FACULDADE FLORENCE

DISCIPLINA: Mecanismos de
CURSO: Enfermagem/Fisioterapia TURMA: 2º período
Agressão e Defesa
PROFESSOR (A): Vanessa Uchoa UNIDADE: 2º Bimestre Turno: MAT/NOT

ROTEIRO DE AULA PRÁTICA 2:

COLORAÇÃO DE GRAM

O método de Gram permite classificar as bactérias em dois grandes

grupos: as que retêm o corante violeta de genciana ( Gram-positiva ) e as que não
retém o violeta genciana (Gram-negativa). Além do mais, é útil para determinar a
forma ( cocos e bacilos ), e o arranjo das células após a divisão celular (em forma de
cacho, cadeias, sarcina etc., ).

Objetivo

Observar formas, disposição e comportamento tintorial das bactérias e

distinguir bactérias Gram-positivas das Gram-negativas

Materiais

➢ Reagentes de Gram:
sol. cristal-violeta 2%;
sol. aquosa de iodo (Lugol);
mistura álcool-acetona;
sol. alcoólica de safranina
➢ Lâminas
➢ Suporte para lâminas
➢ Alça bacteriológica descartável;
➢ Bico de Bunsen
➢ Microscópio
➢ Óleo de imersão
➢ Cronometro

Procedimento
➢ Preparar o esfregaço e fixar ao calor;
➢ Cobrir a área do esfregaço com a solução de cristal-violeta por 1min;
➢ Lavar com água corrente e escorrer o excesso de água;
➢ Cobrir a área do esfregaço com a solução de iodo durante por 1 minuto;
➢ Descorar a lâmina com a mistura álcool-acetona, até que o solvente escorra
incolor;
➢ Cobrir o esfregaço com a solução de safranina por cerca de 30 segundos;
➢ Lavar com água corrente;
➢ Deixar secar ao ar;
➢ Observar em microscópio.