Procedimento Operacional Padrão (POP)

Amanda Harumi Sabô Inoue RA: 7132417

Professora Larissa Alvarim 4º Semestre Biomedicina

Turma 022104A03 Santo Amaro Manhã

Esfregaço e coloração de Gram

Objetivos
1- Identificar e classificar bactérias;
2- Observar a morfologia bacteriana;
3- Diferenciar bactérias Gram-positivas de Gram-negativas a partir da estrutura da parede
celular.

Materiais
1- Lâmina para microscopia;
2- Lamínula;
3- Microscópio;
4- Cultura bacteriana que se deseja observar;
5- Alça bacteriológica;
6- Bico de Bunsen;
7- Água;
8- Solução salina;
9- Cristal violeta;
10- Lugol;
11- Álcool-acetona;
12- Fucsina;
13- Óleo de imersão.

Esfregaço
1- Acender o bico de Bunsen, pegar uma lâmina, flambar rapidamente na chama;
2- Pingar uma pequena gota de solução salina na lâmina;
3- Flambar a alça bacteriológica, usar para retirar uma pequena quantidade da cultura e fazer
pequenos círculos na lâmina com solução salina, sempre mantendo uma fina camada de
líquido;
4- Passar rapidamente a lâmina na chama, até que o líquido esteja completamente seco;
Coloração de Gram
1- Cubra a lâmina com cristal violeta e deixe agir por 1 minuto;
2- Lave a lâmina em uma fina corrente de água até retirar o excesso de corante;
3- Cubra a lâmina com lugol e deixa agir por mais 1 minuto;
4- Incline a lâmina e goteje álcool-acetona por 15 segundos;
5- Cubra a lâmina com fuscina por 30 segundos;
6- Lave a lâmina com água e espere secar próximo ao bico de Bunsen;
7- Pingue uma gota de óleo de imersão e observe no microscópio, com a objetiva de 100x.

Análise
Caso a bactéria observada se core de roxo ou azul, ela é classificada como Gram-positiva. Caso ela se
core de vermelho ou rosa, ela é classificada como Gram-negativa.