RM 58 PREPARAO, MONTAGEM E TESTES DE HOMOGENEIDADE E ESTABILIDADE DE AMOSTRAS

PROCEDIMENTO DO SISTEMA DE GESTO DA QUALIDADE

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SUMRIO 1 OBJETIVO E CAMPO DE APLICAO 2 REFERNCIAS 3 DEFINIES 4 METODOLOGIA 1 OBJETIVO E CAMPO DE APLICAO Este procedimento estabelece a sistemtica para as etapas de preparao, montagem e testes de homogeneidade e estabilidade de amostras dos programas interlaboratoriais da rea de ensaios. O presente documento aplicvel Secretaria Executiva da Rede Metrolgica RS e aos Comits organizadores desses programas. 2 REFERNCIAS FR 35 VERIFICAO INTERLABORATORIAIS FINAL DA PREPARAO DE AMOSTRAS DE

FR 36 FICHA PRELIMINAR DE PLANEJAMENTO E CONFERNCIA DA PREPARAO DE AMOSTRAS FR 37 LISTA DE PRODUTOS CONTROLADOS NOS INTERLABORATORIAIS FR 40 FICHA DE CLCULOS PARA PROGRAMAS DE NESAIOS DE PROFICINCIA RM 36 PROCEDIMENTO PARA REALIZAO DE ENSAIOS DE PROFICINCIA RM 48 PROCEDIMENTO PARA CONTROLE DE REGISTROS RM 57 CONTROLE PROFICINCIA DE PLANILHAS ELETRNICAS DOS ENSAIOS DE

Documento do NIST (National Institute of Standards and Technology) NIST/SEMATECH eHandbook of Statistical Methods, constante na pgina da Internet: (http://www.itl.nist.gov/div898/handbook/prc/section4/prc433.htm#ANOVA%20table) ABNT ISO/IEC Guia 43, partes 1 e 2, de 1999 ABNT NBR ISO/IEC 17025:2005 Documento da NATA (National Association of Testing Authorities, Austrlia) Guide to Nata Proficiency Testing 2004, Version 1.
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PROCEDIMENTO DO SISTEMA DE GESTO DA QUALIDADE

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ISO/DIS 13528 Statistical methods for use in proficiency testing by interlaboratory comparisons Planos de Ao dos Programas Interlaboratoriais da Rede Metrolgica RS

3 DEFINIES Preparao de amostras: atividade organizada e planejada para confeccionar amostras para programas interlaboratoriais. Teste de homogeneidade: ensaio executado para avaliar se a variabilidade das amostras pode ser considerada desprezvel quando comparada variabilidade do prprio mtodo de ensaio. Teste de estabilidade: ensaio executado para avaliar a degradao/degenerao das amostras ao longo do tempo.

4 METODOLOGIA 4.1 Preparao A preparao de amostras para ensaios de proficincia deve ser uma atividade devidamente planejada. Para tanto, o comit organizador dispe, caso necessrio, do formulrio padro FR 36 Ficha Preliminar de Planejamento e Conferncia da Preparao de Amostras, onde so estabelecidas as responsabilidades para o pessoal que est participando do processo. Anteriormente, na fase preliminar de planejamento do ensaio de proficincia, o Comit organizador avalia as necessidades e cuidados especficos da etapa de preparao das amostras, definido tambm o local onde sero realizadas as preparaes ao longo do ano. Para cada parmetro preparado dever haver um Supervisor, que far a conferncia do processo durante a sua realizao e tambm ao final, rubricando os campos do formulrio FR 36, quando o formulrio for utilizado. Todos os frascos utilizados so devidamente identificados com rtulos. Para a preparao das amostras dos Programas de Ensaios de Proficincia, quando aplicvel, a Rede Metrolgica RS dispe de reagentes e materiais de referncia rastreveis, adquiridos no incio do programa conforme especificaes constantes na lista FR 37. A preparao das solues-padro utilizadas na etapa de preparo das amostras do Programa de Ensaios de Proficincia em Anlises Ambientais realizada a partir dos materiais de referncia citados anteriormente, por laboratrio reconhecido pela Rede Metrolgica RS de acordo com a NBR ISO/IEC 17025. As solues-padro so devidamente identificadas com etiquetas contendo a concentrao e procedncia das mesmas, sendo mantidas no armrio da sala de preparao das amostras. No Programa de Ensaios de Proficincia em Anlises Ambientais, a primeira etapa da preparao o clculo aproximado das quantidades necessrias para pesagem/diluio do padro, conforme o nmero de frascos que sero preparados. A seguir realizada a pesagem/diluio do padro para
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preparao posterior das amostras. Caso seja feita a pesagem, a balana utilizada no necessita estar calibrada, pois assim assegurado que o valor exato da pesagem no seja conhecido, o que garante a manuteno da confidencialidade. Os clculos realizados no processo de preparao de amostras so registrados no formulrio FR 40. A faixa de concentrao esperada para as amostras so aquelas prximas aos limites de deteco dos mtodos de ensaios ou determinada pela legislao vigente. Uma vez pesado/diludo, o padro transferido para um barrilete. Este barrilete dever ter a identificao do parmetro que est sendo preparado. A seguir, deve tambm ser colocada gua dentro do barrilete, na medida necessria para produzir o nmero de frascos planejado, no caso do Programa de Ensaios de Proficincia em Anlises Ambientais. Para o Programa de Ensaios de Proficincia em Anlises Ambientais, a amostra dever ento ser devidamente homogeneizada com auxlio de agitadores. Os materiais necessrios para a preparao do parmetro em questo, como os frascos, rtulos e tampas, devero ser posicionados prximos ao barrilete, na quantidade exata planejada, de forma a facilitar os trabalhos e diminuir a probabilidade de ocorrncia de quaisquer enganos. So definidas responsabilidades pela separao do material, envasamento, rotulagem e fechamento dos frascos, conforme FR 36, quando aplicvel. Um supervisor acompanhar o processo. No Programa de Ensaios de Proficincia em Anlises Microbiolgicas de guas Naturais, a gua bruta coletada em uma bambona e agitada manualmente, para fins de homogeneizao. Neste programa, na medida em que as amostras so retiradas pelos participantes, a bambona continuamente agitada. Nos demais Programas de Ensaios de Proficincia, coordenados pelos Comits Temticos, definido, pelo comit organizador, um local para a preparao das amostras. A rotina de preparao destes programas definida atravs de reunio do comit em questo. 4.2 Montagem Uma vez preparadas todas as amostras, iniciada a etapa de montagem dos kits que sero destinados aos participantes do ensaio de proficincia, quando este for de responsabilidade do Comit organizador. Para esta fase, pode ser utilizado como guia o formulrio FR 35 - Verificao Final da Preparao de Amostras de Interlaboratoriais. Na etapa de montagem, os frascos devero ser acomodados em caixas apropriadas, devidamente identificadas com o nome do programa e a rodada em questo, e mantidas nas condies ambientais requeridas para o ensaio. Quando for necessria a refrigerao das amostras (como por exemplo, no Programa de Ensaios de Proficincia em Anlises Ambientais) estas so mantidas em gelo, para refrigerao a 4C, at o momento da entrega ao laboratrio participante. Ao final da montagem, executada uma verificao final que pode ter como base o FR 35, antes da entrega de todo o material transportadora, juntamente com os envelopes, declaraes de transporte, as instrues aos laboratrios participantes e demais documentao, preparadas previamente pela Secretaria Executiva. 4.3 Testes de homogeneidade e estabilidade das amostras

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Quando aplicvel, so realizados os testes de homogeneidade e estabilidade das amostras preparadas nos ensaios de proficincia. A freqncia e a metodologia a ser empregada para os testes so definidas pelo Comit Organizador, quando do planejamento do programa. Para tanto, o Comit organizador dever separar os frascos, devidamente identificados como sendo destinados aos referidos testes, no momento do envasamento das amostras. O nmero de frascos destinados a esta etapa ser de 3 ou 5, dependendo do n de laboratrios inscrito (at 15 laboratrios inscritos, sero coletados 3 frascos para o teste de homogeneidade e estabilidade, quando houver mais de 15 inscries, sero realizados 5 coletas). Aps uma quantidade determinada de frascos envasados, uma amostra dever ser destinada aos testes em questo. Para a realizao desta amostragem, a coleta dos frascos dever ocorrer aps um nmero x de frascos envasados, segundo equao abaixo: x = (total de frascos planejados para o envase) / (n de frascos coletados para os testes) Caso o nmero x seja racional, deve-se aproximar para o interno abaixo, conforme exemplos: Exemplo 1: Nmero total de frascos planejados para o envase = 60 Frascos destinados aos testes de homogeneidade = 5 x = 60 / 5 = 15 Ou seja, a cada 15 frascos envasados, 1 deles dever ser destinado aos testes de homogeneidade. Exemplo 2: Nmero total de frascos planejados para o envase = 42 Frascos destinados aos testes de homogeneidade = 5 x = 42 / 5 = 8,4 Ou seja, aproximando para o nmero inteiro abaixo, a cada 8 frascos envasados, 1 deles dever ser destinado aos testes de homogeneidade. Sempre que possvel essas amostras devero ser ensaiadas em laboratrios reconhecidos pela Rede Metrolgica RS ou acreditados pelo INMETRO, ou checadas no momento da preparao, quando possvel. A anlise estatstica dos dados obtidos ser realizada por um consultor estatstico contratado pela Rede Metrolgica RS, conforme RM 56. A Rede estipula trs tcnicas de estatstica para testar a homogeneidade e estabilidade das amostras: a Anlise de Varincia (ANOVA) ou as recomendaes da ISO/DIS 13528 (comparao do desvio das amostras com o desvio do grupo de participantes), ou o teste-T para comparaes aos pares. de deciso da Rede Metrolgica RS qual dos procedimentos deve ser empregado em cada um dos programas. O objetivo geral do teste de homogeneidade verificar se a variabilidade proveniente da no homogeneidade das amostras significativa perante a variabilidade total do mtodo de ensaio. J a estabilidade verificar o comportamento das amostras ao longo do tempo. Caso seja constatada no homogeneidade ou no estabilidade significativa das amostras, o Comit organizador dever analisar as causas razes do problema e implementar aes eficazes, a fim de evitar sua reincidncia.
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4.3.1 ANOVA A seguir apresentam-se os passos para aplicao da metodologia ANOVA (fator nico), com base na sistemtica que executada pelo software excel, seguindo os passos abaixo: a) Depois de abrir o software excel deve-se selecionar o item ferramentas e, posteriormente, anlise de dados.

b) Posteriormente, deve-se selecionar o item ANOVA: fator nico.

c) Depois de escolher a opo da ANOVA, deve-se selecionar os dados que sero analisados. O item de significncia (alfa) do programa deve ser 0,05.

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h) Depois de executar o teste, deve-se comparar o F com o Fcrtico. Se Fobtido < Fcrtico , ento as diferenas apresentadas no so significativas, considerando o nvel de significncia do teste. Neste caso, consideramos as amostras como suficientemente homogneas. Caso Fobtido > Fcrtico , ento as diferenas entre as amostras so significativas, dado o nvel de significncia do teste de 0,05, e consideramos as amostras como no homogneas o suficiente.

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4.3.2 Comparao de Desvios proposta pelo ISO/DIS 13528 Procedimento para homogeneidade: 1. Preparar um nmero g 10 de amostras para o teste de homogeneidade. O nmero g pode ser menor se dados prvios de homogeneidade esto disponveis. 2. Preparar n vias de cada amostra (recomendvel n = 2). 3. Realizar os ng ensaios em uma ordem aleatria, em condies de repetitividade. Para realizar os ensaios em ordem aleatria deve-se realizar um sorteio para definir a ordem em que as amostras sero analisadas. 4. Calcular a mdia geral x.,. , o desvio padro dentro das amostras s w e o desvio padro entre as amostras s s . 5. Critrio de aceitao da homogeneidade: s s 0,3 Onde o desvio padro estimado no ensaio de proficincia. Tal critrio garante que o desvio padro entre as amostras contribui com no mais do que 10% para o desvio padro do ensaio de proficincia. 6. Caso o critrio de aceitao no seja satisfeito, o procedimento de preparo das amostras deve ser reavaliado para identificao de possveis melhorias. Neste caso, o desvio padro entre as amostras deve ser considerado no desvio padro do ensaio de proficincia, calculando: = ss 2 + 12

Onde 1 o desvio padro de ensaio de proficincia que no inclui o efeito da heterogeneidade das amostras.
7. Procedimentos de clculo: a) Calcular as mdias de cada amostra. b) Calcular o desvio padro dentro de cada amostra. c) Calcular a mdia geral das amostras. d) Calcular o desvio padro geral entre as amostras s x . e) Calcular o desvio padro geral dentro das amostras s w . f) Calcular o desvio padro entre amostras s s :
s s = s x ( s w n)
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Obs.: se s x ( s w n) < 0 , ento s s = 0 Procedimento para estabilidade: 1. Preparar um nmero g 3 de amostras para o teste de estabilidade.

2. Preparar n vias de cada amostra (recomendvel n = 2). 3. Realizar os ng ensaios em uma ordem aleatria, em condies de repetitividade.
y 4. Calcular a mdia geral .,. , aps um determinado perodo de tempo transcorrido do trmino dos estudos de homogeneidade (no ltimo dia do teste de estabilidade). O perodo transcorrido varia em funo do mtodo de ensaio.

5. Critrio de aceitao da estabilidade:

x.,. y.,. 0,3 x Onde .,. a mdia obtida no teste de homogeneidade (no primeiro dia do teste de homogeneidade) e o desvio padro estimado no ensaio de proficincia. 6. Caso o critrio de aceitao no seja satisfeito, o procedimento de preparo e armazenamento das amostras deve ser reavaliado para identificao de possveis melhorias. Neste caso, a diferena entre as mdias dos resultados das datas avaliadas deve ser considerada no desvio padro do ensaio de proficincia, calculando:

(x

.,.

2 2 y.,. ) + 1

Onde 1 o desvio padro de ensaio de proficincia que no inclui o efeito da heterogeneidade das amostras.
4.3.3 Teste T
O principio bsico do teste calcular a diferena observada entre as medidas de cada elemento do estudo (D = Medida final Medida inicial). A seguir, calcular a mdia (D) e o erro padro da mdia das diferenas (EPD). Aplicando a frmula abaixo calcula-se o valor de t.

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Quando no h diferena importante entre as medidas inicial e final de cada elemento a mdia das diferenas e o valor de t tendem a zero. Nos casos em que o procedimento aplicado tem forte impacto as diferenas individuais passam a ser mais expressivas, com mdia e valor de t se afastando de zero. a) interessa saber se h diferena entre o incio e o final do estudo

Quando o valor do teste T calculado for menor (em mdulo) do que o T crtico, podemos aceitar Ho, ou seja, podemos considerar as amostras iguais, caso contrrio as amostras apresentam diferenas significativas. Na figura abaixo est exemplificada a distribuio com as zonas de aceitao e rejeio da hiptese nula.

4.4 Registros
Os registros envolvidos no processo de realizao de programas interlaboratoriais so armazenados conforme RM 48 Procedimento para Controle de Registros.

4.5 Valores de Referncia

A designao de valores de referncia segue a metodologia estabelecida pelo comit organizador do ensaio/calibrao em questo, respeitando as diretrizes estabelecidas pelo ABNT ISO Guia 431:1999. Este item aplica-se somente aos programas na rea de calibrao, onde o laboratrio de
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referencia selecionado pela Rede Metrolgica RS. O mesmo deve possuir a NBR ISO/IEC 17025:2005. 4.6 Avaliao preliminar dos analitos dos programas Sempre que a Rede Metrolgica for lanar um novo ensaio de proficincia, este dever passar por uma avaliao tcnica preliminar, sendo esta analise embasada em um processo de teste com o analto ou em avaliao bibliogrfica relacionada. Estas decises devero ser registradas em atas de reunio dos comits da Rede Metrolgica RS.

4.7 Anexos
No anexo I, um fluxograma exemplificando um processo de preparao de amostras de ensaios de proficincia. __________________________

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ANEXO I Exemplo de Fluxograma para Preparar Amostras em Ensaios de Proficincia

Planejar o nmero de amostras de cada parmetro Calcular as Concentraes e Quantidades que sero necessrias, quando aplicvel Pesar/Diluir os Padres, quando aplicvel Dividir de Tarefas (escolha do supervisor e do responsvel por cada etapa)

Homogeneizar as Amostras (com agitadores)

Separar o Material Utilizado (frascos, tampas, rtulos e equipamento de proteo (Luvas e guarda-p))

Ambientar dos Frascos

Envasar as Amostras Fechar os Frascos Substituir o frasco por um novo

Executar Teste de Vazamento

Sim

Ocorreu algum Vazamento?

No

Sim

Trocar a tampa

Executar Teste de Vazamento

Vazou de Novo?
No

Rotular os frascos
.

Separar os fracos por parmetros

Sim
.

Supervisor: conferir nmero de frascos por parmetro e a rotulagem

Faltou alguma amostra?

No

Separar o n de frascos que faltam

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Continuao (ANEXO I)
Separar as diferentes amostras para colocao nas caixas

Supervisor: Conferir os frascos separados

Alguma caixa apresentou qualquer no-conformidade?

No

Sim

Supervisor: contar nmero de caixas conforme planejada

Acomodar o gelo/vermiculita nas caixas, quando aplicvel

No

O transporte das caixas ser feito no mesmo dia?

Sim

Armazenar as caixas em espera

Supervisor: executar nova vistoria (recontar n de caixas, reverificar as amostras por caixa e trocar o gelo (quando aplicvel)) Lacrar as caixas

Enviar Material por Transportadora Contratada

Obs.: Se houver algum problema, ou imprevisto, durante alguma etapa, deve-se comunicar o supervisor logo em seguida, no devendo esperar para que termine a determinada etapa.

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