Uso de Gelatina e Goma Arábica para Microencapsulação de Células Probióticas de Seguida Por Coacervação Complexa

12/11/2021 16:46 Uso de gelatina e goma arábica para microencapsulação de células probióticas de Lactobacillus plantarum por um processo…
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International Journal of Biological Macromolecules

Volume 133, 15 de julho de 2019 , páginas 722-731
Uso de gelatina e goma arábica para microencapsulação de células probióticas de

Lactobacillus plantarum por um processo duplo combinando emulsificação dupla
seguida por coacervação complexa
Daniele de Almeida Paula a , Eliane Maurício Furtado Martins b, Nataly de Almeida Costa a, Patrícia Martins de Oliveira a, Eduardo Basílio de
Oliveira a, Afonso Mota Ramos a
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https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2019.04.110 Obtenha direitos e conteúdo
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1 . Introdução
Nas últimas duas décadas, os consumidores priorizam cada vez mais a ingestão de alimentos mais saudáveis e de maior valor
nutricional. Diante dessa nova realidade, o setor de alimentos funcionais ganhou destaque, representando uma das categorias
mais dinâmicas e inovadoras da indústria de alimentos [ 1 ]. Esses alimentos não só contribuem para a nutrição básica, mas
também contêm componentes fisiologicamente ativos, dos quais um dos principais segmentos é representado pelos probióticos.
A Organização para a Alimentação e Agricultura (FAO) das Nações Unidas e a Organização Mundial da Saúde (OMS) definem os
probióticos como microrganismos vivos que, quando administrados em quantidades adequadas, conferem benefícios à saúde do
consumidor [ 72] No entanto, muitos são os desafios nesse setor da indústria de alimentos, principalmente no que diz respeito à
viabilidade desses microrganismos durante o processamento e armazenamento do produto [ 2 ], baixas taxas de sobrevivência
no trato gastrointestinal humano (TGI) e baixa permanência no intestino [ 3 ]. Visando superar essas limitações, diferentes
técnicas têm sido avaliadas, incluindo seleção adequada de cepas bacterianas , adaptação ao estresse, incorporação de
micronutrientes como peptídeos e aminoácidos e microencapsulação [ 4 ] [ 5 ].
A microencapsulação consiste em aprisionar as células probióticas dentro de um material secundário, também denominado
“matriz” ou “reservatório”, formando pequenas cápsulas. Essas cápsulas podem proteger as células probióticas de condições
adversas e são capazes de manter quantidades suficientes para que possam exercer seus efeitos benéficos esperados.
Atualmente, a coacervação complexa representa um dos métodos de microencapsulação mais amplamente usados [ 6 ] [ 7 ]. Este
processo é baseado na interação atrativa entre dois biopolímeros.com cargas elétricas opostas em um determinado pH, levando
a uma separação de fases no sistema e, portanto, resultando na formação de complexos de coacervato. Quando isso ocorre, uma
das fases do sistema torna-se consideravelmente mais rica no solvente, enquanto a outra fase é mais rica nos dois biopolímeros
utilizados [ 7 ]. Dentre os biopolímeros mais utilizados no complexo processo de coacervação, gelatina, goma arábica , alginato ,
albumina , caseína, ágar, pectinas e quitosana são os mais freqüentemente encontrados em relatos da literatura [ [8] , [9] , [10] ].
Em particular, a gelatina / goma arábica constitui o primeiro sistema utilizado, e é provavelmente o mais estudado [ 11] Gelatina
(GE), um material proteico biodegradável derivado da hidrólise parcial do colágeno , ainda é a principal escolha comercial como
material de parede devido à sua excelente solubilidade em água, capacidade de emulsificação e espessamento e alta atividade de
reticulação devido à presença de grupos amino primários [ 12 ]. A goma arábica é um complexo aniônico polissacarídeo-proteína
arabinogalactano composto por três frações distintas com níveis de proteína variados (2–4%) e pesos moleculares [ 13 ]. Essa
composição resulta em uma eficiente atividade de superfície, além da solubilidade no frio, principalmente devido à presença de
grupos carregados residuais e fragmentos de peptídeos [ 14 ].
https://www-sciencedirect.ez48.periodicos.capes.gov.br/science/article/pii/S0141813018366911 1/20
A microencapsulação por coacervação complexa foi relatada como mais eficaz para compostos hidrofóbicos, como a oleorresina
de açafrão [ 15 ], β-caroteno [ 16 ] [ 17 ] e licopeno [ 18 ] [ 17 ]. Para componentes hidrofílicos são necessários ajustes à técnica,
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por exemplo, a produção de sistemas de emulsão dupla (W / O / W) [ 19 ] [ 20 ] [ 21] Tais sistemas também são conhecidos
como “emulsões de emulsões”, porque dois tipos de emulsão simples existem simultaneamente (O / A e A / O). Por suas
propriedades físico-químicas e estrutura, estudos têm sido realizadosDownload fulldeissue
no intuito reduzir o teor de gordura, mascarar sabores,
melhorar as propriedades sensoriais dos produtos ou controlar a liberação e proteção de substâncias e microrganismos, o que
inclui o encapsulamento de vitaminas, minerais ou probióticos bactérias para manter sua viabilidade durante a produção,
armazenamento e digestão gastrointestinal [ [22] , [23] , [24] , [25]] Apesar das vantagens dessas duas técnicas descritas acima,
até onde sabemos, não existem outros estudos disponíveis na literatura que busquem combinar as técnicas de coacervação
complexa e emulsificação dupla para melhorar a viabilidade das células probióticas. Portanto, o presente estudo buscou
microencapsular células probióticas de L. plantarum em emulsões duplas, e então submeter os sistemas resultantes à
coacervação complexa utilizando gelatina e goma arábica como matrizes. As microcápsulas liofilizadas foram então
caracterizadas em termos de teor de umidade, atividade de água, higroscopicidade , solubilidade, morfologia e tamanho médio
de partícula. Além disso, a sobrevivência das células probióticas foi avaliada durante in vitro simulação das condições
gastrointestinais, bem como após 45 dias de armazenamento a 8 ° C, 25 ° C e −18 ° C.
2 . material e métodos
2.1 . Materiais
A cultura de Lactobacillus plantarum foi adquirida na Digestive Care (Canadá). O óleo de milho foi comprado em um
supermercado local (Brasil). O emulsificante poliricinoleato de poliglicerol (PGPR) foi gentilmente cedido pela Dhaymer's (Ind.
E Com. De produtos químicos, São Paulo, Brasil). Outros produtos químicos e enzimas utilizados foram: sacarose (Neon, São
Paulo, Brasil), glicose (Êxodo Científica, São Paulo, Brasil), gelatina (tipo B), goma guar, NaOH e NaH 2 PO 4 · 2H 2 O (Synth,
São Paulo, Brasil), HCl (Sigma-Aldrich, São Paulo, Brasil), NaCl (Sigma-Aldrich, São Paulo, Brasil), CaCO 3 (Qeel, São Paulo,
Brasil), suínos mucosa gástrica pepsina (Sigma-Aldrich, São Paulo, Brasil), Lipase de Penicillium camemberti (Sigma-Aldrich,
São Paulo, Brasil), Pancreatina de pâncreas suína (Sigma-Aldrich, São Paulo, Brasil), Bile bovina (Sigma-Aldrich, São Paulo,
Brasil) Meio de cultura Man-Rogosa-Sharpe (MRS; Kasvi, São Paulo, Brasil), Caldo MRS (TM Media, São Paulo, Brasil) e roxo
de bromocresol (Êxodo Científica, São Paulo, Brasil).
2.2 . Design experimental

Na primeira parte experimental, foram avaliadas as condições otimizadas para coacervação complexa . Inicialmente, diferentes
proporções dos biopolímeros (100: 0, 80:20, 60:40, 50:50, 40:60, 20:80 e 0: 100 de Gelatina: Goma arábica) e pH (3,5, 4,0, 4,5
ou 5.0) das misturas foram ajustadas. O experimento foi organizado em um delineamento inteiramente casualizado (CRD) e as
análises foram realizadas em duplicata com 3 repetições.
A segunda parte consistiu na encapsulação de células probióticas em emulsão dupla (W1 / O / W2) seguida de coacervação
complexa. As microcápsulas liofilizadas foram caracterizadas em termos de teor de umidade, atividade de água,
higroscopicidade , solubilidade, morfologia e tamanho médio de partícula. Além disso, a sobrevivência das células probióticas foi
avaliada durante simulação in vitro das condições gastrointestinais, bem como após 45 dias de armazenamento a 8 ° C, 25 ° C e
-18 ° C.
2.3 . Otimização das condições para coacervação complexa
2.3.1 . Preparação de dispersões de biopolímero

Gelatina (1%) foi hidratada em água destilada por 30 min seguido por agitação a 50 ° C / 25 min [ 26 ]. A temperatura foi
mantida abaixo de 60 ° C para evitar a hidrólise das cadeias de gelatina [ 27 ]. Para dispersão de goma arábica (1%), foi
adicionada a água destilada seguida de agitação a 40 ° C / 30 min.
2.3.2 . Coacervação complexa entre gelatina e goma arábica

A dispersão de gelatina foi lentamente adicionada à dispersão de goma arábica a 40 ° C seguida por agitação magnética para
obter as seguintes proporções em peso: 100: 0, 80:20, 60:40, 50:50, 40:60, 20:80 e 0: 100. Seguiu-se o ajuste do valor de pH
para 3,5, 4 ou 4,5 a 40 ° C para promover a coacervação complexa por meio de HCl (1 N) com agitação magnética constante. O
sistema resultante foi então resfriado a 10 ° C em um banho de gelo, ainda sob agitação. Este material arrefecido foi então
armazenado a 7 ° C durante 2 h.
2.3.3 . Potencial zeta
O sistema obtido na Seção 2.3.2 foi diluído para 0,001% e analisado em um equipamento Malvern Zetasizer Nano ZS (Malvern
Instruments Ltd. Malvern, Worcestershire, Reino Unido) equipado com um He Ne menor (633 nm) e usando um ângulo de
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detecção de 173 ° .
2.3.4 . Absorvância Download full issue
O sistema obtido na Seção 2.3.2 foi armazenado a 7 ° C por 2 h. A leitura da absorbância do sobrenadante foi adquirida a 600
nm usando um espectrofotômetro UV (Model UV-2001, Hitachi). Os resultados foram usados para traçar as curvas de
absorbância em função da concentração do polímero [ 37 ]. Os menores valores de absorbância indicaram menores
concentrações de biopolímero em suspensão, ou seja , maior quantidade de coacervatos complexos se formaram e precipitaram.
2.3.5 . Produção
Após o processo de coarcervação, os coacervatos complexos precipitados foram recuperados por centrifugação e secos a 105 ° C
até peso constante [ 28 ]. O rendimento foi calculado usando a Eq. (1) [ 29 ].
(1)
Onde
Y: rendimento de coacervatos complexos (%);
m i : massa de coacervatos complexos secos;
m 0 : massa de biopolímeros usados.
2.4 . Emulsões duplas
2.4.1 . Cepa bacteriana, cultura e condições de colheita

A cultura liofilizada de Lactobacillus plantarum (Jamieson, Canadá) foi cultivada duas vezes em caldo MRS. Foi inicialmente
incubado a 37 ° C por 24 h, e novamente cultivado em caldo MRS por 24 h. Em seguida, o sistema foi centrifugado a 5 ° C e 7000
g por 15 min. O sobrenadante do meio de cultura foi descartado e o pellet de células probióticas foi ressuspenso duas vezes em
solução salina estéril (0,85%, p / v), seguido de centrifugação a 5 ° C e 7000 g por 15 min.
2.4.2 . Preparação de dispersões

Para preparar as dispersões aquosas usadas para formar a fase interna das emulsões duplas (W 1 ), aproximadamente 1 g do
pellet de células probióticas foi ressuspenso assepticamente em 10 mL de água estéril enriquecida com 10 g · L -1 de sacarose, 4,6
g · L −1 glicose e 6,7 g L −1 gelatina [ 30 ] [ 31 ] a fim de obter pelo menos 10 10 células · mL −1 . Para confirmação dessa
concentração, foi utilizado o método de placa pour para contagem dos microrganismos probióticos, com 1 mL de cada diluição
colocado em uma placa de Petri com uma pequena quantidade de Man-Rogosa-sharpe (Mrs Agar), e as placas de Petri foram
incubadas. em potes anaeróbicos a 37 ° C por 72 h [ 32] Para a contagem de células, as placas de Petri contendo 25 a 250
colônias foram selecionadas. Os resultados foram expressos em número de UFC (unidades formadoras de colônia) por mililitro
de água (UFC · mL −1 ). A dispersão de óleo (O) foi preparada dispersando o surfactante PGPR (3%, p / p) em óleo de milho,
seguido por mistura a 65 ° C por 25 min [ 33 ] usando um agitador magnético (modelo 752A / 6, Fisatom, São Paulo, Brasil). As
dispersões aquosas utilizadas para formar a fase aquosa externa (W 2 ) eram compostas por gelatina (6% p / v). Essa
concentração foi determinada por meio de testes preliminares, nos quais foram avaliadas a estabilidade cinética das emulsões e
o tamanho das gotas de óleo. A gelatina foi hidratada por 30 min, seguida por agitação magnética a 50 ° C por 25 min [ 26 ].
2.4.3 . Preparação de emulsões duplas (W1 / O / W2)

Emulsões duplas foram preparadas através de um procedimento de duas etapas: na primeira etapa foi preparada uma emulsão
primária (W1 / O), e na segunda etapa esta emulsão primária foi incorporada dentro de uma segunda dispersão aquosa (W2) [
34 ]. A emulsão primária (W1 / O) foi preparada adicionando 6,5 g da dispersão aquosa interna (W1) a 8,5 g da dispersão de óleo
/ PGPR (O) sob agitação vigorosa (6000 rpm por 60 s) usando um homogeneizador Ultra-Turrax (modelo T18 Basic, IKA Works
Inc., Wilmington, NC, EUA). Em seguida, para preparar a emulsão dupla, 13 g da emulsão primária (W 1 / O) foram adicionados
lentamente a 100 g da dispersão aquosa externa (W2), enquanto se misturava a 5500 rpm por 90 s usando o mesmo
equipamento Ultra-Turrax.
A viabilidade das células probióticas depende do tamanho das gotas de água internas e das gotas de óleo [ 32 ]. Como resultado,
a proporção de gelatina, velocidade e tempo de rotação durante a homogeneização foram determinados por pré-testes, a fim de
obter gotículas aquosas internas com um tamanho médio de partícula superior a ~ 1,58 μm na emulsão primária e gotículas W1 /
O maiores que ~ 11 μm nas emulsões duplas. Os valores estipulados baseiam-se nos de Rodríguez-Huezo et al. [ 73 ], que os
considerou adequados para acomodar bactérias com tamanho de ~ 1 μm. View PDF
2.4.4 . Microestrutura das emulsões duplas (W1 / O / W2)

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Microscopia de luz (Olympus BX-60) com aumento de 40 × foi usada para visualizar a microestrutura das emulsões duplas. As
amostras diluídas 10 vezes foram colocadas em lâminas de microscópio, cuidadosamente cobertas com uma lamela de vidro,
visualizadas e fotografadas (Canon, Poxer Shot A620).
2.4.5 . Contagem de L. plantarum em emulsões duplas (W1 / O / W2)

As emulsões duplas contendo células de L. plantarum (25 g) foram homogeneizadas em solução salina (NaCl 0,85%) para
obtenção da diluição 10-1 , seguida de diluições seriadas. O método da placa pour foi utilizado para enumerar os microrganismos
probióticos, com 1 mL de cada diluição colocado em uma placa de Petri com uma pequena quantidade de Man-Rogosa-sharpe
(Mrs Agar). As placas de Petri foram incubadas em potes anaeróbicos a 37 ° C por 72 h [ 32 ], e para a contagem de células as
placas de Petri contendo 25 a 250 colônias foram selecionadas. Os resultados foram expressos em número de UFC (unidades
formadoras de colônia) por mililitro de emulsão (UFC · mL −1 ).
2,5 . Produção de microcápsulas por coacervação complexa
2.5.1 . Coacervação complexa entre goma gelatina-arábica

O complexo processo de coacervação foi realizado de acordo com Shaddel et al. [ 35 ], com pequenas modificações. Em resumo,
100 mL das emulsões duplas (W1 / O / W2) foram adicionados lentamente a 100 mL da solução de goma arábica (6%, 40 ° C),
usando uma proporção de 1: 1 de biopolímeros (gelatina: goma arábica) . A seguir, 200 mL de água esterilizada foram
cuidadosamente adicionados a esta mistura, e o pH foi ajustado para 4,0 (HCl 0,1 N) sob agitação a 40 ° C. O sistema resultante
foi resfriado a 10 ° C em um banho de gelo, ainda sob agitação. O material frio resultante foi armazenado a 7 ° C por 2 h para que
as microcápsulas assentassem, facilitando a remoção da fase aquosa. Depois disso, o material sólido remanescente contendo as
microcápsulas foi desidratado por liofilização.
2.6 . Caracterização físico-química das microcápsulas liofilizadas contendo células de L. plantarum
2.6.1 . Atividade de água (A W )

A atividade da água foi medida usando um medidor de atividade da água (Aqualab, Decagon. Model 3TE, Pullman, Washington,
EUA) a 25 ° C.
2.6.2 . Teor de umidade

O conteúdo de umidade das microcápsulas foi determinado gravimetricamente com calor, conforme descrito no AOAC [ 74 ].
Para esta análise, 2 g das microcápsulas foram pesadas (Bel, São Paulo, Brasil) e, a seguir, uniformemente espalhadas em
cápsulas metálicas pré-secas e secas (105 ± 2 ° C) (Quimis, Q819V2, São Paulo, Brasil) até atingirem massa constante.
2.6.3 . Higroscopicidade
A higroscopicidade das amostras foi medida de acordo com o método descrito por Cai e Corke [ 75 ]. Cerca de 1,0 g de
microcápsulas liofilizadas foram colocadas em placa de Petri e armazenadas em recipiente com solução saturada de NaCl (UR
75,29%) por uma semana. A higroscopicidade foi expressa em g de água absorvida por 100 g de amostra (%).
2.6.4 . Dispersibilidade
Para medir a solubilidade das amostras, 0,5 g de microcápsulas foram pesados em um frasco cônico contendo 50 mL de água
destilada. A homogeneização da mistura resultante foi conduzida por agitação magnética (Fisatom, 752A, São Paulo, Brasil) a
100 rpm por 30 min (25 ° C). Após centrifugação a 3500 rpm por 5 min, uma alíquota de 25 mL do sobrenadante foi transferida
para um prato de alumínio seco e pré-pesado que foi mantido a 105 ° C para remover a umidade. A dispersibilidade das
microcápsulas foi determinada considerando a massa do prato vazio e o prato contendo a amostra seca [ 36 ].
Onde
D : Dispersibilidade (%);
m i : Massa de microcápsulas secas;
m 0 : Massa de microcápsulas usadas.

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2.6.5 . Morfologia e tamanho médio de partícula das microcápsulas
A morfologia das microcápsulas foi avaliada por Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV) (Leo, 1430VP) de acordo com
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Silveira [ 76 ]. As microcápsulas foram metalizadas com o equipamento Sputter Coater (modelo FDU 010, Bal-Tec, Balzers,
Liechtenstein). Posteriormente, o material foi observado em Microscópio Eletrônico de Varredura LEO 1430 VP, com
incrementos entre 500 e 2.000 μm. O tamanho médio de partícula de aproximadamente 100 microcápsulas foi determinado
usando o software ImageJ 1.50i [ 37 ].
2.7 . Avaliação de células probióticas microencapsuladas
2.7.1 . Contagem de L. plantarum

As microcápsulas liofilizadas foram homogeneizadas em solução salina (0,85%) para obter a diluição 10-1 seguida de diluições
seriadas. Essa suspensão foi então mantida a 25 ° C por 30 min sob agitação magnética para liberação de células probióticas [ 38
]. A contagem de células foi determinada de acordo com o procedimento na Seção 2.4.5. Os resultados foram expressos em
número de UFC (unidades formadoras de colônia) por grama de microcápsulas (UFC · g -1 ).
2.7.2 . Eficiência do encapsulamento de L. plantarum

A eficiência de encapsulação (EE) foi definida como o número de células viáveis nas microcápsulas em comparação com o
número inicial na emulsão dupla, conforme apresentado na Eq. (4) de acordo com Martin et al. [ 39 ]
(4)
Onde:
N : Número de células viáveis (log CFU · g− 1 ) nas microcápsulas.
N 0 : Número de células viáveis (log UFC · mL −1 ) na emulsão dupla.
2.7.3 . Avaliação da sobrevivência de L. plantarum quando submetido a condições gastrointestinais in vitro

Essa análise foi realizada em modelo in vitro , baseado na simulação de sucos gástricos e entéricos e enzimas do trato
gastrointestinal (fase gástrica, fase entérica I e fase entérica II), de acordo com a metodologia proposta por Bedani et al. [ 40 ] e
Campos et al. [ 41 ]. Células probióticas livres e encapsuladas foram expostas a essas condições para avaliar suas taxas de
sobrevivência:
▪ Fase gástrica: alíquotas de 10 mL da diluição de 10 −1 de microcápsulas foram transferidas para 3 frascos Schott estéreis de
100 mL e o pH foi ajustado para 2,3–2,6 ao despejar uma solução de HCl 1 N. Em seguida, foram adicionadas pepsina da
mucosa do estômago de suínos e lipase de Penicillium camemberti até atingir as concentrações de 3 g L −1 e 0,9 mg L −1 ,
respectivamente. Os frascos foram incubados a 37 ° C por 2 h sob agitação a 150 rpm em uma incubadora com agitador
SOLAB (SL 222).
▪ Fase entérica I: o pH dos sistemas da fase gástrica foi aumentado para 5,4-5,7 ao descartar uma solução alcalina (pH 12,
NaOH 1 N e NaH 2 PO 4 · 2H 2 O), também contendo bile bovina e pancreatina de pâncreas suína nas concentrações de 10 g ·
L −1 e 1 g · L −1 , respectivamente. Os frascos foram reincubados a 37 ° C durante 2 h sob agitação.
▪ Fase entérica II: o pH dos sistemas da fase entérica I foi elevado para 6,8-7,2 pela adição da mesma solução alcalina. Bile
bovina e pancreatina foram então adicionadas em concentrações de 10 g L -1 e 1 g L -1 , respectivamente. Os sistemas foram
novamente incubados a 37 ° C por 2 h sob agitação, totalizando 6 h de ensaio.
A enumeração das células sobreviventes nas condições gastrointestinais foi realizada após a conclusão de cada fase ( ou seja ,
após 2, 4 e 6 h). Alíquotas de 1 mL foram retiradas e diluídas em série em solução salina. A contagem de bactérias probióticas foi
realizada conforme descrito no item Seção 2.4.5 .
2.7.4 . Viabilidade de culturas de probióticos microencapsuladas armazenadas a 25 ° C, 8 ° C ou −18 ° C

As microcápsulas liofilizadas foram armazenadas em temperatura ambiente (25 ° C), sob refrigeração (7 ° C) e congelamento
(−18 ° C), por 45 dias. A contagem de células viáveis foi avaliada de acordo com o item Seção 2.4.5 , e os resultados foram
expressos em log UFC · mL −1 .
2.8 . análise estatística
Para análise e interpretação dos dados foi aplicada uma ANOVA, e quando houve diferença significativa as médias foram
comparadas pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade. O programa utilizado para esse fim foi Statistical Analysis Systems (SAS)
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(Statistical Analysis System - SAS Institute, Cary, NC, EUA) versão 9.2, licenciado pela Universidade Federal de Viçosa.
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3 . Resultados
3.1 . Condições otimizadas para coacervação complexa

A Fig. 1 A mostra os valores do potencial zeta dos coacervatos obtidos usando diferentes proporções de biopolímeros (Gelatina:
Goma arábica) em diferentes valores de pH. Quando utilizado o pH 5,0, observou-se que os biopolímeros apresentavam carga
elétrica negativa e sem coacervação . Como resultado, os valores de absorbância e rendimento não foram relacionados para esta
condição. Os valores do potencial zeta negativo podem fornecer interação repulsiva entre as partículas e proibir a agregação,
indicando boa estabilidade física do sistema [ 35 ]. Os materiais de parede usados neste trabalho contêm grupos carboxílicos
(COOH ⇌ COO - + H + ) e amina (NH 3 + ⇌ NH2 + H + ) como grupos ionizáveis. Os altos valores de potencial zeta negativo são
devidos à presença de grupos carboxílicos GA em pH 4,0 porque GA possui uma carga negativa de pH 11,8-2,0 e um pKa
próximo a pH 2,0, enquanto GE Tipo A tem um pI em pH em torno de 7,0-9,0, e portanto, é carregado positivamente abaixo de
seu pI (pH = 4,0) [ 42 ].
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Fig. 1 . - Otimização das condições para coacervação complexa A) Valores do potencial Zeta (mV) B) Rendimento do coacervato
complexo e C) Absorbância após coacervação complexa.
Verificou-se que em pH 3,5, 4,0 e 4,5, valores próximos à neutralidade foram encontrados para as concentrações 60:40 (4,0 mV
pH = 3,5 e - 4,9 mV pH = 4,0), 50:50 (2,2 mV pH = 3,5 e - 6,9 mV pH = 4,0) e 80:20 (3,7 mV pH = 4,0 e - 2,8 mV pH = 4,5).
Assim, os biopolímeros ficaram mais complexos entre si e, conseqüentemente, formaram-se os complexos de coacervato. A
diminuição dos valores negativos do potencial zeta é devido à compensação de carga que ocorre entre os biopolímeros [ 17 , 44 ].
De acordo com Jain et al. [ 18 ], as densidades de carga podem ser estequiometricamente equilibradas e este pode ser o Ponto de
Equivalência Elétrica (EEP) do arranjo de biopolímero. De acordo com Eghbal et al. [ 43], a principal força envolvida no
processo de coacervação é a interação eletrostática, porém algumas interações de curto alcance podem estar secundariamente
envolvidas, como interação hidrofóbica, ligações de hidrogênio e forças de van der Waals [ 46 ].
Verificou-se que os maiores rendimentos e menores valores de absorbância foram obtidos quando se utilizou a concentração do
biopolímero 50:50 (gelatina: goma arábica) nos valores de pH 3,5 e 4,0 ( Fig. 1 B e C). Portanto, as amostras apresentaram
opalescência leve devido à formação de complexos insolúveis [ 77 ]. Em pH 4,5 as proporções do biopolímero de 60:40 e 80:20
apresentaram coloração branca devido à formação de complexos solúveis, apresentando alta turbidez. Os resultados obtidos são
semelhantes aos relatados por Shaddel [ 22 ], que determinou a relação material da parede de 1: 1 (gelatina: goma arábica) como
a mais adequada para microencapsulação de antocianinas em pH 4,0.
Assim, nas condições otimizadas, especificamente onde o valor do potencial zeta foi próximo a zero, menor absorbância e
maiores rendimentos foram obtidos utilizando a concentração de biopolímero 50:50 em pH 3,5 e pH 4,0. Posteriormente, foram
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realizados testes preliminares utilizando o processo de coacervação associado à emulsificação dupla (dados não mostrados),
sendo estabelecido o valor de pH 4,0 para a continuação do experimento.
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3.2 . Microestrutura das emulsões duplas (W1 / O / W2), emulsão primária (W1 / O) e viabilidade de L.
plantarum em emulsões duplas
Pelas fotomicrografias ( Fig. 2 B ) pode-se notar que as gotas de água internas (W 1 ) foram densamente agrupadas e distribuídas
dentro das gotas de óleo (O). Estas últimas foram dispersas na fase aquosa externa (W 2 ), apresentando, assim, a estrutura
característica de emulsões duplas. Em relação à viabilidade das células de Lactobacillus plantarum , foi obtido o valor de 7,93 ±
0,2 log UFC · mL −1 . A partir das imagens obtidas por microscopia óptica, células de L. plantarum foram detectadas no interior
das gotas de água da emulsão primária (W1 / O) ( Fig. 2 A) e posteriormente incorporadas e dispersas nas gotas de óleo das
emulsões duplas (W1 / O / W2) ( Fig. 2B).
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Fig. 2 . Imagens de microscopia de luz da emulsão primária (W1 / O) (A) e emulsões duplas (W1 / O / W2) (B). As barras de
escala representam 20 μm e 5 μm em ampliações de 40 ×. Setas vermelhas indicam que as células de L. plantarum foram
detectadas dentro das gotas de água.
3.3 . Caracterização morfológica de microcápsulas contendo células de L. plantarum

As microcápsulas ( Fig. 3 A e B ) eram irregulares, multinucleadas e apresentavam tamanhos diferentes. O núcleo foi
encapsulado pelo material da parede, proporcionando maior proteção às células probióticas. Características morfológicas
semelhantes também foram observadas por Calderón-Oliver et al. [ 44 ] ao aplicar coacervação complexa para microencapsular
uma mistura de nisina (um macropeptídeo antimicrobiano) e um extrato antioxidante de casca de abacate, usando os dois
sistemas de matriz-parede (colágeno / alginato e colágeno / pectina). Dulcel et al. [ 45 ] obtiveram microcápsulas esféricas
pequenas com tamanho médio de cerca de 10 μm em pH 3,5 usando os biopolímeros globulinas de ervilha / goma arábica e alfa
gliadinas / goma arábica na concentração de 1 g L-1 . No entanto, no mesmo pH, mas para uma concentração de polímero de 10 g
L -1, esses autores descobriram que o tamanho dos coacervados era> 50 μm, e algumas partículas aglomeraram e coalesceram,
resultando em várias formas. Os resultados do presente estudo, juntamente com esses exemplos da literatura, indicam que a
morfologia dos coacervados é fortemente dependente do pH, bem como do tipo e concentração dos biopolímeros escolhidos para
serem usados como materiais de parede.
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Fig. 3. Photomicrographs obtained by light microscopy of the moist microcapsules (A) and by scanning electron microscopy of
the lyophilized microcapsules (B). Red arrows indicate the microcapsules irregular, multinucleated and presented different sizes.
Pelas imagens obtidas por microscopia eletrônica de varredura, pode-se notar que as microcápsulas foram conectadas entre si
por ligações sólidas, provavelmente causadas pelo processo de congelamento seguido de liofilização [ 46 ]. No entanto, isso pode
facilitar a penetração da água durante a dissolução / dispersão, devido à presença de capilares no interior dos aglomerados [ 47
]. Além disso, não havia células bacterianas na superfície das microcápsulas liofilizadas, indicando que as células de L.
plantarum estavam bastante imobilizadas no núcleo das estruturas do biopolímero supramolecular , que formaram
microcápsulas semelhantes a reservatórios. Eratte et al. [ 48] também obtiveram resultados semelhantes ao encapsular bactérias
ômega-3 e probióticas em uma única microcápsula via coacervação complexa, usando proteína de soro de leite e goma arábica
em pH 3,5. Acredita-se que as cápsulas de reservatório fornecem maior proteção às células probióticas em comparação com as
cápsulas de matriz. No primeiro, os probióticos são imobilizados na região central e protegidos por uma parede de biopolímero,
enquanto nas cápsulas do tipo matriz as células se espalham por todo o volume das partículas, ficando mais suscetíveis aos
estresses ambientais [ 49 ].
3.4 . Caracterização físico-química das microcápsulas liofilizadas contendo células de L. plantarum

As microcápsulas contendo células probióticas ( L. plantarum ) apresentaram dispersibilidade de 0,183 ± 0,17 g · mL −1 em água
destilada. Valores baixos de dispersibilidade são característicos de microcápsulas produzidas por coacervação complexa, pois em
um dado pH moléculas com cargas opostas interagem eletrostaticamente resultando em divisão de fase, separando-as da fase
aquosa [ 7 , 50 ]. Por outro lado, essa característica pode ser desejável tendo em vista que proporciona excelente liberação
controlada do material encapsulado, desencadeada por tensões mecânicas, mudanças de temperatura ou variações de pH [ 35 ,
46 , 51 ]. Resultados semelhantes foram obtidos por Rocha-Selmi et al. [46 ] para microencapsular a sucralose por emulsão
dupla seguida por coacervação complexa ao usar uma solução de 5,0% de gelatina e goma arábica e 100% do material do núcleo.
Neste estudo, os autores encontraram uma dispersibilidade de aproximadamente 0,1995 g · mL −1 para as microcápsulas.
O teor de umidade das microcápsulas contendo células probióticas ( L. plantarum ) foi de 4,5 ± 0,04%, que está na faixa de 3% a
5%, frequentemente relatado como ótimo para estabilidade microbiana e química [ 51 ] [ 46 ]. De acordo com Silva et al. [ 18 ], o
baixo teor de umidade é importante para garantir a prevenção da aglomeração, pois reduz a retenção do material encapsulado e
dificulta a dispersão das microcápsulas durante as aplicações em produtos alimentícios [ 52 ]. Além disso, o baixo teor de
umidade limita a mobilidade molecular, reduzindo a taxa de difusão de compostos externos que podem atingir o núcleo da
estrutura e afetar o material encapsulado [ 20 ] [53 ].
A atividade de água das microcápsulas contendo células probióticas ( L. plantarum ) foi de 0,34 ± 0,03. Resultados semelhantes
foram obtidos por outros autores que aplicaram coacervação complexa para encapsular compostos tecnologicamente relevantes.
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Por exemplo, Rocha-Selmi et al. [ 46 ] sucralose microencapsulada usando gelatina / goma arábica em pH 4,0; Comunian et al. [
54 ] ácido ascórbico microencapsulado usando gelatina / goma arábica em pH 4,4 a 40 ° C; Rascón et al. [ 55 ], após a
impregnação de células probióticas de Lactobacillus rhamnosusnasDownload
rodelas defull issue e submetendo-as à liofilização, verificou-
banana
se que a viabilidade do microrganismo se manteve durante o armazenamento por 20 a 28 dias, para atividades de água entre
0,115 e 0,327. De acordo com Silva et al. [ 49 ], A w ~ 0,3 é considerado satisfatório para microcápsulas de biopolímero
liofilizado, uma vez que condições com A w  <0,2 podem favorecer a oxidação lipídica e, consequentemente, reduzir o número de
células viáveis. Por outro lado, quando A w  > 0,4 a absorção de água é favorecida, o que pode acelerar a deterioração do sistema
por outros microrganismos.
A higroscopicidade das microcápsulas contendo células probióticas ( L. plantarum ) foi de 9,20 ± 0,43 g de água absorvida por
100 g de amostra. Rocha-Selmi et al. [ 51 ] obtiveram valores de higroscopicidade entre 5,16 e 16,11 g de água absorvida por 100 g
para microcápsulas de gelatina / goma arábica obtidas por coacervação complexa em pH 4,0 contendo aspartame . Silva et al. [
18 ] encontraram, para microcápsulas de licopeno obtidas por coacervação de gelatina e pectina em pH 8,0 e 40 ° C, valores de
higroscopicidade variando entre 33,4 ± 0,8 ge 36,8 ± 1,4 g de água absorvida por 100 g. Nori et al. [ 56] também relataram
higroscopicidade entre 33,46 ± 0,66 e 34,10 g de água absorvida por 100 g para microcápsulas de própolis obtidas por
coacervação complexa de isolado protéico de soja e pectina em pH 8,0. Uma comparação desses resultados indicou que o par
gelatina / goma arábica levou a materiais menos higroscópicos em comparação com os outros pares de biopolímeros analisados.
Finalmente, o tamanho médio das microcápsulas contendo células probióticas ( L. plantarum ) variou de 66,07 ± 3,24 μm a
105,66 ± 3,24 μm. Esses valores são bem maiores do que os relatados em estudos semelhantes. Por exemplo, Mendanha et al. [
78 ] obtiveram valores entre 16 e 24 μm para microcápsulas de hidrolisado de caseína produzidas por dupla emulsificação
seguida de coacervação complexa quando usando pectina e isolados de proteína de soja como materiais de parede em pH 4,4.
Alvim e Grosso [ 79] relataram tamanhos entre 43,7 e 96,4 μm para microcápsulas de oleorresina de páprica produzidas por
coacervação complexa de gelatina e goma arábica como agentes encapsulantes em pH 4,0. De fato, muitos fatores têm sido
indicados na literatura como impactantes no tamanho das partículas produzidas por coacervação complexa, como agitação,
tempo, taxa de resfriamento, processo de secagem, natureza, concentração e proporção dos biopolímeros [ 54 ] [ 57 ]. Não existe
um "tamanho de partícula ideal", mas em vez disso, o tamanho médio desejável depende da aplicação específica pretendida e,
em alimentos, pode variar de alguns micrômetros (<500 μm) a alguns milímetros (até 3 mm) [ 49] No entanto, deve-se notar
que partículas maiores podem ter aplicações limitadas em produtos alimentícios, pois muitas vezes têm efeitos indesejáveis nas
propriedades de textura, o que é um desafio importante no desenvolvimento de produtos alimentícios [ 20 ]. No entanto,
partículas em escala milimétrica podem encontrar aplicação em alimentos fluidos ou semissólidos, como iogurte e sorvete [ 58 ].
3,5 . Avaliação da viabilidade de células microencapsuladas de L. plantarum

A viabilidade de células de L. plantarum microencapsuladas pelo processo duplo combinando emulsificação dupla seguida por
coacervação complexa usando gelatina e goma arábica (pH = 4,0) foi de 8,6 ± 1,2 log CFU · g -1 , representando um
encapsulamentoeficiência de 97,8%. Esta eficiência notavelmente elevada pode estar relacionada à inclusão da etapa de
emulsificação dupla antes da própria coacervação. Neste caso, as células foram inicialmente retidas dentro das gotículas de água
e dispersas nas gotículas de óleo, que foram então revestidas com a mistura de gelatina-goma arábica, fornecendo uma barreira
protetora adicional para bactérias de estresses externos (agitação, ciclo rápido de aquecimento / resfriamento e liofilização).
Além disso, a presença de células dentro das gotículas aquosas internas pode ter contribuído para limitar sua migração para fora
da cápsula: elas primeiro têm que cruzar a interface água / óleo, depois se difundir na fase oleosa, migrar através da parede de
revestimento (goma de gelatina árabe) e, finalmente, chegar ao exterior.
Não foram encontrados outros estudos que abordassem a incorporação de uma etapa de emulsificação dupla antes da
coacervação complexa, especificamente aplicada à encapsulação de células probióticas. Portanto, a comparação dos resultados
obtidos foi feita apenas com estudos que utilizaram o encapsulamento por coacervação complexa. Silva et al. [ 59 ] obtiveram
eficiência de encapsulação de 86% em seu estudo que abordou a microencapsulação de Bifidobacterium lactis por coacervação
complexa, utilizando gelatina e goma arábica em pH 4,0. Eratte et al. [ 48] microencapsulado ômega-3 e bactérias probióticas
em uma única microcápsula por coacervação complexa usando proteína de soro de leite (WPI) e goma arábica em pH 3,75.
Nesse caso, os autores relataram uma taxa de sobrevivência do microrganismo de 84,95%. Mais geralmente, a coacervação é
uma tecnologia de encapsulação altamente promissora porque muitas vezes leva a uma alta eficiência de encapsulação e permite
a liberação controlada do material do núcleo (células probióticas ou compostos bioativos específicos), que pode ser
desencadeada por estresse mecânico, mudanças de temperatura ou variações de pH. Também é importante o fato de que esta
tecnologia usa condições de operação moderadas e não requer solventes orgânicos tóxicos , tornando-a, portanto,
ecologicamente correta e adequada para aplicações alimentícias [ 60 ] [ 61 ].
3.6. Evaluation of microencapsulated L. plantarum cells survival under gastrointestinal conditions
The in vitro assay was performed by simulating three phases (gastric, enteric I and enteric II), and the results, in terms of
survival of encapsulated and unencapsulated L. plantarum, are represented in Fig. 4. Free and encapsulated probiotic cells were
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exposed to these conditions to assess their survival rates [62]. A significant reduction (p < 0.05) in the cellular viability of both
treatments was observed after the gastric phase. For the encapsulated cells the viability reached 80.4% (reduction of
1.6 log CFU·g−1), whereas only 25.0% viability was observed for free Download full issue
cells (reduction of 5.86 log CFU·g−1).
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Fig. 4. Survival of encapsulated and unencapsulated L. plantarum in the in vitro GIT assay. Bars indicate viability of the strain
before being exposed to gastric stress, followed by the gastric, enteric I and enteric II phases of the GIT. Upper-case letters
reflect comparisons between the phases of the in vitro assay for the same treatment. Lower-case letters refer to comparisons
between each treatment for the same phase of the in vitro assay. Means followed by the same letter do not differ according to the
Tukey test at 5% probability.
Similar results were reported by other authors who found marked losses in viability of free cells during gastrointestinal
simulations, as a consequence of the low pH of the medium [63] [59] [64]. For instance, Bosnea et al. [65] observed reductions
of 2.5 and 5 log CFU·g−1 for L. paracasei and L. plantarum, respectively, in microcapsules produced from whey protein isolate
and gum arabic by complex coacervation. Silva et al. [59] found a reduction of 1.92 log CFU·g−1 of viable Bifidobacterium Bb-12
cells microencapsulated by complex coacervation using gelatin and gum arabic followed by lyophilization. Our results, along
with these literature examples, indicated that microencapsulation can improve cell survival under the severe acidic conditions of
simulated gastric juice. Probiotic cells are typically very sensitive to the highly acidic conditions of the human stomach [66].
According to Bosnea et al. [65], many bacteria have proton pumps in their plasma membrane as a defense mechanism to
maintain the cytoplasm close to their physiological pH. However, if these regulatory systems are unable to function correctly,
intracellular acidification will occur and cause a loss of viability, as observed in free cells. In the case of encapsulated cells, excess
protons may not substantially affect the cell cytoplasm pH because they interact with the acidic and alkaline groups of
biopolymers surrounding the encapsulated cells, participating in protonation equilibrium. In low pH media, the side chain
amino groups of the proteins are protonated and the percentage of carboxylic groups dissociated from the polysaccharides is
diminished. Therefore, electrostatic interactions between these biopolymers are strengthened so the cells are less likely to be
severely affected by the ambient pH. In addition, the microcapsule wall material provides a physical barrier against gastric
fluids, increasing protection of the cells against adverse conditions [62]. For this reason it should be emphasized that
microparticles should not be dispersible in aqueous media in order to maintain their structural integrity in the food matrix and
especially in the upper gastrointestinal tract (gastric phase) [66]. According to results previously presented (Section 3.3) the
coacervate microcapsules presented 0.183 g.mL−1 solubility, and therefore the probiotic cells associated with this fraction may
have had some exposure to the gastric fluids, which explains the observed reduction in their viability.
Nas fases entéricas I e II, que simulam o intestino delgado e grosso, respectivamente, a viabilidade da cultura probiótica não
diferiu ( p  > 0,05) da viabilidade da fase gástrica após períodos de incubação de 4 e 6 h, respectivamente. As microcápsulas
formadas devido a interações atraentes entre a gelatina e a goma arábica podem ser interrompidas. Nessas condições de pH
(pH> 5), ambos os biopolímeros apresentam cargas elétricas predominantemente negativas, favorecendo a repulsão entre eles e
consequente ruptura da estrutura da microcápsula e liberação do conteúdo probiótico. Conforme indicado por Cook et al. [ 67], a
microencapsulação deve conferir um grau de liberação direcionada, depositando as células probióticas nos intestinos delgado e
grosso, para que possam colonizar o trato intestinal e fornecer benefícios à saúde do hospedeiro. De acordo com Madureira et al.
[ 68 ], pelo menos 10 6 a 10 7  UFC · g −1 ou mL −1 de células probióticas viáveis devem atingir o cólon intestinal para que o
alimento tenha um efeito terapêutico. Ao final das fases entéricas I e II do presente estudo, foi obtida uma contagem média de ~
6,4 log UFC · g −1 , de acordo com os requisitos para que os probióticos exerçam seus efeitos benéficos. Portanto, ingestãoespera-
se que de 1 g das microcápsulas contendo o L. plantarum microencapsulado forneça aos consumidores pelo menos 6,4 log  CFU
por dia. Em contraste, para as células livres, foi observada uma contagem de ~ 2,8 log CFU · g -1 , reforçando que as
microcápsulas foram eficazes na proteção das células probióticas. Além da formação de coacervatos proteína-polissacarídeo
(próprias microcápsulas), a presença de uma fração lipídica interna (óleo de milho) também pode ter contribuído para esse
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aumento da viabilidade celular em relação às células livres, conforme discutido anteriormente. Silva et al. [ 49 ] usaram o
processo de coextrusão e Lactobacillus acidophilus LA3 imobilizadocélulas em óleo de girassol que foi posteriormente coberto
com alginato ou uma mistura de alginato-goma-laca, fornecendo umaDownload
barreirafull issue para proteger os probióticos das
adicional
condições ambientais. Lahtinen et al. [ 69 ] relataram que a difusão de ácido ( íons H + ) e oxigênio em cápsulas contendo
lipídios é restrita e, portanto, pode fornecer proteção adicional ao probiótico. Corroborando com esses dados da literatura,
imagens obtidas por MEV ( Fig. 3 B) mostraram que a agregação das gotículas de óleo e seu revestimento com os coacervatos
(goma-arábica gelatina) formaram microcápsulas do tipo reservatório, uma vez que as células foram retidas nas gotículas
aquosas dispersas no óleo. Assim, menor exposição de L. plantarum células ao ambiente de alto estresse causado pelas
condições gastrointestinais simuladas podem ter ocorrido, explicando a viabilidade celular melhorada.
3,7 . Viabilidade de culturas de probióticos microencapsuladas armazenadas a 25 ° C, 8 ° C e −18 ° C

Conforme apresentado na Fig. 5 , não houve redução significativa na viabilidade celular microencapsulada após 45 dias de
armazenamento a 8 ° C e −18 ° C, com uma contagem de células de 7,6 log UFC · g −1 . Isso pode ser atribuído à formação de
cápsulas que efetivamente protegeram as células sob estresse ambiental, como oxigênio e umidade, e também limitaram a
difusão interna do calor . Em temperatura ambiente (25 ° C), houve uma redução de 2,52 log UFC · g -1 na viabilidade de L.
plantarum após 45 dias de armazenamento.
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Fig. 5 . - Viabilidade de células probióticas microencapsuladas e armazenamento a 25 ° C, 8 ° C e −18 ° C.
Oliveira et al. (2007) produziram micropartículas probióticas por coacervação complexa, com caseína e pectina como
encapsulantes, seguida de secagem em leito de jato. Depois de 60 dias de armazenagem a 37 ° C, Bifidobacterium lactis e L . As
viabilidades dos acidófilos foram reduzidas em 2,7 e 4,7 log UFC · g -1 , respectivamente, enquanto os probióticos em
microcápsulas armazenadas a 7 ° C mostraram maior viabilidade. Esses resultados reforçam o fato de que a temperatura de
armazenamento também desempenha um papel na viabilidade probiótica, mesmo que as partículas tenham sido previamente
secas. Alves et al. [ 80 ] Lactobacillus plantarum encapsuladopor extrusão, usando alginato e amido de milho como materiais de
parede, e descobriu que o armazenamento à temperatura ambiente levou a uma redução significativa de> 2 log após 30 dias.
Seus resultados foram atribuídos à atividade metabólica dos microrganismos a 25 ° C, com a produção de vários metabólitos e
compostos de bacteriocinas e / ou ausência de substratos que podem levar à inativação de bactérias probióticas [ [70] , [71] ].
4 . Conclusões
Utilizando o processo de dupla emulsificação associado à coacervação complexa , foram desenvolvidas microcápsulas com
características adequadas para aplicação em alimentos, pois apresentaram alta eficiência para encapsulação de Lactobacillus
plantarum e alta viabilidade celular após simulação in vitro das condições gastrointestinais em comparação com células livres. A
inclusão de células probióticas nas gotículas de água da emulsão dupla (W / O / W) pode ter limitado a migração das células
para o exterior da matriz encapsulante. Consequentemente, aumentou a eficiência de encapsulação, favoreceu a incorporação de
células na matriz encapsulante e reduziu a exposição de L. plantarum.células a condições adversas da mídia externa. As
microcápsulas formadas mantiveram a viabilidade das células de L. plantarum durante o armazenamento por 45 dias a 8 ° C e
−18 ° C. Todos os resultados indicaram que o processo duplo (dupla emulsificação e seguido de coacervação complexa) proposto
neste trabalho para microcapsular células de L. plantarum é uma abordagem útil e promissora para encapsulação deste
microrganismo, representando assim uma nova alternativa a ser aplicada no desenvolvimento de biofuncionais. alimentos.
Reconhecimentos
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Agradecemos ao Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) pelo apoio financeiro para este estudo.
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Uso de Gelatina e Goma Arábica para Microencapsulação de Células Probióticas de Seguida Por Coacervação Complexa

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12/11/2021 16:46 Uso de gelatina e goma arábica para microencapsulação de células probióticas de Lactobacillus plantarum por um processo…

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International Journal of Biological Macromolecules

Uso de gelatina e goma arábica para microencapsulação de células probióticas de

Contorno Share Cite

https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2019.04.110 Obtenha direitos e conteúdo

2.2 . Design experimental

2.3 . Otimização das condições para coacervação complexa

2.3.1 . Preparação de dispersões de biopolímero

2.3.2 . Coacervação complexa entre gelatina e goma arábica

2.3.3 . Potencial zeta

2.3.4 . Absorvância Download full issue

Y: rendimento de coacervatos complexos (%);

m i : massa de coacervatos complexos secos;

m 0 : massa de biopolímeros usados.

2.4 . Emulsões duplas

2.4.1 . Cepa bacteriana, cultura e condições de colheita

2.4.2 . Preparação de dispersões

2.4.3 . Preparação de emulsões duplas (W1 / O / W2)

2.4.4 . Microestrutura das emulsões duplas (W1 / O / W2)

2.4.5 . Contagem de L. plantarum em emulsões duplas (W1 / O / W2)

2,5 . Produção de microcápsulas por coacervação complexa

2.5.1 . Coacervação complexa entre goma gelatina-arábica

2.6 . Caracterização físico-química das microcápsulas liofilizadas contendo células de L. plantarum

2.6.1 . Atividade de água (A W )

2.6.2 . Teor de umidade

m i : Massa de microcápsulas secas;

m 0 : Massa de microcápsulas usadas.

2.7 . Avaliação de células probióticas microencapsuladas

2.7.1 . Contagem de L. plantarum

2.7.2 . Eficiência do encapsulamento de L. plantarum

N : Número de células viáveis ​(log CFU · g− 1 ) nas microcápsulas.

N 0 : Número de células viáveis ​(log UFC · mL −1 ) na emulsão dupla.

2.7.3 . Avaliação da sobrevivência de L. plantarum quando submetido a condições gastrointestinais in vitro

2.7.4 . Viabilidade de culturas de probióticos microencapsuladas armazenadas a 25 ° C, 8 ° C ou −18 ° C

2.8 . análise estatística

Download full issue

3.1 . Condições otimizadas para coacervação complexa

3.3 . Caracterização morfológica de microcápsulas contendo células de L. plantarum

Download full issue

3.4 . Caracterização físico-química das microcápsulas liofilizadas contendo células de L. plantarum

3,5 . Avaliação da viabilidade de células microencapsuladas de L. plantarum

3.6. Evaluation of microencapsulated L. plantarum cells survival under gastrointestinal conditions

Download : Download high-res image (143KB) Download : Download full-size image

3,7 . Viabilidade de culturas de probióticos microencapsuladas armazenadas a 25 ° C, 8 ° C e −18 ° C

Fig. 5 . - Viabilidade de células probióticas microencapsuladas e armazenamento a 25 ° C, 8 ° C e −18 ° C.

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N 0 : Número de células viáveis (log UFC · mL −1 ) na emulsão dupla.