ATIVIDADE ASSÍNCRONA 7 Teste de eficácia antimicrobiana (até 12h de 13/11/21 sábado)

1- No que se refere aos agentes antimicrobianos pede-se INFORMAR a que tipos de

produtos farmacêuticos devem ser adicionados à formulação e quais as
características requeridas para seleção de um conservante. No que se refere aos
agentes antimicrobianos pede-se INFORMAR a que tipos de produtos farmacêuticos
devem ser adicionados à formulação e quais as características requeridas para
seleção de um conservante.

O uso dos conservantes antimicrobianos garantem a eficácia farmacológica. Sua utilização

se dá em formas farmacêuticas líquidas e semi sólidas, uma vez que o meio aquoso
aumenta a proliferação de microorganismos. Deve ser utilizado em formulações oftálmicas e
estéreis, garantindo então as propriedades essenciais destes fármacos- esterilidade.

O conservante deve estar termicamente estável; obtenha distribuição adequada em

emulsões; atue sobre ampla faixa de ph; não seja tóxico; tenha atividade antimicrobiana
para cepas específicas; cumpra a ação antimicrobiana até o prazo de validade do produto;
não sofra degradação ou interferência com a embalagem; sua ação não deve ser
comprometida por outros insumos utilizados na mesma formulação; e o mesmo não deve
interferir nas características dos outros componentes da fórmula, sejam excipientes ou
princípio ativo.

2- A eficácia de um agente conservante depende de sua concentração na formulação,

mas especificamente na fase aquosa, assim sendo, pede-se mencionar os fatores que
influenciam a efetiva concentração do agente conservante na fase aquosa,
explicando a forma como cada um dos fatores exerce sua influência.

Fatores que influenciam a concentração dos conservantes na fase aquosa:

● Dissociação em função do pH: os agentes antimicrobianos podem ser ácidos ou

bases fracas (podem-se dissociar dependendo do ph) tem-se a fração ionizada não
disponível para interação imediata com microrganismo. Nesse caso, deve-se
calcular a concentração do agente antimicrobiano já levando em consideração a
fração que permanece na forma molecular (não ionizada) que vai ser capaz de
interagir com o microrganismo.
● Partição na fase oleosa do produto: Para sistemas constituídos por mais de uma
fase, sendo uma delas oleosa. A partição do agente antimicrobiano da fase aquosa
para a fase oleosa leva a redução da concentração do agente antimicrobiano na
 fase aquosa podendo comprometer a sua eficácia. Ao se calcular a concentração
deste agente antimicrobiano deve-se levar em consideração qual é o coeficiente de
partição desse conservante, de forma que se possa garantir uma concentração
mínima efetiva desse agente antimicrobiano na fase aquosa.
● Solubilização: Para sistemas emulsionados, a formação de micelas que poderiam
incorporar no seu interior esse agente antimicrobiano tornando assim menor a
concentração deste agente antimicrobiano na fase aquosa passível de interagir com
os possíveis microrganismos.
● Presença de macromoléculas na formulação do produto em análise: Muitas
dessas macromoléculas têm a capacidade de se ligar aos agentes antimicrobianos
fazendo com que uma menor quantidade deste agente esteja realmente disponível
para interagir com microrganismos na fase aquosa.
● Ligação ao material de acondicionamento: reduz a concentração do conservante
disponível na forma aquosa para interação com os microrganismos.

3- Quais aspectos da formulação devem ser considerados ao se desenvolver um

produto farmacêutico que requeira a adição de um agente conservante?

Atividade água - Formulações que apresentam grande quantidade de água, ou seja,

quanto maior a atividade água presente mais necessário se faz a utilização de um agente
conservante.

Potencial oxi-redução - Formulações que apresentam potencial de oxi-redução positivo

favorecem o crescimento de microrganismos aeróbios e formulações que apresentam baixo
potencial de oxi-redução favorecem o crescimento de microrganismos anaeróbios.

Tensoativo não iônico associados a tensoativo catiônico - Pode se observar tanto um

efeito sinérgico quanto antagônico isso vai depender se se atinge ou não a concentração
micelar crítica para evitar o efeito antagônico e sinérgico sugere usar uma baixa proporção
do tensoativo não iônico usualmente quatro vezes ou menos para uma porção catiônico
usado na fórmula, usar tensoativos não iônicos com alto valor de concentração micelar
crítica, dessa forma então, levando a menor formação de micelas, logo menor inativação do
conservante. Além disso, outra alternativa seria a adição de compostos que tenham
propriedade de alterar a concentração micelar crítica dos tensoativos como: uréia, álcool e
glicose.

Complexos - A presença de agentes capazes de formar complexos na formulação também

afeta a concentração do conservante disponível na fase aquosa. Dentro dessas
substâncias capazes de se formarem complexos seriam: os lipossomas, sulfeto de sódio,
dentre outros antioxidantes.

Quelantes - como EDTA ou que tem uma ação de Promotor da ação do agente
conservantes, como parabenos ou EDTA.
Propilenoglicol (10 - 20%) - Quando ele está presente na formulação em uma
concentração de 10 a 20% ele já tem propriedades antimicrobianas, de forma que ele então
pode até dispensar o uso de agente conservantes.

4- Explicar a necessidade do uso de um neutralizante da ação antimicrobiana para

execução do teste de eficácia de conservante. Apresentar um exemplo e indicar como
deve ser empregado na execução do procedimento.

É necessário a utilização de um neutralizante adequado para o conservante presente no

produto, pois se não inativar o conservante presente no produto os microrganismos vão ser
inibidos e será impossível observar o crescimento deles.

Exemplo: Para a classe de conservantes do tipo Aldeídos, como exemplo o Glutaraldeído, a

neutralização pode ser obtida utilizando a diluição, o tiossulfato e glicina.
Do frasco do produto retirar uma alíquota de 1mL e transferir para um tubo contendo 9mL
de solução salina estéril contendo o neutralizante adequado.
Para uma concentração esperada de 10⁶ UFC/mL, diluindo de 10x temos 10⁵, diluindo mais
10x temos 10^4. Se for feito um plaqueamento, seriam muitos microrganismos para contar,
por isso é preciso continuar a diluição. Uma nova diluição de 10x, tenho 10³, e uma última
diluição de 10x tenho 10² (=100, é possível contar na placa). Vou transferir 1 ml em
duplicata de alguns desses tubos para placas contendo meio de cultura sólido adequado
para o microrganismo que estiver contaminado inicialmente. Colocar sobre o 1ml
usualmente 15 a 20ml do meio de cultura adequado, homogeinizo, e levo as placas para
encubar na temperatura indicada para recuperação desses microrganismos. Decorrido o
tempo, faço a contagem do número de colônias em cada uma das placas. Repetir
incubação e contagem dos microrganismos no tempo de 7, 14 e 28 dias.

ATIVIDADE ASSÍNCRONA 7 TEÓRICA PRÁTICA (14/11)

1 - O grupo deverá selecionar um produto disponível no comércio para análise da eficácia

de conservante. Com base, nas características do produto (formulação, conteúdo em
gramas ou volume, tipo), cada membro do grupo deverá selecionar um microrganismo e
apresentar uma representação em forma de esquema do planejamento da execução do
teste de eficácia de conservantes desde o preparo do inóculo do microrganismo
(concentração, volume do inóculo), da amostra (número de unidades a serem ensaiadas,
etc) e procedimento propriamente dito (concentração de microrganismos no produto no
tempo inicial, diluente, tempo e temperatura de incubação, etc). O planejamento deverá
contemplar todos os períodos de análise da amostra.

A proposta deverá ser feita MANUALMENTE por cada membro do grupo para um dado
microrganismo, de forma que nenhum dos microrganismos mencionados na Farmacopeia
Brasileira 6a edição de 2019 deixe de ser considerado. O documento poderá ser enviado
como imagem.

2 - Para o produto disponível no comércio selecionado pelo grupo, cada membro do grupo
deverá para o microrganismo que lhe coube, SIMULAR resultados para o teste de eficácia
de conservantes, mediante o PREENCHIMENTO da Tabela a seguir.

CALCULAR o número de microrganismos/mL da suspensão no tempo inicial e de

microrganismos por mL ou grama do produto nos diferentes tempos de amostragem.

Realizar a atividade MANUALMENTE e enviar arquivo de imagem.

Período Microrganismo/mL
de
retirada Diluições da suspensão Diluições da amostra

1:10 1:102 1:103 1:104 1:10 1:102 1:103 1:104

t0

t7 - - - -

t14 - - - -

t28 - - - -

3 - Considerando os resultados obtidos para suspensão e amostra para cada

microrganismo analisado pelos membros do grupo, pede-se, com base nos critérios da
FB6ed, concluir se o produto atende às especificações de qualidade no que se refere à
eficácia do conservante? Justificar a resposta discutindo-a com base nos valores obtidos e
esperados.

Apresentar resposta MANUAL em arquivo de imagem.