o esfregao voltado para cima, por trs
vezes atravs da chama. Evitar o super aquecimento testando a cada passada a temperatura da lmina no
dorso da mo.
SOLUES EMPREGADAS:
1- CRISTAL VIOLETA - funo: corante principal ( cora igualmente todas as bactrias )
2- LUGOL ( soluo de iodo-iodeto de potssio) - funo: mordente. O mordente tem a finalidade de
aumentar a afinidade do corante pela clula, permitindo que ela se core mais intensamente.
3- LCOOL ETLICO - funo: agente descorante e diferenciador. Sua utilizao permite que algumas clulas
se descorem mais facilmente que outras. Este comportamento distinto de descolorao que diferencia as
bactrias.
4-- FUCSINA DILUDA - funo: corante de contraste, corante secundrio ou contracorante. o corante que
d s clulas descoradas uma cor diferente daquelas que mantm a cor do corante principal.
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TCNICA:
1- Cobrir o esfregao j fixado com soluo de Cristal Violeta por um (1) minuto.
2-Escorrer o cristal violeta, lavar em fio dgua e cobrir o esfregao com Lugol por um (1) minuto.
3-Escorrer o lugol, lavar em fio dgua .
4- Descorar rapidamente com lcool Etlico ( +/- 20 segundos)
5-Interromper o processo de descoramento lavando o esfregao com fio d gua.
6-Cobrir o esfregao com Fucsina diluda por 30 segundos.
7-Lavar e secar com papel filtro, pressionando o esfregao cuidadosamente.
8-Colocar uma gota de leo de imerso sobre o esfregao e observar ao microscpio, utilizando a objetiva de
imerso.
RESULTADO: Bactrias coradas em roxo ( cor do cristal violeta ) - GRAM POSITIVAS
Bactrias coradas em vermelho ( cor da fucsina ) - GRAM NEGATIVAS
IMPORTNCIA :
a)Prevenir transmisso de doenas.
b)Prevenir a contaminao ou crescimento de microrganismos nocivos.
c)Prevenir a deteriorao e danos de materiais pelos microrganismos.
OBJETIVOS: remoo, inibio ou morte dos microrganismos atravs da ao de agentes fsicos e qumicos.
CALOR:
a) Calor Seco:
1- Forno de Pasteur (forno de ar quente): ao esterilizante (causa a morte por promover: a oxidao das
protenas que constituem o microrganismo).
- Condies de esterilizao: de 150 a 170 C, de 1 a 2 horas
- Utilizao: esterilizao de substncias imiscveis em gua (como ps, leos etc.), instrumentos
cortantes (tesouras, bisturis, agulhas hipodrmicas e etc.) e vidrarias limpas e secas (placas de Petri,
seringas de vidro, pipetas, bales, tubos de ensaio).
b) Calor mido:
1- Autoclavao: realizada em autoclaves (aparelhos que utilizam vapor saturado sob presso). Ao
esterilizante. Causa a morte por promover a desnaturao das protenas que constituem os microrganismos.
- Condies para esterilizao: 121 C por 15 a 30 minutos a 1 atmosfera a mais de presso.
- Substncias miscveis com gua (meios de cultura, soluo salina, gua, etc.), cotonetes, luvas de
ltex (cirrgica), sondas, cateteres, gaze, rouparia, material contaminado, etc.
OBS: utilizada apenas em materiais que no se alteram com a temperatura.
2- Ebulio: gua temperatura de 100C por um tempo de 30 minutos. Causa desnaturao protica,
eliminando apenas formas vegetativas.
4- Vapor Fluente Fracionado - Tyndalizao : submeter ao vapor fluente contnuo por 3 vezes, com intervalo
de 12 a 18 horas aps cada execuo, tomando-se o cuidado de no abrir o recipiente onde est
acondicionado o material. Elimina formas vegetativas e esporuladas. Causa a morte por promover a
desnaturao de protenas dos microrganismos.
- Uso: solues (vitaminas, carboidratos) e materiais que no suportam temperaturas acima de
100C.
1- Radiaes No Ionizantes - raios Ultra-Violeta: baixo poder de penetrao: longo (carreia menos
energia). Utilizado apenas em superfcies. Causam danos ao DNA levando a formao de dmeros de
pirimidina (mutao).
- Utilizado: eliminao de microrganismos em superfcies.
2- Radiaes Ionizantes - raios X e raios Gama : alta penetrabilidade. curto (muita energia). Promovem a
b) Aldedos e derivados: atua alquilando grupamentos funcionais das protenas como aminas,
carboxilas e hidroxilas, formando hidroximetilderivados inativos.
Mais empregados: aldedo frmico (concentrao: 3 - 8%) e aldedo glutrico a 2%.
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c) Fenis e derivados: Atua sobre protenas a uma concentrao de 0.2 a 1%. Bastante txico.
Mais empregados: cresis (metacresol um dos ismeros mais ativos). A creolina (mistura de cresis)
utilizada na desinfeco de pisos, vasos sanitrios, excrementos, etc.
INDICADORES DE ESTERILIZAO:
- Substncias com ponto de fuso conhecidos :cido Benzico (121C) e Uria (125C).
- Cultura de microrganismos esporulado: Bacillus stearothermophilus
- Fitas indicadoras de esterilizao.
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ANTISSEPSIA DA PELE
Gluconato de clorexidina
Triclosan ou triclosano um agente anti-sptico efetivo contra bactrias gram negativas, bem como
gram positivas. eficaz tambm contra fungos e bolores. encontrado em medicamentos, sabonetes, loes
e cremes dentais. Apresenta boa tolerncia para uso na pele e cavidade bucal em baixas concentraes.
Triclosan
OBJETIVO: utilizar uma soluo de iodo, lcool, triclosan e clorexidina sobre uma poro da pele com a
finalidade de reduzir a microbiota , eliminando quase todos os microrganismos presentes.
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TCNICA:
Dividir o fundo da parte externa da placa como auxlio de uma caneta de retroprojetor, escrevendo de
um lado salina e do outro iodo, lcool, triclosan ou clorexidina . Depois proceder como segue:
1: molhar o cotonete em soluo fisiolgica ( salina ) e esfreg-lo no dorso de uma das mos, em uma rea
de + ou - 4 cm ( girando sempre o cotonete ).
2: Semear com este cotonete a metade da placa, no lado correspondente salina.
3: Com a outra extremidade da haste ( no utilizada ) deste mesmo cotonete, embeb-la na soluo de iodo
e esfreg-la sobre o dorso da outra mo em rea de + ou _4 cm. AGUARDAR 5 ( CINCO ) MINUTOS PARA
QUE O IODO POSSA ATUAR SOBRE OS MICRORGANISMOS DA PELE, ELIMINANDO-OS.
4: Pegar o outro cotonete e molh-lo em soluo fisiolgica, esfregando-o sobre a rea onde foi passada a
soluo de iodo, lcool, triclosan ou clorexidina.
5: Semear com este cotonete a outra metade da placa, no lado correspondente ao iodo, iodo lcool,
triclosan ou clorexidina.
6: Levar a placa identificada para ser incubada na estufa a 37C por 24 horas. Aps esse prazo retornar ao
laboratrio para complementar seu experimento, conforme instrues abaixo.
Fazer leitura da placa aps 24 horas de incubao, concluir o resultado e realizar um Gram das diferentes
colnias crescidas dos dois lados da placa, descrevendo o observado.
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MEIOS DE CULTURA
OBJETIVO: Tcnica para a execuo dos meios de cultura; tipos de meios empregados para o isolamento e
identificao de microrganismos ( bactrias e fungos ).
MEIO DE CULTURA:
Os microrganismos possuem um ciclo natural na gua, solo, ar, na nossa superfcie corporal e de
outros animais etc. Estes microrganismos conseguem sobreviver custa de materiais orgnicos e inorgnicos
existentes nestes ambientes. O ciclo artificial (meio de cultura) o modo que empregamos em laboratrio
para cultivarmos os microrganismos. Chamamos de meio de cultura ao conjunto de substncias necessrias
ao crescimento e multiplicao dos microrganismos
No ciclo artificial tentamos reproduzir as condies naturais fornecendo:
A - Substncias nutritivas em concentraes adequadas, que devem servir como:
- fonte de energia - fonte de nitrognio
- fonte de carbono - fonte de sais e ons
- fonte de enxofre e fsforo - fatores de crescimento
- doador de eltrons - receptor de eltrons
Finalidade:
- Meios de enriquecimento: aumentam a possibilidade de crescimento da espcie desejada, quando a mesma
se encontra em pequeno nmero.
- Meios indicadores (ou diferenciais): revelam uma propriedade bioqumica, permitindo uma identificao
presuntiva.
- Meios seletivos: impedem o crescimento de determinados grupos num inculo misto, mas permite o
desenvolvimento de outros.
- Meios seletivos-indicadores: revelam uma propriedade bioqumica e selecionam grupos
de bactrias.
- Meios de triagem: empregados para separar bactrias da mesma famlia.
- Meios de transporte: garantem por mais tempo a viabilidade dos microrganismos que no podem ser
semeados logo aps a coleta e que poderiam morrer.
- Extratos: de carne e de levedura. Concentrados aquosos desidratados que servem como fonte de:
carboidratos, vitaminas, compostos orgnicos nitrogenados e sais.
- Peptonas: derivados da hidrlise cida ou enzimtica de protenas de origem animal ou vegetal (peptona de
casena, peptona de soja) que servem como fonte de N orgnico, vitaminas, carboidratos, enxofre, fsforo,
clcio e magnsio.
- Agar-agar: polissacardeo obtido a partir de algas rodofceas. Funo: agente solidificante, cujo P.F.= 95 C
e o P.S.= 45 C. No tem funo nutritiva.
- NaCl: mantm o equilbrio osmtico do meio e serve como fonte dos ons Na e Cl.
- gua: umidade e fontes de ons.
Isolamento de um microrganismo:
O isolamento consiste na obteno de uma cultura pura (colnias isoladas de um nico
microrganismo, separando-o de outros que se encontram no mesmo material ).
Finalidades do isolamento:
. Identificao de um microrganismo.
A simples observao de caracteres morfolgicos no suficiente para a identificao e classificao
dos microrganismos. Para isto lanamos mo da anlise de uma srie de caractersticas destes como:
caractersticas bioqumicas, sorolgicas, de patogenicidade, e etc. O estudo destas caractersticas est na
dependncia do microrganismo que se pretende identificar.
1- Segurar a ala com a mo direita, flambar primeiro na chama azul, depois na amarela. Esperar esfriar (a
ala flambada na posio vertical e dever ficar atrs da chama para proteo do operador).
2- Retirar a rolha de algodo do tubo que contem o microrganismo a ser semeado ou repicado ( que dever
estar na mo esquerda ) utilizando-se o dedo mnimo da mo direita. A ROLHA DEVER PERMANECER
SENDO SEGURA COM O DEDO MNIMO, AT O FINAL DA OPERAO.
3- Flambar a boca do tubo, e retirar o inculo com a ala fria.
4- Flambar novamente a boca do tubo e fechar.
5- Pegar o tubo onde se ir realizar a semeadura, retirar a rolha e flambar.
6- Semear o material, flambar a boca do tubo e fechar.
7- Esterilizar a ala, identificar o tubo semeado e levar para incubao em estufa.
OBS: Para a realizao da semeadura utilizando-se inculos pesados no diludos, a tcnica a mesma que
a descrita anteriormente, s que ao invs de interrompermos o processo uma vez para flambarmos a ala, o
faremos duas vezes.
AGAR MAC-CONKEY:
Finalidade: meio de cultura seletivo-indicador, utilizado para isolamento de enterobactrias ( bacilos Gram
negativos ) a partir de fezes, urina, lquor, alimentos, gua residual, etc.
FRMULA:
Peptona de casena cristal violeta
Peptona de carne agar-agar
Lactose gua destilada
Mistura de sais biliares
Cloreto de sdio
Vermelho neutro pH: + ou - 7.1
FUNDAMENTOS:
1) Os sais biliares e o cristal violeta inibem o crescimento da microbiota Gram-positiva por ventura existente
no material (seletividade para Gram-negativo).
2) A lactose junto com o indicador de pH (vermelho neutro) serve para comprovar a degradao (
fermentao ) deste carboidrato ( o que feito por apenas parte dos membros desta famlia). Quando ocorre
a fermentao, a bactria classificada como Lac +.
LEITURA:
Colnias lactose-positiva (Lac. +) : degradao ( fermentao ) da lactose com acidificao do meio que
produzir colnias de cor rosa com halo central mais claro. Ex.: E. coli, Klebsiella, Enterobacter.
METABOLISMO DE CARBOIDRATOS
1- Fermentao de carboidratos:
Algumas bactrias so capazes de hidrolizar os carboidratos (dissacardeos at glicose), e metabolizar a
glicose at cidos (com ou sem liberao de gs) e/ou lcoois.
Carboidrato ( manitol, sacarose, lactose, etc. ) glicose c. pirvico cidos, lcoois e gases.
Meio utilizado: meio de cultura indicador que contm: caldo simples + carboidrato + indicador de pH (indicador
de Andrade ) + tubo de Durhan.
TCNICA:
a) repicar o microrganismo j isolado para o meio contendo o carboidrato e incubar em estufa a 37 C por
24 horas.
b) Leitura: observar se houve produo de cidos (viragem da cor do meio) com ou sem produo de gs
(formao de bolha no interior do tubo de Durhan).
2- Prova do citrato:
Muitas bactrias so capazes de utilizar o citrato (c. orgnico do ciclo de Krebs) como fonte de carbono
.A enzima que cataliza a clivagem do citrato recebe vrias denominaes, dentre elas, citratoliase e citrilase.
Os produtos de clivagem so acetato e oxaloacetato, este ltimo sendo subseqentemente convertido em
Piruvato e CO2 , por uma oxalacetato descarboxilase.
Meio utilizado: Citrato de Sdio + H2O + Indicador de pH ( azul de bromotimol ). O pH final do meio aps
preparo: 6.8 .
Indicador de pH: azul de bromotimol: verde em meio ligeiramente cido ( 6.8 ) e azul em pH acima de 7,6.
Tcnica: repicar o microrganismo j isolado no meio do citrato e incubar na estufa a 37 C por 24 horas.
Leitura: - teste positivo: meio de cultura azul (a bactria utilizou o citrato, liberando CO2,)
- teste negativo: meio inalterado ( verde ): bactria no utilizou o citrato.
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METABOLISMO DE PROTENAS
TCNICA:
Semear com agulha ( picada at + ou - 1/3 do tubo ) a bactria j isolada para o meio SIM. Incubar em estufa
a 37C por 24 horas. Aps incubao, adicionar de 3 a 5 gotas do reativo de Kovacs e proceder a leitura.
FUNDAMENTO:
1- Produo de Indol: degradao do tryptofano
2- Produo de H2S:
Cistina: aminocido que contm enxofre (S). Degradao da cistina com liberao de H2S.
2. INDICAES:
Para microrganimos isolados e identificados como os agentes causadores da infeco;
quando o microrganismo causador da infeco apresenta, estatisticamente, grande variabilidade no
espectro de resistncia ou tendncia mesma.
Ex.: Enterobactrias, Staphylococcus aureus, Pseudomonas.
3. DISPENSADO:
Para microrganismos, cuja sensibilidade no apresenta variao ao longo do tempo.
Ex.: Neisseria meningitidis e Streptococcus do grupo A (sensveis penicilina G),
Salmonella typhi (sensvel ao cloranfenicol)
4. TIPOS DE TESTE:
5.5. VALIDADE E CONSERVAO DOS DISCOS: observar sempre: a data de validade, a umidade e a
temperatura ideal de armazenamento
MTODO DE KIRBY-BAUER
Mtodo de difuso em meio de cultura slido pelo sistema de discos nicos. Padronizado pela OMS
em 1977.
Caractersticas necessrias ao meio de cultivo para TSA:
O meio de cultivo, sem enriquecimento, deve sustentar o bom crescimento dos organismos em
teste.
No deve possuir substncias que antagonizem os antibiticos testados.
Deve ser resistente a mudanas de pH durante o perodo de incubao.
Deve permitir o acrscimo de sangue quando o organismo em teste exigir.
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Meio no deve conter carboidratos fermentveis porque o pH cido estimula as ciclinas (enquanto
que o pH alcalino estimula aminoglicosdeos e macroldeos).
O pH do meio deve manter-se entre 7,2 e 7,4.
O meio Miller Hinton satisfaz parcialmente estas exigncias, sendo recomendado por diversos
autores.
Quando usado para o teste de difuso, deve ser adicionado s placas em quantidade suficiente para
que solidifique com uma espessura de 4 mm.
MATERIAL:
. suspenso bacteriana em caldo ( concentrao: 108 clulas/mL).
- recomendado um inculo correspondente ao padro 0,5 da escala de MacFarland.
. placa contendo meio de cultura padro: Agar Meller-Hinton
. cotonete estril ( para a semeadura)
. discos de papel contendo os antimicrobianos ( em concentraes padronizadas )
Escala de MacFarland:
Preparar soluo de cido sulfrico a 1%.
Preparar soluo aquosa de cloreto de brio a 1,175%.
Lentamente, e sob constante agitao, adicionar as quantidades indicadas a 10 tubos previamente
preparados.
Fechar os tubos hermeticamente, conservando-os temperatura ambiente e ao abrigo da luz.
O precipitado de sulfato de brio, quando ressuspendido, corresponde densidade conferida por cultivo de E.
coli em meio lquido, nas concentraes relacionadas na tabela:
0,5 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
BaCl2(ml) 0,05 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1,0
H2SO4(ml) 9,95 9,9 9,8 9,7 9,6 9,5 9,4 9,3 9,2 9,1 9,0
Concentrao 1,5 3 6 9 12 15 18 21 24 27 30
(x108/ml)
O inculo pode ser obtido de formas variadas:
Selecionar 4 5 colnias desenvolvidos em meio slido e que apresentem o mesmo tipo morfolgico.
Transferir estas colnias para o meio lquido.
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Obter suspenso bacteriana em salina estril ou em meio lquido a partir de colnias que se tenham
desenvolvido em meio slido.
Utilizar tantas colnias quantas forem necessrias para a obteno da turvao visvel.
Ajustar a turvao com salina estril ou meio lquido at obter a concentrao desejada.
Obs: Esse mtodo recomendado especialmente para bactrias que se desenvolvem com dificuldade em
meio lquido.
TCNICA:
. retirar a suspenso bacteriana contida no tubo com o cotonete , tomando o cuidado de retirar o excesso de
caldo , comprimindo a haste contra a parede do tubo;
. semear a suspenso na placa contendo o Agar Meller-Hinton, em trs planos, para que haja crescimento
confluente;
. deixar a placa secar entreaberta durante no mximo, por 15 minutos, em frente chama;
. colocar os discos de papel com o auxlio de uma pina flambada, resguardando um espao de 2 cm do disco
para a borda da placa e de 3 cm entre um disco e outro;
. esperar de 20 a 30 minutos para que ocorra a difuso do antimicrobiano, antes que o microrganismo
comece a se desenvolver;
. levar estufa a 35 ou 37 durante 12 a 18 horas;
. aps a incubao, promover a leitura e interpretao.
OBSERVAES:
OBS: Staphylococcus sp., o perodo de incubao deve ser prolongado at 24 horas, visando deteco de
cepas meticilina resistentes (O.R.S.A.).
Incubao em atmosfera de microaerofilia no recomendada, uma vez que o CO2 proporciona acidificao
da superfcie do meio de cultivo.
Organismos que requerem CO2 para seu desenvolvimento devem ser testados (N. gonorrhoeae, N.
meningitidis, H. influenzae) no ambiente solicitado, ainda que, idealmente, o procedimento deva ser
acompanhado por teste paralelo com cepa padro.
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Leituras:
Resultados quantitativos expressos em concentrao inibitria mnima.
Resultados qualitativos como sensvel, intermedirio, resistente.
Interpretao de antibiogramas recomendada pelo NCCLS:
Sensvel (S): Uma infeco por determinada cepa pode ser tratada apropriadamente com dosagem
de agente antimicrobiano recomendada para aquela infeco, salvo qualquer outra contra indicao.
Intermediria (I): A CIM dos agentes antimicrobianos aproximam-se dos nveis plasmticos e
tissulares habituais. Pode apresentar uma resposta menor que a das cepas sensveis.
Resistentes (R): Cepas no so usualmente inibidas por concentraes sistmicas avaliadas do
agente.
Seleo de antimicrobianos:
Antimicrobianos devem ser os mais adequados para o microrganismo isolado e o stio da infeco.
Devem ser adequados ao hospital ou instituio.
Orientaes publicadas anualmente pelo NCCLS (National Committee for Clinical Laboratory
Standards).
Controle de qualidade:
Utilizao de cepas padro para verificao dos testes.
Cepas padro ATCC (American Type Culture Collection).
Exemplos:
E. coli ATCC 25922 - Lactamase negativa para controle de discos para enterobactrias.
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Guia para realizao do teste de avaliao da resistncia pelo mtodo de difuso em disco:
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1 - INTRODUO:
1.1 - IMPORTNCIA DO ESTUDO DOS FUNGOS
Os fungos so seres vivos e apresentam uma caracterstica marcante que a ubiqidade, ou seja, se
encontram amplamente disseminados na natureza, onde desempenham efeitos benficos (manuteno do
equilbrio dos diversos ecossistemas, participao no ciclo de vida na terra, fertilizao do solo, etc.) e
malficos (causando doenas e deteriorando alimentos e materiais) para a humanidade. Ressalta-se tambm
a utilizao desses microrganismos em indstrias de alimento e bebidas (queijo, po, vinho, cerveja, etc.),
farmacutica (antibiticos, hormnios, alucingenos) e qumica (enzimas, cidos orgnicos, vitaminas,
pigmentos, etc.). Os fungos so tambm largamente usados como ferramentas em pesquisa bsica de
gentica, fisiologia, bioqumica, entre outras.
O habitat natural desses microrganismos bastante variado, permitindo classific-los como
anemfilos (fungos do ar), geoflicos ou telricos (do solo), aquticos (da gua), zooflicos (de animais),
antropoflicos (do homem) e fitoflicos (de vegetais). Portanto, possvel promover o isolamento desses
microrganismos de qualquer um destes locais, ou de materiais como madeira, couro, alimentos e detritos de
um modo geral. Para isto, necessrio que sejam fornecidas condies ambientais e nutrientes adequados
para promover o desenvolvimento destes microrganismos nos meios de cultura.
3 - IDENTIFICAO DE FUNGOS
A identificao dos fungos se baseia principalmente em caractersticas morfolgicas (macro e
microscpicas), reprodutivas e metablicas.
A tabela de identificao macromorfolgica dos fungos (em anexo) poder servir de base para tal descrio.
. Observao da micromorfologia
Os alunos devero fazer observao microscpica dos fungos focalizados, analisando as
caractersticas e diferenas de miclio, rgos de reproduo (corpo de frutificao) e esporos. Anotar (ou
desenhar) as caractersticas observadas. Correlacionar os dados da micromorfologia dos fungos focalizados
com os tipos expostos em culturas. Muitos fungos expostos nas culturas esto igualmente focalizados nos
microscpios.
Coleta de material
Os alunos devero escolher um ambiente para investigar a presena de fungos anemfilos. Neste
local, as placas de Petri contendo agar Sabouraud devero ser abertas e expostas ao ar, por
aproximadamente 15 minutos. Em seguida, as placas sero fechadas, identificadas e incubadas
temperatura ambiente.
. Descrio da micromorfologia:
A colnia de fungo anemfilo escolhida ser agora analisada sob o aspecto microscpico, utilizando a
tcnica de fragmento de colnia. Com a agulha de platina flambada e fria, raspar a superfcie da colnia
escolhida para obter pequenos fragmentos. Estes sero colocados sobre uma lmina, juntamente com 1 gota
de lactofenol e cobertos por lamnula. Em seguida, observar ao microscpio no menor, mdio e maior
aumento. Anotar (ou desenhar) as caractersticas observadas. Estes dados podero permitir a identificao
do fungo escolhido.
OBS: Esta tabela tem por finalidade orient-lo na verificao das principais caractersticas macromorfolgicas
que devero ser observadas. Entretanto, no significa que a colnia que voc deseja identificar tenha todos
os itens descritos acima, e alm disto, para cada item poder ser observada mais de uma caracterstica. (por
exemplo: a superfcie de uma colnia poder ser ao mesmo tempo: lisa, pastosa e brilhante).